類風濕性關節炎患者Th17細胞相關細胞因子的臨床表達

陸揚光 余志輝 鄭明江

·論著·

類風濕性關節炎患者Th17細胞相關細胞因子的臨床表達

陸揚光 余志輝 鄭明江

目的 探討 Th17細胞相關細胞因子白介素-17(IL-17)、白介素-6(IL-6)、白介素-23(IL-23)在類風濕性關節炎(RA)發病中的表達。方法 用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測活動組(35例RA患者)、緩解組(35 例RA 患者)及對照組(30 例健康人)血清 IL-17、IL-6、IL-23的水平, 并分析它們與活動度和實驗室指標的關系。結果 活動組和緩解組血清IL-23、IL-6水平均明顯高于對照組(P＜0.05), 活動組與緩解組相比, 差異有統計學意義(P＜0.05)。活動組與緩解組血清IL-17水平均高于對照組(P＜0.05),但緩解組與對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。RA患者血清IL-17、IL-6和IL-23水平之間互為正相關關系。結論 Th17細胞相關細胞因子IL-17、IL-6、IL-23均在RA 的發生、發展過程中起著重要作用, 并可作為RA活動參考指標。

類風濕性關節炎；Th17細胞；白介素-17；白介素-6；白介素-23

類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis , RA)是一種以關節慢性炎癥和骨質破壞為主的自身免疫性疾病, 其特征是手、足小關節的多關節、對稱性、侵襲性關節炎癥, 經常伴有關節外器官受累及血清類風濕因子陽性, 可以導致關節畸形甚至功能喪失。一般認為, 該病成因可能與遺傳、感染、性激素等有關, 也有研究認為自身免疫功能失調及細胞因子表達過度在RA發病中也占有重要地位。有證據表明：一種T細胞的新亞型(Th17細胞)分泌的IL-17、IL-6、IL-23 等多種細胞因子, 可能參與了多種自身免疫疾病發生過程［1-4］。本研究旨在分析RA患者體內Th17細胞分泌的多種細胞因子的表達水平, 以期對臨床防控該病帶來幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有RA 病例均來自佛山市第五人民醫院2013年1～12月住院患者及門診患者, RA病例根據 DAS28評分(28 joint disease activity score, DAS28)分為活動組和緩解組, 同時從體檢中心選取年齡、性別匹配人群作為對照組。活動組：35 例, 其中男6例, 女29 例, 平均年齡 (49.6±15.2)歲, DAS28＞5.1分；緩解組：35 例, 其中男8例, 女27例,平均年齡(46.2±13.4)歲, DAS28＜2.6分；對照組：30 例, 其中男 7 例, 女23 例, 平均年齡(47.5±11.2)歲。診斷均符合《1987 年美國風濕病協會RA分類診斷標準》。

1.2 排除標準 近期感染、腫瘤、血液系統疾病和其他自身免疫性疾病患者為本研究排除標準。

1.3 實驗儀器及耗材 為保證條件的一致性及可比性, 要求所有實驗對象均在入院后治療前早晨空腹坐姿抽取靜脈血作檢測標本, 送檢血樣必須在2 h內分離血清待檢, 不能立即檢測者, 標本應置于-40℃冰箱待測并注意不得反復凍融；實驗儀器采用鄭州安圖全自動酶標分析儀, 對應耗材為廠家原廠配套試劑, 測試過程中同時選擇高低兩個質控品以保證檢驗結果的準確性。

1.4 指標測定 血清IL-17、IL-6、IL-23水平均采用ELISA試劑盒(上海雅吉生物科技有限公司)進行測定, 操作過程嚴格按試劑盒說明書進行。其他實驗室常規的指標RF、ESR及CRP均由佛山市第五人民醫院檢驗科完成。所有實驗方法、目的及臨床價值均告知患者并簽訂知情同意書, 經本院倫理道德委員會討論認為符合倫理道德標準要求。

1.5 統計學方法 采用SPSS13.0統計學軟件對每組數據進行計算分析。計量資料用均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RA患者血清Th17細胞相關細胞因子水平 RA患者(活動組+緩解組)和對照組血清IL-17、IL-6、IL-23水平差異有統計學意義(P＜0.05)；活動組和緩解組血清IL-23、IL-6水平均明顯高于對照組(P＜0.05)；另外, 活動組與緩解租相比, 差異有統計學意義(P＜0.05)；活動組與緩解組、對照組相比較, 血清IL-17水平明顯升高, 差異均有統計學意義(均 P＜0.05), 但緩解組與對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

2.2 RA患者血清Th17細胞相關細胞因子與各指標的相關分析 RA患者(活動組+緩解組)血清IL-23水平與DAS28評分和ESR具有一定相關性(P＜0.05), 而與RF和CRP無相關(P＞0.05)；RA患者血清 IL-6水平與DAS28評分、RF、CRP和ESR均具有一定相關性(P＜0.05)；RA患者血清IL-17水平與DAS28評分、CRP和ESR均具有一定相關性(P＜0.05), 而與RF無相關(P＞0.05)。見表2。

表1 RA組和正常組血清Th17細胞相關細胞因子水平( x-±s, pg/ml)

表2 RA患者血清Th17細胞相關細胞因子與各指標的相關性

2.3 RA患者血清Th17細胞相關細胞因子之間的相關分析RA 患者外周血IL-23與 IL-17和IL-6水平均呈顯著正相關關系(r 值分別為 0.929和0.950, P均為0.000), IL-17和IL-6水平之間也呈明顯正相關關系(r值為0.969, P為0.000)。見圖1。

圖1 RA患者血清Th17細胞相關細胞因子之間的相關分析

3 討論

RA是一種慢性系統性自身免疫性疾病, 其主要臨床表現為周圍關節滑膜炎, 有持續及反復發作的特點, 在我國的流行病學調查中顯示, RA 的患病率約為 0.32%～0.36%, 嚴重影響患者工作能力和生活質量。人們認為RA 發病可能與遺傳、感染、環境以及免疫因素有關, 但是其確切發病機制還不清楚。多種炎癥介質和細胞因子的異常表達在RA的發病過程中可能發揮重要作用, 致炎細胞因子和抗炎細胞因子之間失衡的程度也決定了炎癥嚴重性和范圍［5］。近年研究發現：Th17細胞越來越被認為是眾多自身免疫炎癥性疾病發病機制中的關鍵因素, 其分泌的細胞因子在活動期及緩解期患者中均有不同程度的表達, 結論與文獻報道相近［6］。Th17細胞可以產生多種細胞因子參與RA的發生、發展過程, 如 IL-17是Th17細胞主要分泌的細胞因子, 不但能誘導滑膜細胞產生金屬蛋白酶, 抑制軟骨基質的形成, 而且能促進滑膜血管的增生, 形成血管翳, 加重關節的破壞［4］；IL-23能作用于Th17細胞, 促進細胞的分化、擴增以及相關細胞因子的分泌, IL-23/Th17軸在自身免疫性疾病中發揮著重要的作用［5］；IL-6能有效的啟動Th17細胞的分化和增殖［6］。大量研究都集中在RA患者關節液中Th17細胞及其相關因子的探討［7］, 關于RA患者外周血中Th17細胞相關細胞因子的臨床意義和應用則研究較少。

本研究對Th17細胞相關的重要細胞因子IL-17、IL-6及IL-23在RA患者和正常對照患者中進行檢測并分析。結果顯示：RA患者組(活動組和緩解組)較正常對照組血清IL-17、IL-6及IL-23水平均顯著增高, 這與其他學者的研究結果類似［8-10］, 提示 IL-6、IL-23 可能參與了 RA 的疾病發生發展及炎癥反應過程。

相關分析顯示：RA患者血清 IL-6水平與DAS28評分、RF、CRP和ESR均具有一定相關性；RA患者血清 IL-17水平與DAS28評分、CRP和ESR均具有一定相關性, 說明IL-6 和IL-17與病情活動有關, 可能作為 RA病情程度檢測的指標, 這與國外相關研究結論是一致的。值得一提的是：本研究結果顯示血清IL-23水平與DAS28評分和ESR具有一定相關性, 而與RF和CRP無關, 說明 IL-23 細胞因子水平的升高在一定程度上可以反映疾病活動狀態, 這與潘禹錚［11］研究 RA 患者的 IL-23 與 ESR、CRP 及 DAS28評分等均無明顯相關關系的結果不同, 這也可能是因為病例數不同、患者所處活動期不同所致, 還需要進一步研究證實。

RA 患者外周血IL-23 水平、IL-17 水平、IL-6 水平之間互為明顯正相關關系, 表明三項指標的增高可能有一定的因果關系, 提示在 RA 病情的發生發展過程中, 三項指標與RA 患者的病情密切相關, 提示臨床醫生在診療該類患者時,參考上述細胞因子水平, 有助于 RA 患者病情的診療的分期。

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Clinical expressions of related cytokines of Th17 cell in rheumatoid arthritis patients

LU Yang-guang, YU Zhi-hui, ZHENG Ming-jiang.Foshan City the Fifth People’s Hospital, Foshan 528211, China

Objective To investigate expressions of related cytokines interleukin-17 (IL-17), interleukin-6 (IL-6), interleukin-23 (IL-23) of Th17 cell in rheumatoid arthritis (RA).Methods Enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA) was applied in serum IL-17, IL-6, IL-23 levels in activity group (35 RA patients), relief group (35 RA patients), and control group (30 healthy people).Analysis was made on their relationship with activity and laboratory index.Results The activity group and relief group had much higher serum IL-23 and IL-6 levels than the control group (P＜0.05), and the difference between activity group and relief group had statistical significance (P＜0.05).The activity group and relief group had much higher serum IL-17 level than the control group (P＜0.05), while the difference between relief group and control group had no statistical significance (P＞0.05).Serum IL-17, IL-6, and IL-23 levels had positive correlations with every other one in RA patients.Conclusion Related cytokines IL-17, IL-6, IL-23 of Th17 cell all play important roles in occurrence and development of RA, and those can act as referring indicators for RA activity.

Rheumatoid arthritis; Th17 cell; Interleukin-17; Interleukin-6; Interleukin-23

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.001

2015-04-13］

佛山市衛生局課題(項目編號：2014097)

528211 佛山市第五人民醫院