建立一種N-ras突變檢測的“凸背”引物熒光PCR新技術(shù)

金霆 費政芳

建立一種N-ras突變檢測的“凸背”引物熒光PCR新技術(shù)

金霆 費政芳★

目的 建立一種簡便、省時、有效的N-ras突變檢測的“凸背”引物熒光PCR新技術(shù)。

方法 對比 “凸背”引物熒光PCR新技術(shù)和Sanger測序法：通過對混有不同比例的N-ras基因熱突變G13D（GGT＞GAT）質(zhì)粒的樣本進行對照檢測來比較兩者的靈敏度；對97例急性髓細胞白血病（AML）患者的外周血的DNA進行N-ras的G13D突變檢測，統(tǒng)計兩者的符合率。 結(jié)果 “凸背”引物熒光PCR新技術(shù)能檢測出混有5%突變質(zhì)粒型的樣本，其靈敏度達5%，高于Sanger測序法的10%～20%。在97例AML患者的外周血的DNA中，“凸背”引物熒光PCR新方法和Sanger測序法檢測到N-ras基因G13D突變分別為19例和18例，符合率達94.7%。 結(jié)論 “凸背”引物熒光PCR新技術(shù)比測序法更為快速、簡單，有更高的靈敏度，容易實現(xiàn)。

N-ras；“凸背”引物熒光PCR新技術(shù)；Sanger測序法

急 性 髓 細 胞 白 血 病 （acutemyelocytic leukemia，AML）是由多能干細胞或已輕度分化的前體細胞核型發(fā)生突變所形成的造血系統(tǒng)的克隆性惡性疾病［1-2］，是一個具有高度異質(zhì)性的疾病群。被克隆的白血病細胞，會產(chǎn)生凋亡遇阻、分化阻礙、增殖失控等問題，讓細胞停滯在不同的發(fā)育階段［3］。AML占成年人急性白血病的70%左右，是惡性腫瘤中死亡率較高的疾病之一。其年發(fā)生率約為4.6/10萬人，男性略多于女性。越來越多研究表明，AML的發(fā)生與基因突變有關(guān)，其中與N-ras的基因突變［4-5］的關(guān)系最大。N-ras是ras基因家族中的一員，其突變導(dǎo)致Ras-GTP處于持續(xù)激活狀態(tài)，引起細胞惡性增殖和轉(zhuǎn)移。當(dāng)Ras蛋白接受信號刺激或自身突變活化后，主要通過刺激兩條途徑 （Raf/Mek/Erk增殖和 PI3K/Akt抗凋亡）上的蛋白磷酸化來發(fā)揮作用，進而導(dǎo)致AML的發(fā)生［6］。……