RNR3調控重組Lac Z基因酵母細胞對化學誘變原的篩選

葛宜枝，王瑞鯤，王 磊，謝云斌，劉星妍，李湘鳴

(揚州大學 醫學院 預防醫學教研室， 江蘇 揚州 223900)

研究論文

RNR3調控重組LacZ基因酵母細胞對化學誘變原的篩選

葛宜枝，王瑞鯤，王 磊，謝云斌，劉星妍，李湘鳴*

(揚州大學 醫學院 預防醫學教研室， 江蘇 揚州 223900)

目的建立化學致突變物的體外快速篩選方法。方法用PCR法從酵母基因組中擴增RNR3啟動子，將其插入到pMP206/ERE報告載體，將該載體轉入W303-1A酵母細胞。當化學誘變原作用于酵母細胞時，會誘導β-半乳糖苷酶表達，可對具有DNA毒性的化學物進行篩選。結果許多可造成DNA損傷的化學誘變原可誘導RNR3的表達。使DNA發生烷基化的誘變原(甲磺酸甲脂和瘤可寧)、使DNA發生斷裂的誘變原(順鉑、4-硝基-N-氧化喹啉、博來霉素和福來霉素)、抑制DNA合成酶或拓撲異構酶的誘變原(5-氟尿嘧啶、羥基脲和喜樹堿)均可誘導RNR3的表達。結論RNR3調控的重組Lac Z報告基因酵母可用于對許多化學誘變原的篩選，篩選過程可在96孔板中進行，因而具有高通量性。

誘變原；酵母；RNR3基因；β-半乳糖苷酶

化學誘變原引起的基因的突變，可能是導致腫瘤發生的主要機制之一。建立一種快速的篩選化學誘變原的方法是預防和治療腫瘤的關鍵。傳統的致突變檢測方法Ames出現假陽性或是假陰性的機率較高[1]，且是針對原核生物，無法進行快速、高通量的化合物的檢測。核糖核苷酸還原酶(Ribonucleotide reductase, RNR)是合成脫氧核糖核苷三磷酸的限速酶，正常生長條件下，細胞中幾乎檢測不到RNR3的表達，當DNA損傷或是合成阻斷時可誘導大量RNR3表達[2-3]。……