單人份血漿懸浮去白混合濃縮血小板與單采血小板輸注療效的對比研究

趙鳳綿 孫曉紅 孟趁喬 王麗莎 馮雪 陳紅霞 牛宏偉 韓衛 李玉秋 陳筱麟

臨床應用的血小板有手工血小板和單采血小板。我國臨床以單采血小板為主，隨著臨床對單采血小板需求量的飆升，血小板的供需矛盾越來越凸出。因從單袋全血中提取單人份手工血小板的血小板含量低、輸注過程繁瑣、含有的白細胞多，反復輸注易引起血小板輸注無效等，限制了手工血小板在臨床應用。歐洲國家普遍輸注混合濃縮血小板，甚至有些國家混合濃縮血小板在臨床占有絕對的比例［1］。為滿足臨床輸注血小板的需求，綜合利用手工采集全血中的血小板資源，進一步提升血小板的質量和更理想的提高手工血小板的治療效果，我們開展了利用匯集白膜層方法、用單人份男性獻血者血漿作為懸浮介質、制備去白混合濃縮血小板研究，并與單采血小板的輸注療效進行比較，報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 隨機選擇2012年9月至12月在河北省人民醫院、河北醫科大學第一醫院、河北省醫科大學第三醫院和石家莊市第一人民醫院住院患者74例，患者均有輸血史，排除有可能嚴重影響血小板計數的因素如發熱、感染、脾臟腫大、骨髓移植、彌漫性血管內出血(DIC)。輸注單采血小板患者44例(單采組)，其中男20例，女24例;年齡19～80歲，平均年齡40．7歲;白血病15例，再生障礙性貧血9例，血小板減少性紫癜15例，外傷消化道出血2例，外傷大出血3例。輸注前血小板計數(3～48)×109/L，均值為17×109/L。輸注去白混合濃縮血小板患者30例(混合組)，其中男10例，女20例;年齡33～80歲，平均年齡60歲;腦外傷2例，腸梗阻2例，肺癌5例，血小板減少癥6例，急性白血病8例，冠心病1例，骨髓異常增生4例，外傷大出血2例。輸注前血小板計數(4～50)×109/L，均值為10．5 ×109/L。

1．2 設備與試劑 (1)美國COULTER/AC．TC 5diff A血細胞計數儀;(2)美國血技MCS+血小板單采機。

1．3 血小板來源 河北省血液中心2012年8月至2012年12月，選擇符合《獻血者健康檢查要求》(2011版)102例隨機單采獻血者捐獻的單采血小板、441例隨機全血獻血者捐獻的400 ml/袋全血制備去白混合濃縮血小板。單采血小板102袋，

項目來源:國家衛生公益性行業科研分項目(編號:200902008-03)，河北省科學技術研究與發展重點課題(編號:20110270)每袋為1個治療量(容量為250～300 ml，血小板含量≥2．5×1011)。去白混合濃縮血小板63袋，每袋約為1個治療量(容量為250～300 ml，血小板含量≥2．5×1011)。

1．4 方法

1．4．1 去白混合濃縮血小板制備:將采集的400ml/袋新鮮全血，在4～6 h內重離心，分離白膜層(BC)，BC在(22±2)℃條件下靜置，次日將7袋核酸檢驗合格并且同血型的BCs通過無菌導管接口機匯集在一起并加入其中1例男性獻血者的血漿200 ml，輕輕混合均勻后離心，分離出混合濃縮血小板并用PF型白細胞過濾器過濾去除白細胞，即得去白混合濃縮血小板。

1．4．2 血小板計數和白細胞計數:參照文獻［2］。

1．4．3 輸注效果評價:ABO血型同型輸注血小板制品，以患者可以耐受的速度盡快輸注。在患者輸注血小板前、輸注后1 h和24 h分別測定患者的血小板濃度，同時記錄采樣時間。根據患者身高、體重、輸注前后血小板計數和血小板輸注總量計算血小板計數增高值(CCI)。CCI=血小板計數的絕對增加值(×109/L)×體表面積(m2)/輸入的血小板數(×1011)。當1 h CCI＞7．5、24 hCCI＞4．5 時為輸注有效。當1 h CCI＜7．5、24 h CCI＜4．5 時為輸注無效［3］。

1．4．4 癥狀評價:對每例輸注血小板的患者記錄輸注前6 h和輸注后6 h的出血情況。8個部位(皮膚、鼻子、口咽、胃腸道、泌尿器官、肺部、視網膜和穿刺部位)作為觀察點，每個出血部位被規定上分數(0=不出血，1=輕微出血，2=較多出血)。通過計算每例患者每次輸注血小板前后各個出血部位的總得分，計算每例患者的平均止血分數，當輸注后的止血分數小于輸注前的止血分數時，說明出血癥狀得到控制或改善，即使CCI＜4．5 也被認為輸注有效［4］。

1．4．5 不良反應:主要觀察過敏反應和非溶血性發熱反應，輸注血小板期間或輸注后1 h:體溫升高≥1℃、寒戰、顫栗、蕁麻疹、皮膚瘙癢、頭痛、惡心或嘔吐，而輸注前無這些癥狀。

1．5統計學分析應用SPSS 9．0統計軟件，止血分數以±s表示，組內之間的數據作成組樣本t檢驗，組間的數據作獨立樣本t檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 2組血小板質量比較 單采血小板和去白混合濃縮血小板的血小板含量符合標準要求，去白混合濃縮血小板的白細胞殘留量比單采血小板的白細胞殘留量少數10倍。見表1。

表1單采血小板與去白混合濃縮血小板的質量比較±s

表1單采血小板與去白混合濃縮血小板的質量比較±s

項目 單采血小板(n=44) 去白混合血小板(n=30)260±25 294±37血小板含量(×1011/袋) 2．52 ±0．34 2．62 ±0．26 WBC 混入量(×106/袋) 6．94 ±4．33 0．15 ±0．14容量(ml)無菌試驗 無細菌生長 無細菌生長

2．2 組內輸注血小板前后血小板計數比較 組內組患者輸注后1 h和24 h的血小板計數與輸注前計數比較，差異均有統計學意義(單采組分別是 t 1=3．123，P ＜0．05;t 24=2．709，P ＜ 0．05。混合組分別是 t 1=3．242，P ＜0．05;t 24=2．940，P＜0．05);單采組和混合組之間比較，輸注前、輸注后1 h和輸注后24 h的血小板計數差異無統計學意義(輸注前，t=0．106，P ＞0．05;輸注后1 h，t=1．273，P ＞0．05;輸注后24 h，t=1．711，P ＞0．05)。見表2。

表2輸注血小板前后血小板計數×109/L，±s

表2輸注血小板前后血小板計數×109/L，±s

注:與輸注前比較，*P ＜0．05

24 h單采組(n=44) 14±10 37±24* 31±27組別 輸注前 輸注后1 h 輸注后*混合組(n=30) 10±6 43±27* 27±15*

2．3 組內CCI及輸注有效率比較 組內患者1 h和24 h的CCI比較，差異無統計學意義(t 1=1．273，P ＞0．05;t 24=0．751，P ＞0．05)。組間患者之間1 h和24 h的 CCI比較，差異無統計學意義(1 h CCI的 t=0．593，P ＞0．05;24 h CCI的t=0．347，P ＞0．05)。2組患者間的有效率比較，差異無統計學意義(t=0．853，P ＞0．05)。見表 3。

表3 組內CCI及輸注有效率比較

2．4 2組輸注血小板前后止血分數比較 組內患者輸注血小板前后止血分數差異有統計學意義(單采組輸注前后t=5．738，P ＜0．05;混合組輸注前后t=8．503，P ＜0．05)。組間患者輸注血小板前后的止血分數差異無統計學意義(輸注前，t=0．299，P ＞0．05;輸注后，t=0．875，P ＞0．05)。見表4。

表42組患者輸注血小板前后止血分數比較分，±s

表42組患者輸注血小板前后止血分數比較分，±s

2．0 ±0．8 1．6 ±1．5混合組(n=30)組別 輸注前止血分數 輸注后的止血分數單采組(n=44)2．4 ±0．7 1．5 ±1．3

2．5 不良反應 單采組有3例患者發生蕁麻疹和發熱反應，反應率為6．82%，混合組患者未觀察到不良反應。

3 討論

血小板輸注在預防或治療血小板減少或血小板功能障礙引起的出血方面起著重要的作用。臨床輸注的PCs有手工采集全血提取的匯集血小板(匯集-PCs)和通過單采程序提取的單采血小板(單采-PCs)。我國臨床以單采血小板為主，歐洲國家匯集PCs的利用率占有絕對比例，2007年德國臨床應用匯集PCs占40%，單采-PCs占60%［5］，隨著去白技術的全面應用，2008年匯集PCs的應用比例達到97%，3%的單采-PCs只用于需要HLA/HPA配型的患者［6］，2004年歐洲國家匯集-PCs的應用比率范圍為10% ～98%［7］。

本研究制備去白混合濃縮血小板的工藝與傳統制備混合血小板的工藝不同，傳統工藝是從單袋全血中提取單人份手工血小板，再將數袋單人份手工血小板混合在一起，混入的各個供體的血漿量幾乎相當(每人50～70 ml)，單人份制備損失的血小板數量和制備損傷均較大，而且不能在制備過程中過濾去除白細胞。本工藝將數袋全血中的BC匯集，只用其中1例男性獻血者的血漿(200 ml)作為懸浮介質，混入的其他獻血者的血漿量很少。制備過程血小板損失量少，混合BC在離心過程中有紅細胞和白細胞做鋪墊，使血小板受到的切割力減少，從而減少了制備損傷，能夠在制備過程中過濾去除白細胞。

傳統觀念認為單采血小板產生同種免疫機會少，純度高，治療效果好已成共識，混合血小板的混合因素增加了同種免疫的機會而導致血小板輸注無效。本文中由7人份的全血提取的去白混合濃縮血小板的含量并不比單采血小板的含量低，而殘留的白細胞卻比單采血小板少數10倍。白細胞是引起非溶血性發熱反應的主要因素，通過觀察臨床不良反應發現，輸注單采血小板的患者組有3例發生發熱反應和蕁麻疹，輸注混合血小板患者組中未觀察到不良反應。本研究用1例男性獻血者的血漿作為懸浮介質，主要考慮到一般男性獻血者如果沒有輸血史就不容易產生白細胞抗體，而女性獻血者往往通過妊娠而產生白細胞抗體，患者輸注含有白細胞抗體的血液成分，輕則降低療效或輸注無效，重則產生嚴重免疫性不良反應。

從輸注效果來看，2組患者輸注血小板前和輸注后1 h和24 h的血小板計數和CCI以及止血效果沒有差異，但相對來說混合組1 h和24 h的CCI優于單采組，超出了預期。單采組和混合組患者的血小板無效率分別為32%和37%，符合文獻報道的30% ～70%的范圍［8］。

總之，去白混合濃縮血小板的質量與單采血小板質量相當，輸注效果也幾乎相同，輸血不良反應少，達到了提升手工血小板的治療效果和節約血液資源的目的。考慮混合血小板的混合因素引起的同種免疫反應，對于未產生同種免疫的患者來說完全可以輸注去白混合濃縮血小板，對于產生同種免疫的患者來說需要輸注與患者HLA和HPA相匹配的單采血小板。

1 王紅，劉嘉馨，雷宇，等．2種國產血小板濾器濾除白細胞對體外血小板功能的影響．中國輸血雜志，2011，24:232-326．

2 趙鳳綿，孫曉紅，張金彩，等．保存5d去白混合濃縮血小板質量分析．河北醫藥，2012，34:3652-3654．

3 付涌水主編．臨床輸血．臨床輸血與檢驗．第1版．北京:人民衛生出版社，2007．155．

4 楊成民，李家增，季陽主編．基礎輸血學．第1版．北京:中國科學技術出版社，2001．670-672．

5 Murphy S．Platelets from pooled buffy coats:an update．Transfusion，2005，45:634-639．

6 Schrezenmeier H，Seifried E．Buffy-coat-derived pooled platelet concentrates and apheresis platelet concentrates:which product type should be preferred．Vox Sanguinis，2010，99:1-15．

7 Andreu G，Vasse J，Sandid I，et al．Use of random versus apheresis platelet concentrates．Transfus Clin Biol，2007，14:514-521．

8 閻石，韓平，陳雅勇．血小板輸注無效的臨床問題．中華血液學雜志，1993，14:659-660．