疾病預防控制領域檢驗中膠體金免疫結合試驗的應用探析

趙春

疾病預防控制領域檢驗中膠體金免疫結合試驗的應用探析

趙春

探析膠體金免疫結合試驗在疾病預防控制領域檢驗中的價值。分別將膠體金免疫結合試驗分別應用在不同細菌性疾病、病毒性疾病、寄生蟲疾病及其他微生物疾病檢驗中, 分析其在不同病菌中的應用效果。膠體金免疫結合試驗在多種疾病中具有明顯的檢測結果, 可為疾病診斷與治療方案的制定提供重要信息。膠體金免疫結合試驗在多種疾病預防、檢驗與控制中應用效果良好。

疾病預防控制；檢驗；膠體金免疫結合試驗

膠體金免疫結合試驗將酶免疫結合試驗作為基礎, 是一種固相標記免疫測定技術, 優勢明顯, 如有單份測定、得出結果時間短、操作簡便等多種優點, 并將商品試劑排除, 在測定中不需任何儀器設備輔助, 幾分鐘后就可得出結果, 是目前臨床廣泛應用的一種檢測技術［1］。本院為分析在疾病預防控制領域檢驗中膠體金免疫結合試驗的應用價值, 將該技術應用于不同細菌性、病毒性疾病檢驗中。現報告如下。

1 膠體金免疫結合試驗原理

膠體金免疫結合試驗技術的檢測原理分析：以微孔濾膜為檢測載體, 對已知抗原或抗體進行包被, 隨后把待檢標本依次加入, 在濾膜的毛細管作用下, 使標本中的抗原或抗體與膜上包被的抗原與抗體充分結合, 最后經膠體金結合物達到本次檢測目的。按照不同的檢驗裝置可將其分為GIFA(金免疫滲濾試驗)與GICA(金免疫層析試驗)。

2 在疾病預防控制領域檢驗中膠體金免疫結合試驗的應用價值

2.1 鼠疫耶爾森菌 在鼠疫耶爾森菌檢測中使用快速金免疫滲濾法進行檢測, 具有特異性好的優點；且在檢測中不和小腸結腸耶氏菌起明顯的交叉反應, 最低檢出限為2.4×105cfu/ml。其中在鼠疫耶爾森菌檢測中, 免疫層析法檢測的靈敏度為1×105cfu/ml, 使用F1抗體金探針檢測F1抗原的最低檢出限為10 μg/ml。

2.2 沙門菌 抗沙門菌處于封閉環境下, 采用抗原吸收法處理可使之其避免與其他腸道桿菌發生反應, 探針使用標記膠體金溶膠制備而成, 然后使用選擇多膜復合法將膠體金溶膠制作成免疫層析條, 其中其靈敏度為12.1×106cfu/ml。因為沙門菌與其他桿菌之間無反應發生, 所以檢測108～1011 cfu/ml菌懸液未出現鉤狀效應。通過對沙門菌09抗氧采用快速免疫金滲濾法檢測, 沙門菌09抗原單克隆抗體3-47-0及膠體金標記親和純化的羊抗鼠IgG, 腸炎沙門菌標準菌株靈敏度為6×104cfu/ml點。可以使用快速免疫金滲濾法檢測疾病中存在的09抗原的沙門菌, 同時在檢測時, 其與其他陽性菌、腸道桿菌等不發生反應。

2.3 金黃色葡萄球菌 在金黃色葡萄球菌檢測中, 快速金免疫滲濾法檢測最低檢測下限為(3.3～6.1)×106cfu/ml。本次研究中主要是對12株大腸埃希菌與18株不產生毒素的金黃色葡萄桿菌進行檢測。根據檢測結果可知, 各有1株產生了明顯的交叉反應, 其他均未出現交叉反應。

3 在病毒性疾病檢驗中膠體金免疫結合試驗的應用價值

3.1 在艾滋病抗體中的應用價值 在本次研究中, 主要對18家注冊艾滋病抗體快速檢測試劑實施了系統評價。在對300份強陽性標本進行檢測, 根據檢測結果可知, 試劑檢測靈敏度均為100%；在本次健康獻血員血液標本中(共450份), 除去未參與本次檢測的3家試劑外, 其他15家特異度為96.9%～100%。259份血液標本屬于高危人群, 均使用18家試劑進行常規檢測, 檢測靈敏度為73.6%～94.9%；1家特異性為58.7%, 其余均超過95.3%。

3.2 在流行性出血熱抗體檢驗中 對160份流行性出血熱患者使用膠體金免疫結合試驗進行檢驗, 患者血清結果均呈陽性, 檢測靈敏度為97.9%。對黑線姬鼠、家貓血清及兔免疫血清標本(共10份)進行檢測, 結果顯示均為陰性。對健康人群血清標本(共80份)進行檢測, 其檢測結果也均為陰性；對220份鉤體病、乙腦、乙肝及其他出血性疾病樣本使用該技術進行檢測, 其結果同樣均為陰性；對腎綜合征出血熱(HFRS)患者血清標本(共120份)中抗旱坦病毒IgM抗體經膠體金免疫滲濾法實施檢測, 其中3 d內的32份病程中, 28份結果顯示為陽性, 剩余超過4 d的88份病程中, 結果顯示為陽性。

3.3 柯薩奇病毒檢測 由于科薩奇病毒對多種疾病的發生與發展均有重要作用, 因此在檢測薩奇病毒中使用柯薩奇病毒IgM抗體膠體金免疫層析診斷試紙條實施檢測, 在本次檢測的血清標本中(共72份), 將RT-PCR標準作為評價依據,膠體金免疫結合試驗最終靈敏度為96.2%, 特異度為66.8%。

4 在病寄生蟲病檢驗中膠體金免疫結合試驗的價值

血吸蟲抗體使用快速免疫金滲濾法進行檢測, 其總靈敏度為96.8%, 另外, 急性患者血吸蟲靈敏度為99.9%, 慢性患者靈敏度為97.8%, 晚期患者靈敏度為92.8%。對40例華支睪血吸蟲病患者及198例健康人進行檢測, 結果顯示均為陰性。快速免疫金滲濾法的靈敏度、特異度及診斷效率和膠體金SEA-dipstick檢測方法一致。

5 膠體金免疫結合試驗在其他微生物疾病檢驗中的應用

梅毒使用膠體金免疫結合試驗進行檢測, 我國膠體金免疫結合試劑盒的檢測靈敏度均高于日本富士公司的TPPA試劑與美國梅毒螺旋體特異性抗體膠體金法, 其靈敏度為72.5%。對70份孕婦血清、160份紅斑狼瘡患者血清及50份正常體檢者血清采用膠體金免疫結合試驗進行檢測, 其結果顯示均為陰性。

6 小結

膠體金顆粒的化學效應及物理效應具有獨特性, 因此在免疫學、生物學及醫學等多個領域應用廣泛。由于膠體金標記對生物分子活性影響相對較小, 在多種生物分子中均為理想標記物［2］。但由于膠體金免疫試劑缺乏統一標準, 導致其檢測靈敏度及特異度存在一定差異, 因此需建立一套完善的膠體金制備質量標準體系, 提高試劑質量, 發揮其在疾病預防控制領域的檢測作用。

［1］ 章小雨, 戴曉愛.免疫膠體金技術在醫學檢驗領域的應用與進展.實驗與檢驗醫學, 2014, 32(3):279-281.

［2］ 何金林.膠體金免疫結合試驗在疾病預防控制領域檢驗中的應用.中國預防醫學雜志, 2008, 9(11):1012-1013.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.204

2015-01-05］

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