人重組蛋白胸腺素B10促進卵巢癌細胞系SKOV3凋亡

曲連悅，蔡 爽，姜明燕

(中國醫科大學 附屬第一醫院 藥學部，遼寧 沈陽 110001)

人重組蛋白胸腺素B10促進卵巢癌細胞系SKOV3凋亡

曲連悅，蔡 爽，姜明燕*

(中國醫科大學 附屬第一醫院 藥學部，遼寧 沈陽 110001)

β族胸腺素由于具有維持細胞骨架的動態平衡，促進血管生成、傷口愈合、心肌修復等多種生物學功能,并與腫瘤發生、轉移具有密切關系而倍受關注。本文研究對象胸腺素B10(thymosinβ 10，Tβ10) 定位于胞內，大量文獻證實Tβ10與腫瘤的發生發展有關[1-2]，但在不同類型的腫瘤中它的功能還存在爭議，Tβ10在腫瘤細胞凋亡中所起的作用也鮮有報道。本實驗將在卵巢癌細胞系SKOV3中探索Tβ10對其凋亡的影響及其分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料:重組人Tβ10蛋白(Abcam公司)；流式雙染試劑盒(BD公司)；caspase-3活性檢測試劑盒(Haimen公司)；Cell Counting Kit-8? solution(CCK-8)試劑盒(日本同仁公司)；Annexin V-FITC/PI雙染試劑盒(KeyGEN公司)；BAX、BCL-2 抗體(Santa Cruz公司)；RNA提取及Realtime PCR(Takara公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養：培養SKOV3細胞使用DMEM 培養基含10%滅活小牛血清。37 ℃,5% CO2的條件下培養，每2天換1次液，并用0.25%的胰蛋白酶消化傳代。

1.2.2 細胞活力檢測：使用CCK-8 檢測細胞的增殖能力。將處于對數增殖期的SKOV3細胞分成4組，其中1組為對照，加入等體積的PBS,另外3組分別加入0.5、1或2 g/L 3個濃度的Tβ10，24 h后按每孔4×103個/100 μL將各組分別接種于96孔培養板中，待其貼壁后每孔加入10 μL CCK-8 繼續培養4 h。檢測在450 nm 波長下測定各孔吸光度值，以不含細胞的等體積培養基作對照。

1.2.3 細胞凋亡檢測:使用Annexin V-FITC/PI雙染試劑盒進行細胞凋亡檢測。細胞接種于6孔板內，每孔3 mL大約4×105個，實驗組加入Tβ10 1 g/L，對照組加入PBS，24 h后收集細胞。流式細胞儀計數1萬個細胞，細胞凋亡百分比用CellQuest analysis 軟件計算。……