臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血診斷中的臨床應(yīng)用

廖淑珍，丁凱宏，侯春江

(廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　533000)

·臨床研究·

臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血診斷中的臨床應(yīng)用

廖淑珍，丁凱宏，侯春江

(廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科533000)

摘要:目的本文就臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)診斷中的臨床應(yīng)用進(jìn)行討論和說明。方法選取百色市人民醫(yī)院2013年4月1日至2015年5月1日的1 148例臍血標(biāo)本進(jìn)行詳細(xì)討論和分析。對(duì)1 148例臍血標(biāo)本分別采用臍血血紅蛋白電泳和紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(簡稱一管法)的篩查方式。對(duì)進(jìn)行產(chǎn)前檢查的1 148例臍血標(biāo)本進(jìn)行臍血血紅蛋白電泳檢測，并觀察檢查后1 148例臍血標(biāo)本地貧類型分布及一管法的篩查溶血率。結(jié)果經(jīng)過一管法篩查后發(fā)現(xiàn)，其溶血率大于60%，1 148例臍血標(biāo)本中有402例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s,其中α-地貧的靜止型共29例，標(biāo)準(zhǔn)型108例，血紅蛋白H病共12例，Hb Bart′s水腫共5例。結(jié)論對(duì)于α-新生兒地貧的診斷使用臍血血紅蛋白電泳進(jìn)行檢測，能夠有效地進(jìn)行判斷，而且操作方便，但是對(duì)于β-新生兒地貧的診斷還需要進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞:：臍血蛋白電泳；α-新生兒珠蛋白生成障礙性貧血；β-新生兒珠蛋白生成障礙性貧血；診斷

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)屬于一種較為常見的新生兒疾病，是由于q常染色體隱性遺傳造成。經(jīng)過相關(guān)調(diào)查統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，我國地貧多發(fā)區(qū)域?yàn)閺V西，有20%的人群為地貧攜帶者，而江西、四川、臺(tái)灣及香港等地區(qū)的地貧攜帶者分別占2.7%、4.1%、5.5%及8.4%[1-3]。在我國南寧、百色等壯族人民出現(xiàn)地貧的新生兒最多，廣西出現(xiàn)地貧的遺傳疾病概率最大[4]。若不能對(duì)地貧的新生兒進(jìn)行檢查，就容易出現(xiàn)不能合理飲食、盲目進(jìn)補(bǔ)等情況[5]。一般情況下，對(duì)于地貧的新生兒使用血紅蛋白電泳及紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(簡稱一管法)的檢查方式，但是其檢查效果并不顯著。因此，對(duì)于地貧新生兒提出了采用由臍血蛋白電泳的檢查方式，其檢查效果顯著。本研究探討臍血蛋白電泳在新生兒地貧診斷中的臨床應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院2013年4月1日至2015年5月1日的1 148例臍血標(biāo)本作為研究對(duì)象，并對(duì)其資料進(jìn)行討論和分析。首先對(duì)本院同期1 148例產(chǎn)前婦女資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。1 148例產(chǎn)前婦女年齡17～39歲，平均(27.7±2.4)歲。對(duì)1 148例產(chǎn)前婦女含乙二胺四乙酸抗凝血標(biāo)本進(jìn)行一管法篩查檢測，HbA(88.22±9.42)%，HbF(1.24±0.53)%，HbA2(0.79±0.23)%，RBC脆性試驗(yàn)(58.24±18.93)%。

1.2方法

1.2.1制作臍血標(biāo)本在新生兒出生時(shí)將臍帶剪短，并在胎盤端保存2～3 mL的臍帶血，注入含EDTA-K2抗凝劑的試管中，未及時(shí)檢測標(biāo)本應(yīng)于2～8 ℃冰箱保存。

1.2.2檢驗(yàn)儀器1 148例臍血標(biāo)本進(jìn)行新生兒地貧檢驗(yàn)的儀器2014年5月以前使用美國Helena SPIFE 3000全自動(dòng)電泳儀(瓊脂糖凝膠法)，2014年5月起使用高分辨率電泳儀，法國Sebia公司生產(chǎn)的 Capillarys 2 FLEX PIERCING全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀及其配套血紅蛋白電泳試劑盒CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)。

1.2.3電泳方法使用瓊脂糖凝膠法檢測時(shí)，在儀器電泳之前需要進(jìn)行血紅蛋白液的制備，取紅細(xì)胞約250 μL，用生理鹽水洗滌后以3 000 r/min離心5 min，棄去上清液，重復(fù)此操作3次；吸干上清液后加入每管380 μL蒸餾水溶血約5 min；每管加入250 μL四氯化碳，置振蕩器上振蕩5～6 min，以3 000 r/min離心5 min，取上層血紅蛋白液備用。吸取血紅蛋白應(yīng)用液13.5 μL在點(diǎn)樣板，將標(biāo)本板、瓊脂糖凝膠片等放置好，進(jìn)行電泳測試，儀器自動(dòng)染色、脫色和干燥處理，最后進(jìn)行掃描定量分析。使用Capillarys 2 FLEX PIERCING全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀，無需制備血紅蛋白液，只需將合格的抗凝血標(biāo)本正確放入試管架，再將試管架從儀器入口導(dǎo)入，儀器自動(dòng)進(jìn)行血紅蛋白電泳分析，約30 min后全部檢測程序完成，樣品結(jié)果即顯示在工作目錄下。新生兒地貧進(jìn)行一管法篩查檢驗(yàn)時(shí)，使用米基醫(yī)療器械有限公司提供的試劑盒，并嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行測定。

1.3觀察指標(biāo)觀察經(jīng)過監(jiān)測后的1 148例臍血標(biāo)本的地貧類型分布，靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、血紅蛋白H病及Hb Bart′s水腫例數(shù)。同時(shí)觀察一管法的篩查溶血率。

1.4檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)β-地貧輕型：HbA2或HbF輕度升高，大多在4%～8%；中間型：HbF可達(dá)10%，HbA2正常或升高；重型：因β鏈生成完全或幾乎完全受到抑制，以致含有β鏈的HbA 合成減少或消失，HbF 30%～90%，HbA多低于40%或甚至為0%[5-6]。α-地貧靜止型(-α/αα)：患者無癥狀，紅細(xì)胞形態(tài)正常，出生時(shí)臍帶血中Hb Bart′s水平為1.0%～2.0%，但3個(gè)月后即消失。輕型(標(biāo)準(zhǔn)型)(-/αα)：患者無癥狀，紅細(xì)胞形態(tài)有輕度改變，如大小不等、中央淺染、異形等；紅細(xì)胞滲透脆性降低；變性珠蛋白小體陽性；HbA2和HbF水平正常或稍低[7-8]。新生兒期Hb Bart′s可達(dá)5%～15%，于生后6個(gè)月時(shí)完全消失。經(jīng)煌焦油藍(lán)溫育后，少數(shù)紅細(xì)胞內(nèi)有H包涵體。血紅蛋白電泳無異常發(fā)現(xiàn)。血紅蛋白H病：HbH在pH8.6或8.8電泳時(shí)，向陽極方向移動(dòng)，電泳速度快于HbA;有溶血性貧血的特征，骨髓中紅細(xì)胞系統(tǒng)增生極度活躍[9]。HbH明顯增高(2.5%～40.0%)，HBA2及 HbF水平正常。Hb電泳可出現(xiàn) Hb H區(qū)帶。紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)降低，紅細(xì)胞包涵體陽性；血紅蛋白Bart胎兒水腫綜合征(γ4)：Hb Bart′s占80%～100%，可有少量HbH。HbA、A2及F均缺失。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0軟件分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較以χ2檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分比表示,數(shù)據(jù)對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.11 148例臍血標(biāo)本的地貧類型分布見表1。在1 148例臍血標(biāo)本中共有154例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s，在檢出Hb Bart′s的154例臍血標(biāo)本中有29例為靜止型，占總數(shù)的18.83%，其發(fā)生率經(jīng)計(jì)算為2.526%；有108例為標(biāo)準(zhǔn)型，占總數(shù)的70.13%，其發(fā)生率經(jīng)計(jì)算為9.407%；有12例為血紅蛋白H病，占總數(shù)的7.79%，其發(fā)生率經(jīng)計(jì)算為1.045%；有5例為Hb Bart′s水腫，占總數(shù)的3.25%，其發(fā)生率經(jīng)計(jì)算為0.435%。

表1　　1 148例臍血標(biāo)本的地貧類型及分布

2.2檢出Hb Bart′s帶的154例臍血標(biāo)本父母進(jìn)行檢驗(yàn)及一管法的篩查溶血率一管法的篩查溶血率大于60%。對(duì)有β-地貧臍帶攜帶的父母進(jìn)行電泳檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)沒有異常血紅蛋白帶、HbF、HbA水平與沒有地貧的標(biāo)本HbF、HbA水平對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

地貧屬于一種嚴(yán)重危害人們身體健康的疾病，分為異常血紅蛋白病和地貧兩種。對(duì)于使用臍血蛋白電泳在新生兒地貧血的診斷中具有重要作用。Hb Bart′s被國際認(rèn)為是一種特殊的血紅蛋白，其被廣泛應(yīng)用于新生兒地貧中，在新生兒出生后，靜止型Hb Bart′s很快就會(huì)消失。全自動(dòng)毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的原理是在溶血試劑中進(jìn)行過稀釋的紅細(xì)胞樣品，會(huì)被注射到毛細(xì)管的正極端，在高壓電的作用下進(jìn)行電泳分離，然后血紅蛋白會(huì)被靠近負(fù)極端的415 nm光波檢測裝置檢測到，然后對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行記錄和分析[10-12]。對(duì)于新生兒地貧的診斷可以使用臍血蛋白電泳、一管法及紅細(xì)胞指數(shù)的檢測方法，但是從上述研究內(nèi)容中可知，對(duì)于新生兒地貧的診斷使用一管法并不合適，而紅細(xì)胞指數(shù)的檢測方法在醫(yī)學(xué)研究中沒有明確定論，因此最適合進(jìn)行新生兒地貧的診斷方法就是臍血蛋白電泳的檢測方式[13]。在電泳診斷中，其對(duì)于Hb Bart′s水腫胎和α-地貧基因的診斷率極高。貧血是由于血紅蛋白異常造成的，因此在實(shí)施電泳檢測時(shí)就會(huì)出現(xiàn)血紅蛋白異常的現(xiàn)象。雖然臍血蛋白電泳的檢測方式對(duì)于新生兒地貧的診斷準(zhǔn)確、診斷方式簡便，但是在進(jìn)行新生兒地貧的診斷過程中只對(duì)α-新生兒地貧診斷準(zhǔn)確，但在檢驗(yàn)過程中有時(shí)易出現(xiàn)假陰性和假陽性的情況，并且對(duì)于β-新生兒地貧的診斷還尚待研究[14-15]。

從以往研究結(jié)果中可知，對(duì)于血紅清蛋白采用電泳的檢查方式其中有967例患者被確診為α-地貧基因，準(zhǔn)確率為89.9%；有404例患者被確診為β-地貧基因，準(zhǔn)確率為82.9%。由此可見，對(duì)于新生兒地貧的診斷采用毛細(xì)管血蛋白電泳的診斷方式較為有效。另有研究顯示，對(duì)于α-地貧缺失型采用電泳的診斷方式準(zhǔn)確率高、簡單、重復(fù)性好。

由本研究結(jié)果可見，一管法篩查的溶血率大于60%。對(duì)有β-地貧臍帶攜帶的父母進(jìn)行電泳檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沒有異常血紅蛋白帶、HbF、HbA的量與沒有地貧的標(biāo)本HbF、HbA的量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但是，使用臍血蛋白電泳的檢測方式對(duì)于新生兒地貧的診斷準(zhǔn)確性非常高。在1 148例臍血標(biāo)本中共有154例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s，總發(fā)生率為13.410%，在檢出Hb Bart′s的154例臍血標(biāo)本中有29例患者為靜止型，占總數(shù)的18.83%,其發(fā)生率為2.526%；有108例患者為標(biāo)準(zhǔn)型，占總數(shù)的70.13%,其發(fā)生率為9.407%；有12例患者為血紅蛋白H病，占總數(shù)的7.79%,其發(fā)生率為1.045%；有5例患者為Hb Bart′s水腫，占總數(shù)的3.25%,其發(fā)生率為0.435%。

綜上所述，對(duì)于新生兒地貧的診斷可以使用臍血蛋白電泳方式，其簡便、精確，值得在臨床診斷中大力推廣和應(yīng)用。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.044

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)11-1551-02

(收稿日期：2016-01-23修回日期：2016-03-20)