TSA體外抑制人肺癌細胞系A549細胞增殖及機制

崔虎哲，王申桐，金鐵峰，周憲春，元奎昌，張松男

(延邊大學1.附屬醫院影像科;2.腫瘤研究所;3.附屬醫院科教處;4.附屬醫院心內科;5.附屬醫院腫瘤科，吉林延吉133000)

上皮-間質轉化(pithelial-mesenchymal transition，EMT)是惡性腫瘤發生侵襲及轉移的關鍵步驟，在肺癌的研究證實，EMT 與肺癌發生遠處轉移密切相關［1-2］。曲古抑菌素A(triehostatin A，TSA)是組蛋白去乙?；?histonedeaeetylase，HDAC)抑制劑，可促進組蛋白的乙?；健⒓せ钜职┗虮磉_、抑制細胞增殖、引起細胞分化或凋亡［3］。有研究表明TSA 可以抑制肺癌細胞的增殖及遷移［4］，但其具體機制仍不清楚，尤其是TSA 調控EMT 在肺癌的研究未見報道。本研究旨在通過探明TSA 抑制A549 細胞的作用機制，為臨床治療肺癌提供新的理論依據和實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

人肺腺癌A549 細胞系和正常支氣管上皮16HBE 細胞系(ATCC);胎牛血清、RPMI1640 培養基、胰蛋白酶和二甲基亞楓(DMSO)等化學試劑(北京華美公司);Western blot 實驗相關試劑及MTT 試劑(武漢博士德生物有限公司);EMT 相關標志蛋白抗體(抗E-cadherin、抗Vimentin、抗Snail、抗GSK-3β 單克隆抗體)(Cell Signaling Technology 公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 MTT 比色法檢測細胞增殖能力:將A549 及16HBE 細胞系接種于含10%胎牛血清、5%青霉素/鏈霉素的RPMI1640 培養基中，37 ℃、5% CO2常規培養，0.25%胰蛋白酶消化并傳代。取對數增殖期的A549 及16HBE 細胞以2 ×103個/孔接種于96孔板中，待細胞貼壁后加入終濃度為0、0.01、0.1、1、10 和100 μmol/L 的TSA，每種濃度設3 個平行復孔，對照組加入等體積的培養液。72 h 后加入50 μL/孔的MTT，4 h 后棄上清，加入200 μL/孔的DMSO，輕輕振蕩數分鐘，應用全波長多功能酶標儀，在570 nm 波長處測定其吸光度值，并按公式計算細胞生存率:細胞生存率(%)=實驗組吸光值/對照組吸光值×100%。……