腸內營養乳劑對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后免疫功能與營養狀態的影響

林　琳，邰　賀，朱紅霞，趙明光，馮　妍

(1. 武警遼寧省總隊醫院，遼寧 沈陽 110034；2. 沈陽軍區總醫院，遼寧 沈陽 110004)

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腸內營養乳劑對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后免疫功能與營養狀態的影響

林琳1，邰賀1，朱紅霞1，趙明光2，馮妍1

(1. 武警遼寧省總隊醫院，遼寧 沈陽 110034；2. 沈陽軍區總醫院，遼寧 沈陽 110004)

[摘要]目的探討腸內營養乳劑瑞先對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后營養狀態與免疫功能的影響。方法將成功建立肝硬化肝癌模型大鼠26只隨機分為觀察組與對照組，每組13只。2組均應用Higgins法行大鼠肝部分切除術，觀察組術后6 h灌胃腸內營養乳劑瑞先,連用7 d；對照組給予普通飼料喂養，不予腸內營養液。比較2組大鼠術前及術后7 d免疫功能與營養狀態。結果術后2組血清TG、TC、LDL、Hb水平均較術前明顯降低(P均<0.05)，但觀察組各指標水平明顯高于對照組(P均<0.05)。術后2組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯低于術前(P均<0.05)，CD8+明顯高于術前(P均<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯高于對照組(P均<0.05)，CD8+明顯低于對照組(P均<0.05)。結論肝硬化肝癌大鼠行肝部分切除術后給予腸內營養乳劑有助于改善大鼠的營養狀況與免疫功能。

[關鍵詞]肝硬化；肝癌；腸內營養；營養狀況；免疫功能

肝硬化和肝癌均可導致機體營養不良與免疫力低下，二者同時存在時機體營養不良和免疫功能低下更為明顯[1]。手術是治療肝硬化肝癌的重要手段，但術后由于營養不良與免疫力低下，極易發生急性肝衰竭和腫瘤復發[2]，故改善肝硬化肝癌患者圍手術期的營養與免疫狀況對于患者的預后是十分重要的。圍手術期營養支持已證實能很好地改善營養狀態與免疫功能狀態[3]，但營養支持對免疫功能影響的研究相對較少。因此本實驗通過建立肝硬化肝癌大鼠模型，觀察了肝硬化肝癌大鼠術后給予腸內營養支持對免疫功能與營養狀況的影響，旨在為臨床選擇合理營養治療方法提供依據。

1實驗資料

1.1實驗動物40只Wistar大鼠，雌雄不限，周齡8～10周，體質量230～250 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物合格證號：SCXK-(京)2007-0001。飼喂普通飼料[購自北京科澳協力飼料有限公司，合格證號：京動(2000)第015號]。

1.2試劑與儀器主要試劑：瑞先，華瑞公司生產，規格：500 mL/瓶。TG、TC、LDL檢測所需7020全自動生物化學分析儀為日本日立公司產品，試劑盒為上海復星長征有限公司產品。Hb采用氰化高鐵法測定，淋巴細胞分離液(Ficoll-hypque)為天津TBD公司產品，IgGrl-FITC/IgGr2a-PE、CD3-FITC/ CD4-PE、CD3-FITC/ CD8-PE和FACS Lysing Solution溶血素為BD公司產品； FACSCalibur流式細胞儀、AxSYM型全自動免疫發光分度儀為美國雅培公司產品；雙色熒光試劑盒為美國BD公司產品。NFS-221S型超低溫冰箱由中國海爾集團提供。

1.3腸內營養乳劑的配置按非蛋白質熱量171.5 kcal/(kg·d)(1 cal=4.2 J)、氮1.22 g/(kg·d)，熱氮比為140∶1配置營養液(華瑞公司產品)。營養乳劑均現用現配，4 ℃避光保存。

1.4肝硬化肝癌大鼠模型的建立大鼠皮下注射60%四氯化碳(美國Sigma公司產品)油溶液0.13 mL/(100 g·5 d)，3%～5%乙醇代替飲用水，40 d后停止用藥，動物穩定1周后在B超引導下將濃縮的Walker-256瘤細胞混懸液(購于中國醫科大學細胞生物學教研室)注入大鼠肝中葉，取種植瘤直徑0.5～0.8 cm的造模成功后大鼠用于實驗研究[2]。

1.5實驗動物分組與處理將成功造模的26只大鼠隨機分為觀察組與對照組，每組13只，人工控溫 20～26 ℃，12 h光照，12 h黑暗，顆粒飼料喂養，自由飲水取食。2組均于術前最后一次進食后禁食水10 h，無菌條件下抽取大鼠尾緣靜脈血送檢，并立即行肝臟腫瘤切除術, 按照Higgins法切除帶瘤的肝中葉，縫合切口后，用75%乙醇消毒切口，定期換藥。手術后6 h，觀察組給予營養乳劑 120 mL/kg灌胃，連續7 d；對照組給予普通飼料喂養。2組最后一次喂養后禁食水10 h，無菌條件下抽取大鼠尾緣靜脈血送檢。

1.6檢測項目

1.6.1血清TG、TC、LDL、Hb水平抽取的靜脈血用高速離心機3 000 r/min離心5 min，用吸管將上層血清吸出，隨后放入容積為1.5 mL的離心管中，并立即放于-30 ℃冰箱中冷凍保存，在1 周內按試劑盒說明檢測TG、TC、LDL、Hb水平。

1.6.2免疫指標水平將抽取的靜脈血3 mL注入玻璃試管中，靜置10 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清在-70 ℃超低溫冰箱內保存待檢。使用流式細胞術細胞計數儀檢測外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平，用淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離外周血有核細胞，染色標記30 min，棄去上清液，沖洗2次后，采用免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白IgG、IgM、IgA水平。

2結果

2.12組手術前后營養狀況比較術前2組營養狀態比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。術后2組血清TG、TC、LDL、Hb水平均較術前明顯降低(P均<0.05)，但觀察組各指標水平明顯高于對照組(P均<0.05)。見表 1。

表1　2組手術前后營養情況比較±s)

注：①與術前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

2.22組手術前后細胞免疫功能比較術前2組血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異均無統計學意義(P均>0.05)；術后2組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于術前(P均<0.05)，CD8+明顯高于術前(P均<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于對照組(P均<0.05)，CD8+明顯低于對照組(P均<0.05)。見表2。

表2　2組手術前后細胞免疫功能比較

注：①與術前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

2.32組手術前后體液免疫功能比較術前2組血清IgG、IgM、IgA水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)；術后2組IgG、IgM、IgA水平均明顯低于術前(P均<0.05)，但觀察組各指標水平均明顯高于對照組(P均<0.05)。見表3。

表3　2組手術前后體液免疫功能比較

注：①與術前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

3討論

肝硬化肝癌患者術后均有明顯的營養不良和免疫功能低下，而進行營養支持治療可以改善患者的營養狀況和免疫功能。以往研究認為腹部中等強度手術后6 h即可測得復合運動波，小腸在術后6～8 h就能接受腸內物質的輸入，這使早期經腸營養成為可能。目前將術后6～24 h給予腸內營養定義為早期腸內營養，早期腸內營養可促進胃腸道功能恢復，有利于營養物質的吸收，防治腸道菌群移位，保證機體內環境穩定[4]。

Hb、TG、TC、LDL是反映人體營養狀態的重要指標，王佳等[5]研究表明TC水平能比血漿白蛋白更敏感地對營養狀況做出評價，即低血漿TC水平是一個評價患者營養缺乏與營養不良的敏感指標，其可能原因為：①膽固醇的半衰期較短，約8 d，血清白蛋白約為20 d，血紅蛋白約為120 d。②疾病早期便會出現低血漿TC水平[6]。但目前尚無一項指標能夠對營養狀況做出敏感的診斷與預測營養不良的發生，需要綜合多個指標來評價營養狀況[5，7]。本實驗結果顯示，術后2組血清TG、TC、LDL、Hb水平均較術前明顯降低，但觀察組各指標水平明顯高于對照組，與王紹山等[3]實驗結果相同。

機體免疫功能主要由T、B淋巴細胞控制。細胞免疫是T淋巴細胞參與的一種重要免疫反應，惡性腫瘤患者往往免疫功能受到嚴重抑制，表現為外周血中CD3+、CD4+減少， CD8+增多，CD4+/CD8+比例降低[8]。IgG、IgM是人體內重要的免疫球蛋白，在體液免疫過程中發揮重要作用[9]。本實驗結果顯示，術后2組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯低于術前，CD8+明顯高于術前(P均<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯高于對照組，CD8+明顯低于對照組。與賀德等[2]實驗結果相同。

綜上所述，腸內營養可明顯改善肝硬化肝癌大鼠術后的營養狀況與免疫功能，但其具體機制仍不明確，免疫功能與營養狀態是否存在一定的相關性還需要進一步研究。

[參考文獻]

[1]梁力建,羅時敏,賴佳明. 術后應用腸外營養對肝細胞癌合并肝硬化病人的影響[J]. 中華肝膽外科雜志,2005,11(11):758-762

[2]賀德,金玉珍,黃林,等. 不同營養方式對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術后免疫功能的影響[J]. 國際醫藥衛生導報,2005,14(15):13-17

[3]王紹山,胡人杰,王海龍,等. 營養損傷影響肝癌荷瘤小鼠體內炎性微環境的研究[J]. 吉林醫學, 2013,23(9):432-435

[4]王輝. 胃癌根治術后早期腸內營養及護理研究[J]. 當代護士：專科版,2010(7): 89-91

[5]王佳，洪忠新. 評估住院患者營養缺乏性營養不良敏感性指標的研究[J]. 中國全科醫學，2011，14(7):2156-2158

[6]Naugler C,Sidhu D. Break the fast Update on patient preparation for cholesterol testing[J]. Can Fam Physician，2014,60(10):895-897

[7]常翠青,陳志民,劉曉鵬,等. 中國優秀運動員的營養狀況[J]. 營養學報,2005,27(5):270-273

[8]謝天鵬,趙雍凡,劉華英,等. 早期腸內營養對食管癌術后全身炎性反應及細胞免疫功能的影響,2005,26(1):18-20

[9]李曉輝,李軍民,馮秋霞,等. 圍手術期腸內營養支持對食管癌患者術后免疫功能的影響[J]. 中國醫學創新,2011,8(8):57-59

Effect of enteral nutrition emulsion on immune function and nutritional status after partial hepatectomy in rats with liver cirrhosis

LIN Lin1, TAI He1, ZHU Hongxia1, ZHAO Mingguang2, FENG Yan1

(1.Armed Police Corps Hospital of Liaoning Province, Shenyang 110034, Liaoning, China; 2.The General Hospital of Shenyang Military, Shenyang 110004, Liaoning, China)

Abstract:Objective It is to investigate the influence of enteral nutrition emulsion on immune function and nutritional status after partial hepatectomy in rats with liver cirrhosis. Methods 26 rats of liver cirrhosis model which were established successfully were randomly divided into observation group and the control group, 13 cases in each group. Higgins method was used in the 2 groups for partial hepatectomy in rats. After operation, the rats were administered with oral enteral nutrition emulsion and regular diet in the observation group, whereas with regular diet only in the control group. The indexes of immune function and nutritional status before and after operation between two groups were compared. Results The levels of hemoglobin (Hb), total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein (LDL) were significantly lower after operation in the two groups (all P<0.05), but the indexes of the observation group were markedly higher than that of the control group (all P<0.05). The concentrations of CD3+, CD4+, IgG, IgM, IgA and CD4+/CD8+ were significantly lower after operation (all P<0.05) and the concentration of CD8+ were significantly higher (all P<0.05) in the two groups, and the concentration of CD3+, CD4+, IgG, IgM, IgA and CD4+/CD8+ in the observation group were significantly higher, and the concentration of CD8+ was significantly lower than those in the control group (all P<0.05). Conclusion After partial hepatectomy, the enteral nutrition emulsion can help to improve the nutritional status and immune function in rats with liver cirrhosis.

Key words:hepatic cirrhosis; hepatoma; enteral nutrition; nutritional status; immune function

[收稿日期]2015-08-16

[中圖分類號]R-332

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)06-0601-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.06.009

[基金項目]國家自然科學基金項目(81471213)

[作者簡介]林琳，女，護師，主要從事腫瘤患者營養護理研究。[通信作者]邰賀，E-mail: www.tai_he83@126.com