環氧化酶－2反義核酸對膀胱癌細胞株裸鼠成瘤的影響

張軍衛，靳風爍，龔晉遷，彭東濤，王 剛

（1.重慶市第九人民醫院泌尿外科，重慶 400700；2.第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所泌尿外科，重慶 400042）

膀胱腫瘤是泌尿系最常見的惡性腫瘤，以非肌層浸潤性膀胱癌為主，其主要特點為復發率高。近來國內外大量實驗及流行病學資料表明結直腸癌、前列腺癌和膀胱癌等多種人類腫瘤COX－2（環氧化酶－2）的表達明顯增高，使用COX－2抑制劑可使腫瘤增殖抑制，但是其機制目前尚不清楚。本研究探討環氧化酶－2反義核酸對膀胱癌細胞株裸鼠成瘤的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞、菌株及質粒 人膀胱癌T24細胞株由本室凍存；含hCOX－2 全長cDNA 質粒pCB7，由美國大學Dubinett教授饋贈；pcDNA3.1（＋）質粒、pMD18－T Vector購于大連寶生物工程有限公司。

1.1.2 人環氧化酶－2 反義核酸真核表達載體由本實驗室的構建并鑒定。

1.1.3 裸鼠 6～8周齡BALB／c nu／nu裸鼠，均為雄性，由上海實驗動物中心提供，本院動物室飼養。

1.1.4 主要試劑 脂質體lipofectAMINE 2000購自美國Roche 公司產品，胎牛血清購自美國Hyclone，鼠抗人COX－2單克隆抗體購自 北京中杉金橋生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞基因轉染 應用脂質體介導的方法獲得了穩定表達人環氧化酶－2反義核酸的膀胱癌細胞，并用抗生素篩選保證其穩定的表達，再通過免疫細胞化學與RT－PCR驗證其COX－2蛋白及mRNA水平下調。

1.2.2 細胞培養人膀胱癌細胞株 T24、T24－AS、T24－P培養于含10%（體積分數）胎牛血清的RPMI 1640培養基，在37℃、5%CO2（體積分數）飽和濕度的條件下生長、傳代。

1.2.3 裸鼠成瘤性實驗 分為3組（T24、T24－AS、T24－P），每組9只裸鼠。取對數生長期的T24細胞，用PBS將細胞制成細胞懸液（2.5×107／mL），抽取0.2mL接種于裸鼠背部皮下，接種后于無特殊病原菌（SPF）條件下飼養。……