骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制CD4+初始T細(xì)胞體外分化為Th17細(xì)胞

曲學(xué)彬，劉星霞，韓晶晶，姚瑞芹，趙春華

(1.徐州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院生物學(xué)系，江蘇徐州221009;2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所組織工程中心，北京100005;3.徐州醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院神經(jīng)內(nèi)科，江蘇徐州221002)

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs)不僅具有多向分化的潛能，而且還能夠發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)功能［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)，BM-MSCs 能夠抑制T 細(xì)胞的增殖與活化，通過(guò)調(diào)節(jié)輔助T 細(xì)胞(helper T cell，Th)1(Th1)和2(Th2)的平衡而緩解相關(guān)免疫疾病的癥狀，促進(jìn)調(diào)節(jié)性輔助T 細(xì)胞的生成而降低炎性反應(yīng)［3-4］。此外，BM-MSCs 還能夠調(diào)節(jié)近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的，與諸多自身免疫性疾病(如腦脊髓炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等)密切相關(guān)的Th17 的增殖和分化［5-7］，體現(xiàn)了BM-MSCs在自身免疫性疾病臨床治療上的應(yīng)用前景。然而，目前對(duì)BM-MSCs 調(diào)節(jié)Th17 功能的研究還不明確。胎兒BM-MSCs 能夠在體外促進(jìn)人Th17 的增殖與分化［5］，然而，BM-MSCs 能夠通過(guò)抑制Th17 的分化生成而緩解自身免疫性疾病［6-7］。因此，BM-MSCs 調(diào)控Th17 分化的作用及其機(jī)制仍需深入研究。

本研究將BM-MSCs 與CD4+初始T 細(xì)胞(CD4+na?ve T cell，Th0)體外共培養(yǎng)以觀察其對(duì)Th0 分化為Th17 的作用，為研究BM-MSCs 調(diào)控Th17 分化的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)5 ～6 周齡雄性BALB/c 小鼠，體質(zhì)量20 ～25 g［中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所，合格證號(hào):SCXK(京)2009-0007］。

1.2 試劑

小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基(Stem Cell 公司);小鼠淋巴細(xì)胞分離液(達(dá)科為公司);CD4+na?ve T 細(xì)胞分選試劑盒(美天妮公司);RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清(Hyclone 公司);CD3 和CD28 抗體包被珠和Trizol(Invitrogen 公司);細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-23 和TGF-β(RD 公司);抗IL-4、IFN-γ 抗體及抗IL-10、PGE2 中和抗體(NA-IL-10、NAPGE2)、ELISA 試劑盒、透膜固定試劑盒(BD 公司);熒光標(biāo)記的抗小鼠CD4、IL-17 流式抗體(eBioscience 公司);RNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒(天根公司);SYBR Green 實(shí)時(shí)定量PCR 試劑盒(Takara 公司);抗小鼠Rorγt 抗體(CST 公司)。……