半滑舌鰨乙酰輔酶A羧化酶α基因全長cDNA分子克隆及飼料脂肪水平對其在肝臟中表達的影響

張夏青　許建和,2　潘　茜　易樂飛　彭永興　申　欣

閻斌倫1,2　高　煥1,2　王雯祥1　程漢良1,2*

(1.淮海工學院，連云港222005；2.江蘇省海洋生物產業技術協同創新中心，

連云港222005；3.浙江省淡水水產研究所，湖州313001)

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半滑舌鰨乙酰輔酶A羧化酶α基因全長cDNA分子克隆及飼料脂肪水平對其在肝臟中表達的影響

張夏青1許建和1,2潘茜3易樂飛1彭永興1申欣1

閻斌倫1,2高煥1,2王雯祥1程漢良1,2*

(1.淮海工學院，連云港222005；2.江蘇省海洋生物產業技術協同創新中心，

連云港222005；3.浙江省淡水水產研究所，湖州313001)

摘要：本試驗采用反轉錄PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速擴增(RACE)技術從半滑舌鰨肝臟中克隆了乙酰輔酶A羧化酶α(ACC1)基因全長cDNA，并采用實時熒光定量PCR方法對半滑舌鰨ACC1基因在腸道、肝臟、肌肉、卵巢、脾臟、全腦、腎臟、心臟、腸系膜脂肪等組織中的表達進行了研究；此外，還研究了飼料脂肪水平對半滑舌鰨肝臟中ACC1基因表達的影響。結果表明：1)半滑舌鰨ACC1基因cDNA全長7 811 bp，含1個7 074 bp的開放閱讀框，編碼2 357個氨基酸，ACC1蛋白計算分子質量為266 ku，等電點為6.42。半滑舌鰨ACC1氨基酸序列保守位點包括1個ATP結合位點(Gly(316)～Gly(321))、1個生物素結合位點(Val(785)-Met(786)-Lys(787)-Met(788))、1個輔酶A結合位點(Ser(1969)～Val(1995))。此外，半滑舌鰨ACC1基因存在可變剪接，形成另外2個同工型(isoforms)，與分子質量為266 ku的ACC1相比，分別少8和15個氨基酸。2)半滑舌鰨所有組織中均檢測到ACC1基因的表達，肝臟和全腦中ACC1 mRNA相對表達量顯著高于其他組織(P<0.05)，分別為2.67和2.53；腸道、腸系膜脂肪和卵巢中次之，分別為1.14、1.10和0.97；腎臟中最低，僅為0.48。3)與對照組(未添加魚油組)相比，3.5%魚油組肝臟中ACC1 mRNA相對表達量顯著降低(P<0.05)；7.0%和10.0%魚油組肝臟中ACC1 mRNA相對表達量進一步降低，顯著低于3.5%組和對照組(P<0.05)，同時10.0%魚油組低于7.0%魚油組(P>0.05)。綜上，本試驗克隆出了半滑舌鰨ACC1基因的全長cDNA，并得出半滑舌鰨ACC1蛋白的主要功能位點為ATP結合位點、生物素結合位點、輔酶A結合位點，與其他脊椎動物相比基本保守。……