梅毒螺旋體4種血清學(xué)檢測(cè)方法的臨床評(píng)價(jià)

郭熾星，勞麗嫦，蔣敏慧，黎敬忠，徐碧紅，張麗敏

(1.廣東省廣州市番禺區(qū)慢性病防治站檢驗(yàn)科　511400；2.廣東省廣州市番禺區(qū)中心血站檢驗(yàn)科　511400)

·論著·

梅毒螺旋體4種血清學(xué)檢測(cè)方法的臨床評(píng)價(jià)

郭熾星1，勞麗嫦2，蔣敏慧1，黎敬忠1，徐碧紅1，張麗敏1

(1.廣東省廣州市番禺區(qū)慢性病防治站檢驗(yàn)科511400；2.廣東省廣州市番禺區(qū)中心血站檢驗(yàn)科511400)

摘要:目的對(duì)磁微粒化學(xué)發(fā)光法(CMIA)與梅毒檢測(cè)常用的其他3種方法在臨床上的應(yīng)用進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)。方法采用CMIA、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)檢測(cè)血清標(biāo)本中的梅毒螺旋體抗體，對(duì)4種方法的靈敏度和特異性進(jìn)行分析；此外對(duì)CMIA與TPPA檢測(cè)結(jié)果符合率及血清轉(zhuǎn)化盤(pán)結(jié)果進(jìn)行研究。結(jié)果以TPPA為金標(biāo)準(zhǔn)，CMIA的靈敏度和特異性分別為100.00%和99.87%，高于ELISA及RPR；CMIA與TPPA的陽(yáng)性、陰性及總體符合率為100.00%、99.88%和99.88%，由此說(shuō)明兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較一致。對(duì)血清轉(zhuǎn)化盤(pán)結(jié)果分析，CMIA可早于TPPA 14 d檢出特異性抗體。結(jié)論CMIA重復(fù)性好，靈敏度及特異性比較高，且操作簡(jiǎn)便快捷，可以取代TPPA及ELISA用于梅毒螺旋體的診斷。

關(guān)鍵詞:磁微粒化學(xué)發(fā)光法；梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)

梅毒是由梅毒螺旋體(TP)引起的一種系統(tǒng)性、慢性性傳播疾病。早期主要侵犯皮膚黏膜，晚期可累及心血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等器官[1]，傳染性及破壞性極強(qiáng)，同時(shí)還會(huì)傳染給下一代，危害極大。近年來(lái)，隨著改革開(kāi)放的深入，我國(guó)梅毒的發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)，已成為十分重要的社會(huì)和醫(yī)學(xué)問(wèn)題[2]。因此，對(duì)梅毒早期的正確診斷，及時(shí)治療顯得尤為重要[3]。由于梅毒的臨床表現(xiàn)極為復(fù)雜，而病原學(xué)檢測(cè)又受實(shí)驗(yàn)室條件的限制，因而TP的診斷主要采用血清學(xué)檢測(cè)方法，包括微粒子化學(xué)發(fā)光法(CMIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)及梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)等，其中CMIA是近年剛剛興起的一種新興技術(shù)[4]。本文采用上述4種方法對(duì)廣州市番禺區(qū)慢性病防治站6 800份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，以評(píng)價(jià)CMIA與其他幾種方法的靈敏度和特異性。

1資料與方法

1.1一般資料收集2014年7月至2015年6月廣州市番禺區(qū)慢性病防治站門(mén)診體檢者和患者及廣州市番禺區(qū)中心血站獻(xiàn)血者共6 800份血清標(biāo)本。血清轉(zhuǎn)化盤(pán)購(gòu)自SeraCare Technical Support。

1.2儀器與試劑鄭州安圖生物有限公司生產(chǎn)的AutoLumo A2000全自動(dòng)免疫分析儀及配套原裝試劑盒；北京拓普分析儀器有限責(zé)任公司的DEM-3型洗板機(jī)；ELISA試劑盒(上海科華生物工程股份有限公司)；RPR試劑盒(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司)；TPPA(日本富士瑞必歐株式會(huì)社)。

1.3方法所有臨床標(biāo)本均在血液凝固后，以5 000 r/min離心10 min采用血清進(jìn)行梅毒抗體檢測(cè)。對(duì)于AutoLumo A2000，梅毒S/CO值大于或等于1.0為陽(yáng)性。其他試劑盒判定依據(jù)試劑盒規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。以上試劑均在效期內(nèi)使用且操作時(shí)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同方法間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.14種檢測(cè)方法靈敏度及特異性分析見(jiàn)表1。在6 800份標(biāo)本中，以TPPA檢測(cè)為標(biāo)準(zhǔn)，有198例陽(yáng)性。CMIA檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)為206例，假陽(yáng)性8例；ELISA檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)為197例，漏檢1例；RPR檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)175例，漏檢23例，假陽(yáng)性316例。靈敏度為梅毒患者中陽(yáng)性例數(shù)占梅毒患者的百分比，特異性為非梅毒患者中陰性例數(shù)占非梅毒患者的百分比。RPR與CMIA、ELISA、TPPA 檢測(cè)結(jié)果之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而CMIA與ELISA、TPPA 檢測(cè)結(jié)果之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由表1可見(jiàn)，以TPPA為參考方法，CMIA的靈敏度和特異性最好，其次是ELISA，RPR最差。

表1　　4種檢測(cè)方法靈敏度及特異性分析

2.2CMIA與TPPA檢測(cè)結(jié)果符合率分析見(jiàn)表2。CMIA與TPPA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性符合率比為100.00%(198/198)，陰性符合率為99.88%(6 602/6 610)，總體符合率為99.88% (6 800/6 808)，由此說(shuō)明兩種方法具有較強(qiáng)的一致性。

表2　　CMIA與TPPA檢測(cè)結(jié)果符合率分析(n)

2.3CMIA與TPPA血清轉(zhuǎn)化盤(pán)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。對(duì)血清轉(zhuǎn)化盤(pán)進(jìn)行檢測(cè)，可以從另一方面考核試劑盒靈敏度。由表3可見(jiàn)，AutoBio在第31天即可檢測(cè)到TP特異性抗體，與TPPA相比提前 14 d。

表3　　CMIA與TPPA對(duì)血清轉(zhuǎn)化盤(pán)檢測(cè)結(jié)果

3討論

梅毒是由TP感染引起的性傳播疾病。對(duì)于梅毒可疑患者最重要的是早期、快速、準(zhǔn)確地診斷及正規(guī)、徹底地實(shí)施治療，以減少不必要的心理和身體負(fù)擔(dān)。人體感染梅毒螺旋體4～10周，血清中可產(chǎn)生兩種抗體，一種是抗類(lèi)脂的非特異性抗體，另一種是抗TP的特異性抗體。針對(duì)這兩種抗體，臨床血清試驗(yàn)也分為兩大類(lèi)：一類(lèi)為非TP血清學(xué)試驗(yàn)，另一類(lèi)為T(mén)P血清學(xué)試驗(yàn)[5]。常用的非TP血清學(xué)試驗(yàn)包括甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)、RPR；TP血清學(xué)試驗(yàn)包括TPPA、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)和TP-ELISA[6]。但是非TP血清學(xué)試驗(yàn)，如RPR檢測(cè)的是非特異性抗體，陽(yáng)性率較高，易出現(xiàn)假陽(yáng)性及假陰性反應(yīng)，因此主要用于初篩試驗(yàn)和療效監(jiān)測(cè)[7]。TPPA和TPHA手工操作較為繁瑣，此外肉眼判斷結(jié)果存在一定誤差，不適合大批標(biāo)本篩查[8]。對(duì)于ELISA來(lái)講，標(biāo)本量較多時(shí)，難以保證加樣及反應(yīng)時(shí)間的一致性。

近年來(lái)，全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光儀在梅毒檢測(cè)中的應(yīng)用逐漸受到重視[9]。而安圖公司所開(kāi)發(fā)的AutoLumo A2000全自動(dòng)免疫分析儀采用微粒子化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)測(cè)定梅毒抗體，其原理為待測(cè)標(biāo)本與包被有重組抗原(TpN15、TpN17和TpN47)的磁微粒混合后，標(biāo)本中的抗體同磁微粒上包被的抗原結(jié)合，通過(guò)洗滌程序后，加入底物，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液的發(fā)光值即可反映標(biāo)本中TP抗體水平，且該方法可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)自動(dòng)化，靈敏度和特異性均較高，分別為100.00%和99.68%，高于RPR及ELISA[10]。有研究表明，CMIA的敏感度和特異性均優(yōu)于ELISA[11]。李囡等[12]研究結(jié)果亦表明，CMIA檢測(cè)梅毒的特異性為99.31%，敏感度為100.00%,與本研究結(jié)果相類(lèi)似。對(duì)CMIA進(jìn)行血清轉(zhuǎn)化盤(pán)研究，AutoBio可在第31天檢出陽(yáng)性，比TPPA提前14 d，這對(duì)預(yù)防控制梅毒的傳播和及時(shí)有效的治療具有十分重要的意義。另外，CMIA應(yīng)用于血站血液檢測(cè)可以提高血液制品的安全性。

綜上所述，鑒于CMIA重復(fù)性好，靈敏度及特異性比較高，且操作簡(jiǎn)便快捷，可以取代TPPA及ELISA用于TP的血清學(xué)診斷。

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Clinical evaluation and analysis of four serological tests of syphilis

GUOChixing1,LAOLichang2,JIANGMinhui1,LIJingzhong1,XUBihong1,ZHANGLimin1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChronicDiseasePreventionStationofPanyuDistrict,Guangzhou511400,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,BloodCentreofPanyu,Guangzhou511400,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze and evaluate the magnetic particles of chemiluminescence (CMIA) and other 3 methods for syphilis detection in the clinical application.MethodsBy CMIA,enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),rapid plasma reagent (RPR) and Treponema pallidum particle agglutination assay (TPPA) methods,treponema pallidum antibodies in serum samples were detected,and the sensitivity and specificity of these methods were analyzed.In addition,the coincidence rate and the serum conversion panel of CMIA and TPPA were compared in the study.ResultsTaking TPPA as standard,the sensitivity and specificity of CMIA were 100.00% and 99.87% respectively,which were higher than ELISA and RPR.The positive,negative and overall coincidence rate of CMIA and TPPA were 100.00%,99.88% and 99.88%,showing that CMIA had a good consistance with TPPA.Considering the results of the serum conversion panel,specific antibodies detected by CMIA appeared 14 days earlier than TPPA.ConclusionCMIA has good repeatability,high sensitivity and specificity,and the operation is simple and convenient,which could replace the TPPA and ELISA for the diagnosis of syphilis.

Key words:CMIA;TPPA;ELISA;RPR

作者簡(jiǎn)介：郭熾星，男，副主任技師，主要從事性病和結(jié)核病檢驗(yàn)研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.014

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)11-1484-02

(收稿日期：2015-12-22修回日期：2016-02-15)