人肺癌組織中MCPH1基因過表達(dá)后協(xié)同化療藥物抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖

何文婷，孟莎莎，吳曉彬

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院重慶市兒童重大疾病診治與預(yù)防國(guó)際科技合作基地兒童疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)知發(fā)育與學(xué)習(xí)記憶障礙轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400016)

肺癌(lung cancer，LC)，是肺部最常見的惡性腫瘤之一。在許多國(guó)家的惡性腫瘤當(dāng)中，肺癌的發(fā)病率占第一位［1］。傳統(tǒng)的放療和化療的手段并不能特異地殺傷癌細(xì)胞，同時(shí)也殺傷了組織中的大量正常細(xì)胞，給患者帶來非常嚴(yán)重的不良反應(yīng)。為了減輕傳統(tǒng)治療給患者帶來的痛苦和提高治療效果，靶向治療成為目前癌癥治療研究的熱點(diǎn)。

MCPH1 為原發(fā)性小頭腦基因，它編碼microcephalin 蛋白，也被稱作做BRIT1，最初是在篩選人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶阻遏物時(shí)被發(fā)現(xiàn)［2-4］。MCPH1(BRIT1)在DNA 損傷應(yīng)答通路中發(fā)揮著重要作用［5］。近期研究發(fā)現(xiàn)多種人類腫瘤中MCPH1 表達(dá)下調(diào)，如卵巢癌、乳腺癌等。本實(shí)驗(yàn)前期研究也發(fā)現(xiàn)宮頸癌樣本中MCPH1 基因表達(dá)下調(diào)［6］。

本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究MCPH1 基因在肺癌中的表達(dá)及作用，為臨床癌癥基因診斷、治療尋找新的靶點(diǎn)和標(biāo)志物。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

RT-PCR 試劑盒(Toyobo 公司);轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000 和Trizol 試劑(Invitrogen 公司);質(zhì)粒提取試劑盒(Omega 公司);RNA 抽提液(Roche 公司);蛋白提取試劑盒、ECL 發(fā)光試劑盒、MTS 試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司);兔抗人BRIT1多克隆抗體(Abcam 公司);HRP 標(biāo)記的羊抗兔IgG(北京鼎國(guó)生物技術(shù)公司);阿霉素、順鉑、紫杉醇(Sigma 公司)。

1.2 質(zhì)粒和細(xì)胞

真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(－)/ MCPH1(重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心袁成福博士提供);pcDNA3.1(－)和A549 細(xì)胞(均為重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心保存)。……