中藥泡沫劑對家兔細菌性陰道炎的作用及陰道黏膜刺激實驗研究

鄭永仁等

摘 要：目的：驗證中藥泡沫劑對家兔細菌性和霉菌陰道炎的作用。方法：通過家兔模型陰道給予不同濃度中藥泡沫劑和對照品，觀察樣品對家兔陰道的刺激性；以及通過家兔的細菌性陰道炎和霉菌性陰道炎模型，分別給予不同濃度中藥泡沫劑及對照樣品；結(jié)果：中藥泡沫劑對家兔陰道無明顯刺激性，對家兔的細菌性和霉菌陰道炎的有一定的治療作用。

關(guān)鍵詞：陰道炎；泡沫劑；實驗研究

中圖分類號：R285

文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349（2013）06-0057-03

中藥泡沫劑為預研的婦科用陰道殺菌劑，由中藥黃柏、黃連、重樓、蛇床子、苦參等中藥研制而成，具有抗菌、消炎、止癢及滋潤陰道的作用，為驗證其藥效及安全性，按照國家有關(guān)外用藥的生產(chǎn)和使用規(guī)定，特對家兔細菌性和霉菌性陰道炎和家兔陰道刺激性進行了前期動物實驗研究。

1 材料

1.1 材料與試劑 中藥低濃度、中濃度、高濃度泡沫劑由云南海正生物科技有限公司研制提供；保婦康栓，海南碧凱藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準字（Z46020058，批號：20110930；）碘伏，昆明利健消毒制品有限公司，批準文號：衛(wèi)消字（2005）第0205號，批號：20120501.

1.2 實驗動物與實驗環(huán)境 初成年雌性未孕新西蘭實驗兔，體重2.6～3.0 kg，由昆明醫(yī)科大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（滇）2011-0004，飼料由昆明醫(yī)科大學實驗動物學部提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（滇）2011-0005；實驗前適應性飼養(yǎng)7 d。

1.2.1 動物飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學院實驗動物室普通級動物房，溫度20～26℃，相對濕度：40～70%，噪音：60<分貝，動物照度：10～18 lx；12 h/12 h明暗交替。使用許可證：SYXK（滇）2011-0011；發(fā)證單位：昆明市科技局；飼養(yǎng)兔籠為30 cm×45 cm×40 cm的不銹鋼籠具，由蘇杭實驗設(shè)備廠生產(chǎn)。每天上下午喂家兔全價顆粒飼料并觀察，自由飲用自來水。

1.3 動物陰道和宮頸感染用純種病菌：白色念珠菌、金色葡萄球菌、大腸桿菌、病料收集無菌女性試子等，由云南省第一人民醫(yī)院臨床微生物檢驗室提供。

1.4 儀器 GHP-927型隔水式恒溫培養(yǎng)箱，LAZX75KBS型立式壓力蒸汽滅菌器，上海景洪實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn)。THZ-D臺式恒溫振蕩器，太倉市實驗設(shè)備廠生產(chǎn)。

2 實驗方法結(jié)果

2.1 動物模型制作與分組

2.1.1 細菌性陰道宮頸炎動物模型[1～2] 制作動物模型前對家兔陰道PH值檢測為7.2±0.2。把純種金色葡萄球菌、大腸桿菌經(jīng)傳代培養(yǎng)制作高濃度病菌懸浮液，用濃度為1×109 CFU/mL金色葡萄球菌、大腸桿菌混懸液0.2 mL，經(jīng)導管注進家兔宮頸內(nèi)，每天1次，連續(xù)造模3天后，臨床檢查動物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗是否含染病病源菌，以外陰及陰道發(fā)生明顯水腫陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗含有染病病源菌，判斷陰道炎制作成功。

2.1.2 霉菌性陰道宮頸炎動物模型[2～3] 把純種白色念珠菌經(jīng)傳代培養(yǎng)制作高濃度病菌懸浮液，用濃度為1×109 CFU/mL白色念珠菌混懸液0.2 mL用導管注進家兔宮頸內(nèi)，每天1次，連續(xù)造模3天后，臨床檢查動物外陰及陰道水腫紅腫及出現(xiàn)分泌物情況。臨床檢查動物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗是否含染病病源菌。以外陰及陰道發(fā)生明顯水腫陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗含有染病病源菌，判斷陰道炎制作成功。

2.1.3分組給藥與觀察

2.1.3.1 細菌性陰道宮頸炎實驗 將造模成功的50只家兔隨機分為模型、碘伏、低濃度、中濃度、高濃度泡沫組，一共5組，另外取10只未造模雌性家兔作為空白對照組，每組每只兔每天給相應藥物一次，連續(xù)給藥6 d，給藥劑量灌滿陰道和到達宮頸部及涂抹陰門周圍為準，空白對照組給予無菌生理鹽水。每日對動物一般行為和外陰情況進行觀察，末次給藥6 h后臨床檢查動物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗是否含染病病源菌。外陰及陰道紅腫判為陽性（+），否則判為（-），分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗含陽性菌判為陽性（+），否則判為（-），

2.1.3.2 霉菌性陰道宮頸炎實驗 將造模成功的50只家兔隨機分為模型、保婦康栓、低濃度、中濃度、高濃度泡沫組，一共5組，另外取10只未造模雌性家兔作為空白對照組，每組每只兔每天給相應藥物一次，連續(xù)給藥6天，給藥劑量灌滿陰道和到達宮頸部及涂抹陰門周圍為準，空白對照組給予無菌生理鹽水。每日對動物一般行為和外陰情況進行觀察，末次給藥6 h后臨床檢查動物外陰及陰道紅腫及出現(xiàn)分泌物情況，取陰道及宮頸分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗是否含染病病源菌。外陰及陰道紅腫判為陽性（+），否則判為（-），分泌物經(jīng)臨床微生物檢驗含陽性菌判為陽性（+），否則判為（-）。

2.1.4 家兔陰道刺激黏膜性試驗[4～6] 實驗方法按衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）陰道黏膜刺激實驗開展。選用健康、成年，實驗前應檢查動物陰道口有無分泌物、充血、水腫和其它損傷情況的雌性白色新西蘭家兔24只，體重2.0 kg～2.5 k g。將動物隨機分為：陰性對照組、低濃度受試物、中濃度受試物組、高濃度受試物組、每組6只；給藥：每日將動物仰面固定，暴露出會陰和陰道口。將導管用受試液或?qū)φ找簼駶櫤筝p柔地插入陰道（3 cm～4 cm），緩慢噴入灌滿受試液，抽出導管，完成一次給藥，每日如上給予相應受試樣品一次，對照組動物用生理鹽水作同樣處理，連續(xù)用藥6 d。末次給藥后24 h，采用氣栓法處死動物，剖腹取出完整的陰道，縱向切開，肉眼觀察是否有充血、水腫等癥狀，供病理取材時參考，然后將陰道放入10%福爾馬林溶液中固定24 h以上，選取陰道的兩端和中央3個部位的組織制片，HE染色后，進行組織病理學檢查。

病理解剖檢驗，按陰道黏膜刺激反應評分標準（表1）進行評分，按陰道黏膜刺激強度分級標準（表2）確定刺激性強度。

2.2 結(jié)果

2.2.1 中藥泡沫劑對家兔細菌性陰道炎的影響 各組動物造模后，外陰出現(xiàn)明顯紅腫，并出現(xiàn)分泌物，而空白組未觀察到明顯變化，模型組和各給藥組動物出現(xiàn)焦躁不安舔舐外陰的癥狀，隨著不斷給藥，各給藥組動物的紅腫現(xiàn)象逐步減輕，但給劑量組變化不一，以高劑量較為明顯；造模后動物食量和飲水減少，空白組飲食正常，模型組體重明顯下降，具體見表3。

2.2.2 中藥泡沫劑對家兔霉菌性陰道炎的影響 各組動物造模后，外陰出現(xiàn)明顯紅腫，并出現(xiàn)分泌物，而空白組未觀察到明顯變化，模型組和各給藥組動物出現(xiàn)舔舐外陰的癥狀，隨著不斷給藥，各給藥組動物的紅腫現(xiàn)象逐步減輕，但給劑量組變化不一，以高劑量較為明顯，造模后動物食量和飲水減少，空白組飲食正常，體重明顯增加，模型組體重明顯下降，具體見表4。

2.2.3 結(jié)論 動物造模3天后，與空白組比較，動物外陰及陰道出現(xiàn)了明顯的紅腫和分泌物，通過連續(xù)6 d給藥，陽性藥組和中藥泡沫劑低、中、高劑量組動物的紅腫和分泌物癥狀均有不同程度改善，中藥泡沫劑還表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系，說明中藥泡沫劑對家兔的細菌性和變色念珠菌引起的陰道炎有一定的治療作用，中藥泡沫劑低、中濃度對家兔陰道無刺激性，高濃度為極輕度刺激性。說明隨著濃度增加，對家兔陰道刺激性也增加，臨床使用要注意用藥濃度。

3 討論

3.1 細菌性陰道炎試驗中 模型對照實驗組家兔陰道上皮組織恢復和體質(zhì)較差；在培養(yǎng)鑒定過程中觀察到金色葡萄球菌大腸桿菌生長占優(yōu)勢，雜菌生長幾乎觀察不到，動物出現(xiàn)焦躁不安，飲食明顯減少，體重明顯下降等癥狀；碘伏消毒液治療家兔細菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復一般；在培養(yǎng)鑒定過程中觀察到雜菌與金色葡萄球菌大腸桿菌生長優(yōu)勢相當；低、中濃度中藥泡沫劑治療家兔細菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復一般；在培養(yǎng)鑒定過程中觀察到雜菌生長占優(yōu)勢，金色葡萄球菌大腸桿菌生長處于弱勢狀態(tài)。高濃度中藥泡沫劑治療家兔細菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復較好；在培養(yǎng)鑒定過程中觀察到雜菌生長占明顯優(yōu)勢，金色葡萄球菌大腸桿菌生長處于弱勢狀態(tài)，這種情況可能與中藥泡沫劑中含有黃柏、黃連、重樓、蛇床子、苦參等提取物具有一定的抑制細菌生長和抗炎止癢作用有關(guān)。

3.2 霉菌性陰道炎實驗中 模型組家兔霉菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復較差，白色念珠菌陽性的樣本，白色念珠菌生長站明顯優(yōu)勢；保婦康栓治療組家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復稍好，白色念珠菌陽性的樣本，觀察到雜菌生長與白色念珠菌生長優(yōu)勢相當；低、中濃度泡沫劑組，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復較模型組稍好，白色念珠菌陽性的樣本，觀察到雜菌生長與白色念珠菌生長優(yōu)勢相當；高濃度泡沫劑治療家兔霉菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復較好；白色念珠菌陽性的樣本，外觀觀察到雜菌生長占優(yōu)勢，白色念珠菌生長明顯處于弱勢狀態(tài)，這種情況可能與中藥泡沫劑中含有黃連、黃柏、苦參的有效抑制細菌和真菌的有效成分有關(guān)，另外中藥泡沫劑中含有重樓、蛇床子的提取物具有一定抗炎止癢作用，可以減輕動物因感染造成的霉菌性炎癥所引起的瘙癢，從實驗中可以觀察到中藥泡沫劑中高劑量組動物焦躁不安和舔舐外陰的癥狀明顯低于模型對照組，從陽性菌檢出率和病理檢查結(jié)果也得到印證。

3.3 通過上述實驗數(shù)據(jù)分析，低濃度泡沫劑治療家兔細菌性陰道宮頸炎，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復一般，療效較差；而高濃度泡沫劑對家兔細菌性陰道宮頸炎和霉菌性陰道宮頸炎作用較好，家兔陰道宮頸上皮組織恢復和體質(zhì)恢復及療效較好；說明中藥泡沫制劑療效隨中藥提取物濃度加大而增強，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；雖然中藥泡沫劑低、中濃度對家兔陰道無刺激性，高濃度為極輕度刺激性。說明隨著濃度增加，對家兔陰道刺激性也增加，臨床使用要注意用藥濃度。三種不同濃度消炎抗菌外用泡沫劑藥用于人體，還需考慮病源病灶環(huán)境的酸堿度及感染菌毒力強弱以及泡沫劑濃度高以后對陰道帶來的刺激性增加；（家兔陰道PH值均為7.2，接近中性；女性陰道PH值均為4.3，偏酸性）。家兔陰道感染細菌和霉菌陰道宮頸炎是純種菌株感染，毒力較強，泡沫劑給藥治療，療效相對要差一點；女性感染細菌和霉菌陰道宮頸炎，即使是急性感染，也有雜菌叢生，雜菌混合，病菌生長相互制衡，染病菌毒力較弱，泡沫劑給藥治療，療效相對較好。

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（收稿日期：2013-04-22）