丁苯肽軟膠囊對大鼠急性腦缺血再灌注損傷腦組織含水及含鈣量的影響

潘 登 譚 軍

1）河南新鄉市第一人民醫院神經內科 新鄉 453000 2）新鄉醫學院第三附屬醫院神經內科 新鄉 453003

丁苯肽（n－butylpohthahide，NBP），又名芹菜甲素（apiumgraveolens linn）是我國具有獨立自主產權的國產Ⅰ類化學新藥，具有增加缺血區腦血流量和重構缺血區微循環、改善全腦缺血后的能量代謝、保護線粒體功能、減輕神經功能損傷程度等功能；同時，對腦損傷、驚厥、記憶障礙等疾患也有一定的保護作用［1］。我們采用大鼠急性腦缺血再灌注損傷模型觀察其對腦組織含水量及含鈣量的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物選用Sprague－Dewley（SD）大鼠60只，體質量180～220g，由新鄉醫學院實驗動物中心提供，自由飲用自來水，飼用普通顆粒型大鼠飼料（含蛋白23%、脂肪4.7%、鈉鹽0.24%），動物房溫度控制23～27℃，光暗周期12h。

1.2實驗儀器與試劑FAl204B型電子分析天平，AA370MC型原子吸收分光光度計，上海精科儀器有限公司。丁苯肽軟膠囊（中國石家莊制藥公司NBP有限公司）。戊巴比妥鈉液（佛山市化工實驗廠）；純硝酸、高氯酸（青島精科儀器試劑有限公司）。復方丹參滴丸：27mg×150粒（天士力，藥物編號：100708），給藥量30g／mL，相當于大鼠灌胃給藥量的10倍。

1.3動物模型的建立參照Pulsinelli4血管法造大鼠急性腦缺血再灌注模型。以2%戊巴比妥鈉0.1mL／100g體質量注射麻醉后，行頸后正中部切開術，電凝雙側椎動脈，無創縫合傷口。次日行前頸正中部切開術，分離雙側頸總動脈，用血管夾夾閉10min后去除血管夾，造成缺血再灌注損傷。假手術組僅分離雙側椎動脈、頸總動脈后無創縫合傷口。術后5d進行腦組織含水量及含鈣量測定，如模型對照組與假手術組比較大鼠腦組織含水量、含鈣量明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），說明造模成功。

1.4分組及給藥方法按隨機數字表法選取10只大鼠作為假手術組，其余50只均分為模型對照組、丁苯肽高劑量組（0.4g／kg）、丁苯肽中劑量組（0.2g／kg）、丁苯肽低劑量組（0.1g／kg）、復方丹參滴丸組（30g／mL），各組均于術后第1天灌胃給藥，1次／d，連續給藥3d。假手術組、模型對照組給予與丁苯肽各劑量組等量的生理鹽水。于術后第5天處死。

1.5腦組織含水量及含鈣量測定處死動物后，開顱取出完整腦組織，干燥，以Elliot公式計算腦組織含水量。腦組織含水量（%）＝［（濕質量－干質量）／濕質量］×100%。將干燥腦組織用混合酸（硝酸∶高氯酸＝3∶1）5mL充分消化，在電熱恒溫板上處理至無色，冷卻至室溫后用去離子水定容至10mL，然后在原子吸收分光光度計上采用火焰吸收法測定Ca2＋含量。

1.6統計學方法采用SPSS 16.0軟件包進行統計學分析。計量資料以均數±標準差（s）表示，2組均數比較采用獨立樣本t檢驗；組間比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

與模型對照組比較，丁苯肽高劑量組大鼠腦組織含水量、含鈣量均降低（P均＜0.01）；中劑量組大鼠腦組織含水量降低不明顯（P＞0.05），含鈣量明顯降低（P＜0.01）；劑量組大鼠腦組織含水量、含鈣量變化均不明顯（P＞0.05）。與模型對照組比較，復方丹參注射液組大鼠腦組織含水量及含鈣量均明顯降低（P均＜0.01）。見表1。

表1 各組大鼠急性腦缺血再灌注后腦組織含水量及含鈣量比較 （s）

表1 各組大鼠急性腦缺血再灌注后腦組織含水量及含鈣量比較 （s）

注：與假手術組比較，aP＜0.01；與模型對照組比較，b P＜0.01；c P＜0.01

組別 n H2O／% Ca（μg／g）10 72.38±0.50 94.64±8.10模型對照組 10 80.86±0.45a193.14±18.64a丁苯肽高劑量組 10 75.60±0.72b 114.53±23.20b丁苯肽中劑量組 10 80.03±0.84 132.33±29.54c丁苯肽低劑量組 10 80.46±0.80 188.45±17.32復方丹參注射液 10 73.93±0.83b 106.35±15.31假手術組b

3 討論

腦水腫是神經內外科及各種危重患者的常見病，是致死、致殘的重要原因。腦組織含水量是反映腦水腫的經典指標。Ca2＋是人體不可缺少的重要物質，Ca2＋超載是導致細胞死亡的重要原因［2］。丁苯酞是一種新型抗腦缺血藥物，可通過解除微血管痙攣、抑制血小板聚集、抑制TXA2的合成等多個環節阻斷腦缺血引起的病理生理發展過程［3－4］。本研究發現，丁苯肽組3d滲透性增高程度均較缺血組減輕。血腦脊液屏障（blood brain barrier，BBB）由內皮細胞、基底膜、星形膠質細胞的足突和周細胞、小膠質細胞以及維持腦組織完整性的細胞外基質構成，是神經血管單元的核心結構［5－6］。在慢性低灌注狀態下，BBB 3d后BBB破壞基本修復，丁苯肽組比缺血組修復更好。作為BBB的重要部分，內皮細胞在缺血缺氧損害過程中，線粒體功能受損，影響細胞能量代謝，緊密連接增寬，細胞水腫，是血管源性水腫的基礎。研究表明，丁苯酞通過改善線粒體膜流動性，恢復線粒體膜電位，提高線粒體磷酸腺普酶及復合酶Ⅳ的活性，增加超氧化物歧化酶及谷光甘肽過氧化物酶的活性，從而保護線粒體［7－9］。其對內皮細胞線粒體的保護作用可能是其對BBB保護作用的基礎。另外，丁苯肽通過對細胞炎性因子的抑制作用可能影響基質金屬蛋白酶對細胞外基質的降解，在保護BBB中也可能發揮了重要作用。本實驗采用大鼠急性腦缺血再灌注模型觀察了丁苯肽軟膠囊對腦組織含水量、含鈣量的影響，旨在探討丁苯肽的腦保護作用。本實驗中，我們參照pulsinelli4血管法造大鼠急性腦缺血再灌注模型，造模成功后連續3d腹腔注射不同劑量丁苯肽，術后5d處死動物并測定腦組織含水量及含鈣量。結果表明，丁苯肽軟膠囊各劑量組可降低大鼠急性腦缺血再灌注損傷腦組織含水量及含鈣量，提示其具有腦保護作用，這為丁苯肽軟膠囊臨床治療腦動脈硬化、腦血栓形成（偏癱）、冠心病、心絞痛、心肌梗死、高血脂等提供了實驗依據。

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