全反式維甲酸促使小鼠白色脂肪細胞棕色化

王 姣，孫高潔，王守俊

(鄭州大學第一附屬醫院內分泌及代謝病科河南省高等院校臨床醫學重點實驗室，河南鄭州450052)

哺乳動物體內存在兩種不同類型的脂肪細胞，即棕色脂肪細胞和白色脂肪細胞。和主要用于儲存能量的白色脂肪組織相比，棕色脂肪組織因線粒體表達解偶聯蛋白1(uncoupling protein-1，UCP1)而擁有非顫栗產熱的能力，研究表明體內高水平的棕色脂肪組織可阻止代謝性疾病的發生［1］。全反式維甲酸(all-trans-retnoic acid，t-RA)對哺乳動物細胞的分化、生長有重要作用，有動物實驗表明，t-RA 有促使大鼠白色脂肪表現出棕色脂肪表型的傾向［2］。本實驗通過研究t-RA 對小鼠白色脂肪細胞棕色化的影響，為開辟新的治療肥胖癥、糖尿病等代謝性疾病的方法提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 細胞培養及分化:小鼠3T3-L1 前脂肪細胞(武漢博士德公司)在37 ℃、5% CO2環境中培養于含10%胎牛血清的高糖培養液中，當細胞匯合達80%時，胰蛋白酶消化、傳代。細胞完全匯合后2 d(誘導分化第0 天)，用以下試劑誘導分化:0.5 mmol/L 的IBMX、1.0 μmol/L 的地塞米松和2 mg/L的胰島素。在48 h(第2 天)后換液，培養中僅有1.0 μmol/L的地塞米松、2 mg/ L 的胰島素，第4 天及以后的換液，不加任何誘導因素，至第8 天。

1.2 油紅O 法鑒定細胞分化:小心輕緩倒去培養液，用PBS洗2 次，10%甲醛固定30 min，加油紅O 工作液靜止10 min，后用75%乙醇漂洗。加蘇木精靜止5 min 后，用PBS 漂洗2遍。甘油明膠封片，普通顯微鏡下觀察。

1.3 RT-PCR 測UCP1 mRNA 的表達:細胞以8 ×104個/孔接種于6 孔板，貼壁24 h，分別以0、1 × 10－5、1 × 10－4、1 ×10－3、1 ×10－2及1 ×10－1mmol/L t-RA 作用24 h。提取RNA，用分光光度計測量RNA 濃度，反轉錄得到cDNA，進行PCR 反應。UCP1 上、下游引物分別為……