熱激條件下家蠶血液30K蛋白磷酸化研究

李　娜　賈漫麗　楊貴明　李季生,2*

(1.承德醫(yī)學院蠶業(yè)研究所，河北省高校特產(chǎn)蠶桑應用技術研發(fā)中心，承德067000；2.浙江大學動物科學學院，杭州310029)

熱激條件下家蠶血液30K蛋白磷酸化研究

李娜1賈漫麗1楊貴明1李季生1,2*

(1.承德醫(yī)學院蠶業(yè)研究所，河北省高校特產(chǎn)蠶桑應用技術研發(fā)中心，承德067000；2.浙江大學動物科學學院，杭州310029)

摘要：本試驗旨在研究熱激條件下家蠶血液磷酸化蛋白的表達變化，為深入研究其功能提供參考。試驗設對照組和熱激組，每組選取五齡第3天家蠶幼蟲各30頭(雌雄各占1/2)，在40 ℃條件下分別熱激處理0、10 min，然后利用雙向電泳、Pro-Q Diamond染色、質(zhì)譜技術對表達差異的磷酸化蛋白進行研究。結(jié)果表明：1)銀染圖譜30 ku區(qū)積累了大量蛋白，經(jīng)Pro-Q Diamond染色后發(fā)現(xiàn)它們屬于磷酸化蛋白。2)經(jīng)過多次取樣和質(zhì)譜鑒定，最終獲得了3個30K蛋白，分別是PBMHPC-6、PBMHPC-19和PBMHPC-12。3)熱激處理10 min后，3個30K蛋白的表達量與熱激處理0 min相比顯著上調(diào)(P<0.05)。由此得出，五齡家蠶血液富含30K蛋白，它們不僅在脂質(zhì)運輸方面承擔著重要的角色，而且很可能參與熱激應答。

關鍵詞：熱激；家蠶；血液；30K蛋白；磷酸化；雙向電泳

蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是廣泛存在于生物體內(nèi)各種組織細胞中的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式，機體大約30%的蛋白質(zhì)可發(fā)生不同形式的磷酸化[1]，它參與和調(diào)控生物體內(nèi)的許多生命活動。生物體通過蛋白質(zhì)的磷酸化與去磷酸化，調(diào)控信號轉(zhuǎn)導、基因表達、細胞周期等諸多細胞過程。研究表明，植物體內(nèi)某些蛋白質(zhì)的磷酸化與溫度脅迫存在一定的關系，比如葉綠體D1蛋白和光系統(tǒng)Ⅱ蛋白等。因此，研究蛋白質(zhì)的磷酸化不僅可以了解其對蛋白質(zhì)功能的影響，而且還可以幫助我們更加深入地理解生命系統(tǒng)在分子水平的調(diào)控狀況[2]。……