免疫膠體金滲透技術檢測抗卵巢抗體的試驗研究*

李　凱，李相新，文海軍，韋僖雯，譚汝宏，江潤昌

(廣東省佛山市婦幼保健院檢驗科　528000)

·臨床研究·

免疫膠體金滲透技術檢測抗卵巢抗體的試驗研究*

李凱，李相新，文海軍，韋僖雯，譚汝宏，江潤昌

(廣東省佛山市婦幼保健院檢驗科528000)

摘要:目的建立免疫膠體金滲透技術檢測抗卵巢抗體(AOAb)的新方法。方法采用人源卵巢抗原，以膠體金顆粒結合的羊抗人 IgG為標記抗體，根據免疫膠體金技術原理，建立免疫膠體金滲透技術法檢測人血清抗卵巢抗體。分別檢測72份抗卵巢抗體陽性血清和88份健康體檢女性血清，并與酶聯吸附試驗的結果進行對比分析。結果與酶聯免疫吸附試驗的結果對比，其符合率為 88.75%，特異性為 90.91%，敏感度為86.11%。交叉試驗與重復試驗結果顯示，免疫膠體金滲透技術測定抗卵巢抗體具有穩定性和特異性。結論免疫膠體金滲透技術可以快速準確地測定血清抗卵巢抗體，便于推廣普及。

關鍵詞:免疫膠體金滲透技術；抗卵巢抗體；免疫性不孕；酶聯免疫吸附試驗

抗卵巢抗體是由感染、手術、藥物、自身免疫疾病等原因引起的一種靶抗原在卵巢顆粒細胞、卵母細胞、黃體細胞和間質細胞內的自身多靶位多克隆抗體，能夠引起卵巢的病理損傷、功能衰竭，進而導致不孕發生[1-2]。調查研究顯示，免疫性因素導致的不孕不育已成為困擾適齡生育人群的重要問題，其中10%～30%的不孕患者是由于抗卵巢抗體導致的[3]。因此，采用免疫膠體金滲透技術建立特異、敏感、快速的抗卵巢抗體檢測具有重要的意義。

1資料與方法

1.1一般資料收集2013年1～12月來佛山市婦女兒童醫院就診的門診和住院抗卵巢抗體陽性的患者72份血清作為試驗組，同時選取健康體檢女性88份血清作為對照組，共計160份，平均年齡(28.7±4.5)歲。

1.2材料

1.2.1卵巢抗原制備用生理鹽水將人卵巢組織清洗干凈，在pH7.4的0.04 mol/L的Tris-HCL緩沖液中勻漿，過濾，5 000 r/min離心15 min，棄去上清，將沉淀置于0.1 g/L的蔗糖溶液中，加入Trition X-100裂解，離心收集上清，通過抗人全血清的瓊脂糖交換樹脂sepharose 4B柱，收集清洗液即為人卵巢抗原[4]。

1.2.2試劑抗人卵巢IgG抗體酶聯免疫吸附試驗試劑盒購自深圳華康生物醫學工程有限公司。

1.2.3免疫膠體金滲透技術方法的建立取1 μg/μL人卵巢抗原液噴點在硝酸纖維素膜中央作為檢測線,其下方噴點健康人血清 IgG作為質控線，4 ℃放置2 h,37 ℃恒溫箱內烘干，冷藏備用。

1.3標本采集與檢測所有研究對象抽取空腹靜脈血2 mL，3 000 r/min，離心10 min，分離血清，保存于-80 ℃冰箱內待檢。檢測:在加樣孔上滴加封閉液 100 μL待滲入，滴加未稀釋血清標本50 μL，15 min內觀察結果。質控線與檢測線都顯色者為陽性；質控線顯色，檢測線不顯色者為陰性。

1.4統計學處理采用SPSS19.0軟件進行數據統計分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1吸收試驗將純化的人卵巢抗原與酶聯免疫吸附試驗檢出的抗卵巢抗體陽性血清20份等體積混合后用膠體金試紙條檢測抗卵巢抗體，結果均為陰性。

2.2干擾試驗血清標本中三酰甘油小于或等于25 mmol/L，總膽紅素小于或等于1 000 mmol/L，血紅蛋白小于或等于10 g/L時對檢測結果無影響

2.3對比試驗見表1。采用免疫膠體金滲透技術與酶聯免疫吸附試驗分別檢測72份抗卵巢抗體陽性血清和88份健康體檢血清，結果對比其符合率為 88.75%，特異性為 90.91%，敏感度為86.11%，兩種方法存在正向一致性(P<0.05)，一致性程度較好(Kappa>0.75)。

表1　　免疫膠體金滲透技術與酶聯免疫吸附試驗結果

2.4重復試驗及穩定性檢測隨機取出不同批次和批間的試紙條進行重復性檢測，結果顯示，保存6個月之內試紙條效果良好，無特異性產生。

3討論

近年來，隨著生殖免疫醫學的研究和發展，大量的研究數據證明，免疫因素是導致不孕和習慣性流產的重要原因，其中抗卵巢抗體是導致女性不孕較為常見的免疫因素[5]。抗卵巢抗體是自身免疫系統將卵巢組織作為抗原而引起的自身免疫反應而產生的抗體，其與卵巢組織抗原相互結合時，單核巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞的浸潤可以對卵巢造成不可逆的病理損傷，如卵母細胞數量減少、顆粒細胞變性壞死等，進而影響卵巢的正常功能，阻礙卵母細胞成熟、雌孕激素的產生減少等，導致卵巢功能衰退，甚至不孕[6]。因此，抗卵巢抗體的檢測已作為不孕不育患者的重要檢測項目，對免疫性不孕的診斷具有重要意義。

免疫膠體金滲透技術是一種以膠體金為標記物，利用抗原與抗體的特異性反應，對待測物質進行定性判斷的標記技術。通過免疫膠體金滲透技術檢測抗卵巢抗體具有操作簡單，反應快速，結果清晰，易于觀察，試劑盒可長期保存，費用較低等優點[7]。避免了酶聯免疫吸附試驗操作步驟較多、易受反應溫度和反應時間、洗板是否徹底等諸多因素的影響。在本研究中，與酶聯免疫吸附試驗結果相對比，免疫膠體金滲透技術的結果符合率為 88.75%，特異性為 90.91%，敏感度為86.11%，兩種方法存在正向一致性，而且一致性程度較好。

因此，免疫膠體金滲透技術檢測抗卵巢抗體的方法可滿足臨床快速檢測，特別適合于基層醫院不孕不育篩查的要求。

參考文獻

[1]林建華,嚴雋鴻,林其德，等.抗卵巢抗體對卵巢組織及其功能影響的實驗研究[J].中華婦產科雜志,1998,33(1):20-22.

[2]陳永珍,朱旻,張蘇.抗生殖免疫抗體和女性不孕的關系[J].解剖學雜志,2003，26(6):609-610.

[3]陳桂冰,黃紹坤,趙香生，等.免疫不孕患者自身抗體檢測結果分析[J].職業與健康，2008，24(16):1725-1726.

[4]陳金娣,黃邱朝,武建國.血清中三種Ig類抗卵巢自身抗體的測定及其臨床意義[J].臨床檢驗雜志,1994，12(S1):12-14.

[5]王逢春.抗卵巢抗體檢測在不孕癥診斷中的應用[J].醫學理論與實踐，2011，24(17):2098-2099.

[6]趙成元,王麗,王華，等.免疫性不孕抗體陽性引發不孕癥的臨床診治分析[J].中國婦幼保健，2013，28(34):4681-4682.

[7]朱文釧,孔繁德,林祥梅，等.免疫膠體金技術的應用及展望[J].生物技術通報,2010,26(4):81-87.

* 基金項目：廣東省佛山市醫學類科技攻關資助項目(201208013)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.031

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)11-1528-02

(收稿日期：2016-01-17修回日期：2016-03-27)