提高網狀纖維染色質量的體會

【關鍵詞】 網狀纖維；染色質量；氨銀液

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.744 文章編號：1004-7484（2012）-08-3020-01

在病理日常技術工作中，為了疾病的鑒別診斷需要，除了常規的HE染色外，經常還需進行其他的特殊染色，其中經常會使用到網狀纖維染色方法。然而該項特殊染色技術較難掌握，并且染色結果的好壞受多種因素影響。我科經多年實際操作，現就提高該染色結果的體會介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取肝、胸腺、淋巴結等組織，10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋，切片厚約4um。

1.2 氨銀液的配制 用100ml小量杯盛10%硝酸銀水溶液5ml，徐徐滴加濃氨水，此時溶液產生沉淀，繼續滴加濃氨水至溶液變清亮，加入3%氫氧化鈉水溶液5ml，溶液再次生成沉淀，繼續緩緩滴加濃氨水至沉淀恰好溶解為止。最后加入蒸餾水至100ml即可。

1.3 染色方法 ①切片常規脫蠟至水后，再用蒸餾水洗滌。②0.5%酸性高錳酸鉀水溶液5min，蒸餾水沖洗。③2%草酸漂白1min，蒸餾水沖洗。④2%鐵明礬媒染10min，蒸餾水沖洗一次。⑤氨銀液染1-2min蒸餾水沖洗。⑥10%中性福爾馬林液還原1min，流水沖洗3min。⑦V.G復染3min，水洗。⑧常規脫水、透明、封固。

2 結果

網狀纖維呈黑色，膠原纖維呈紅色，紅細胞呈黃色。

3 討論

要染好網狀纖維，需要掌握好以下幾點：

3.1 切片的厚度要掌握在3至4um之間，不可太厚，不然容易造成脫片。

3.2 配制氨銀液時應注意以下幾點：①氨銀染色主要靠化學反應作用，因此在染液配制及染色過程中所使用的玻璃器皿如漏斗、量筒、滴管等一定要清潔，可先用稀鹽酸泡洗，再用蒸餾水沖洗干凈，放入烤箱烤干使用。禁用自來水洗滌。因為自來水所含雜質較多，與銀相遇會產生化學反應，影響染色效果[1]。②對相關試劑的純度與用量要嚴格要求。如硝酸銀純度不高而含較多雜質，則會導致配制時氨水加入過量，使得配制好的氨銀液著色效果差并且保存時間不長。滴加氨水時應邊加邊振蕩溶液，使溶液恰好變清亮即可。

3.3 高錳酸鉀氧化及草酸漂白的過程中是最容易產生切片脫落，因此時間均不宜太長。高錳酸鉀氧化以切片呈棕褐色為度，而草酸漂白至切片變白即可，不然極易造成切片脫落。

3.4 2%鐵明礬媒染時，各種染色方法的時間從3min到20min不等。我們經過多次實驗對照，感覺以10min最為理想。

3.5 切片在染氨銀液前，要用蒸餾水沖洗一下，以去除不必要的雜質而影響染色質量。氨銀液染色時間1-2min左右，以液面出現銀顆粒析出即可，不宜太久。染完氨銀液之后要用蒸餾水從側邊快速把氨銀液沖洗掉，避免氨銀液的析出物污染組織。有些方法中，氨銀液的染色以浸染為主。但我們認為這可能會出現兩個問題，其一，切片背景不夠清晰，組織上可能有銀顆粒或雜質的污染；其二，氨銀液用量過多，造成試劑的不必要浪費[2]。

3.6 以往網狀纖維染色方法中，都用到氯化金分色及硫代硫酸鈉固色。我們通過實際工作觀察，發現氯化金容易把切片中已經染上銀的比較纖細的網狀纖維的顏色褪掉，造成著色不均勻現象[3]。而我們省略這兩個步驟，對結果并無產生差異。

參考文獻

[1] 方曉燕，潘金娥，藍愛榮，黎飚.網狀纖維染色法的改良[J].右江民族醫學院學報，2001，5（1）：836-836.

[2] 楊世峰，程國平.介紹一種網狀纖維染色改良法[J].解剖學雜志，2010，1（2）：132-133.

[3] 劉少顏.介紹一種改良的骨髓石蠟包埋組織網狀纖維染色技術[J].臨床與實驗病理學雜志，2012，1（1）：104-104.