HPLC法測定祛風止痛濃縮丸中沒食子酸的含量

【摘要】 目的 建立祛風止痛濃縮丸中沒食子酸的含量測定方法。方法 采用HPLC法測定其中沒食子酸的含量。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.025mol/L磷酸（用三乙胺調pH2.7）（5：95）為流動相；檢測波長為266nm。結果 在選定的色譜條件下，供試液中沒食子酸與相鄰組分離度良好，陰性液沒有干擾，方法的穩定性、重現性、精密度、回收率試驗（RSD%=1.8%，n=6）均符合相關規定，三批樣品中每丸含沒食子酸分別為4.21mg、4.45mg和3.96mg。結論 采用HPLC法可以作為祛風止痛濃縮丸中沒食子酸的含量測定方法。

【關鍵詞】 祛風止痛濃縮丸；沒食子酸；HPLC

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.731 文章編號：1004-7484（2012）-08-3009-02

祛風止痛濃縮丸是在祛風止痛片的基礎上，經型劑改革制備而成。本制劑由老鸛草、槲寄生等7味中藥經加工制成。具有祛風止痛、散寒除濕、強壯筋骨之功能。用于風寒濕痹、關節疼痛、四肢麻木、腰膝酸軟。[1]老鸛草為主藥，擬以老鸛草中沒食子酸為制劑定量指標，定量方法為HPLC法。

1 儀器和試劑

1.1 儀器 島津LC-10AT液相色譜儀，SPD-10AV檢測器。

1.2 試劑 除甲醇為色譜純外，其余試劑都為分析純。

2 實驗方法

2.1 系統適用性與色譜條件試驗 填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相為甲醇-0.025mol/L磷酸（用三乙胺調pH2.7）（5：95）；理論塔板數以沒食子酸計算不應低于4000。在266nm紫外波長下檢測；相鄰成分色譜峰與沒食子酸的分離度應大于1.5。

2.2 對照品試液的配備 沒食子酸對照品在105℃干燥至恒重后精密稱取10mg，放置到100ml容量瓶中，用甲醇試劑溶解，稀釋至刻度線搖勻制成每1ml含0.1mg的試液，制成沒食子酸對照品液。

2.3 供試品試液的制備 精密稱定研細的供試品1.0g，置具塞錐形瓶內，精密加甲醇試劑100ml稱重，超聲提取30分鐘，放冷后再稱重，加甲醇至原重搖勻，過濾取濾液，制成供試品溶液。

2.4 測定法 精密吸取對照品試液5μl與供試品試液10μl，注入色譜儀中，測定色譜峰面積，計算后即得結果。

2.5 測定波長的確立 適量取沒食子酸對照品，加甲醇試劑溶解并制成每1ml含10μg的溶液，測定紫外吸收，在266nm紫外波長下有最大吸收，所以確定檢測波長為266nm。

2.6 陰性干擾試驗 取不含老鸛草的其它六味藥材，依照供試品試液制備方法制成陰性液。精密吸取供試品試液、陰性液和對照品試液各5μl，注入色譜儀中，繪制色譜圖，由色譜圖提示，在對照品試液色譜相應的位置上，供試品試液具有相同保留時間的色譜峰，陰性試液在此位無吸收峰，此方法專屬性強，對供試品中沒食子酸的含量測定沒有干擾。

2.7 對照品純度檢查 對照品沒食子酸（批號110831-9501），為含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供，經用歸一化法液相色譜法測定，含量大于98%。

2.8 線性范圍考察 精稱沒食子酸對照品9.35mg，放入100ml量瓶中，加甲醇試劑溶解，稀釋至刻度搖勻，制成每1ml含0.0935mg的對照品溶液，精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μl注入色譜儀中，測定色譜峰面積。對照品進量（μg）依次為0.1870、0.3740、0.5610、0.7480、0.9350；色譜峰面積依次為262256、541990、819282、1090789、1376037。橫坐標為進樣量，縱坐標為色譜峰面積，繪制標準曲線，經線性回歸，回歸方程為：Y=1484685X-14837.5，r=0.9999。由檢測結果得知，沒食子酸進樣量在0.1870μg-0.9350μg范圍內線性關系較好。

2.9 穩定性試驗考察 取供試品（批號030201），制成供試液。精密吸取供試液10μl，分別按0、2、4、6、8、10小時時間間隔，進樣分析，測定色譜峰面積。色譜峰面積依次為565088、578799、556013、564576、565685、552652。χ 為563802.2，RSD%為1.7。由測定結果提示：供試品液配備后10小時內測定，沒食子酸色譜峰的峰面積沒有明顯改變，因此在此時間內，供試品液化學性質比較恒定。

2.10 精密度試驗考察 精密吸取同一供試品液5μL（批號030201），6次連續進樣，測定色譜峰面積，測定結果色譜峰面積依次為565088、552485、578799、565858、557542、554845， χ為562436，RSD/%為1.8。測定結果顯示精密度試驗符合相關規定。

2.11 重復性試驗考察 取供試品液（批號030201），如法重復6次操作，樣品含量（mg/g）依次為4.18、4.15、4.16、4.16、4.20、4.21。 χ為4.18，RSD%為0.6。由測定結果顯示出測定方法的重現性較好。

2.12 回收率試驗考察 取供試品（批號030201，含量4.18mg/g）研碎，每份精稱1g，置具塞錐形瓶中，精密加入沒食子酸對照品1mL（濃度4.01mg/ml），如法操作測定，測定結果以樣品稱量（g）、樣品含量（mg）、對照品加入量（mg）、實測量（mg）、回收率（%）順序如下：1.0212、4.26、4.01、8.19、98.0；1.0285、4.37、4.01、8.19、95.3；1.0704、4.46、4.01、8.38、96.5；1.0311、4.30、4.01、8.28、99.3；1.1215、4.68、4.01、8.64、98.7；1.0483、4.37、4.01、8.64、98.7。平均回收率（%）為96.9，RSD（%）為1.8。測定結果提示：本方法回收率在95.3-99.3%之間，RSD為1.8%，符合相關規定。

2.13 樣品含量測定數據 經用上述方法，測定三批樣品中沒食子酸的含量。測定結果按批次、X1、X2、沒食子酸含量（mg/g）順序依次為030201、4.18、4.24、4.21；030202、4.49、4.41、4.45；030203、4.01、3.91、3.96。依據測定結果，暫定該品每克含老鸛草以沒食子酸（C7H6O5）計，不得低于3.0mg。

3 討論

祛風止痛濃縮丸是在祛風止痛片的基礎上，進行劑型改革而制成，祛風止痛片收載于中國藥典，但并無任何有關含量測定控制。本文對其中的沒食子酸進行了含量測定，沒食子酸是老鸛草中的主要成分，也是祛風止痛的活性成分，因此對沒食子酸的含量測定對祛風止痛制劑的質量控制具有重要意義。

參考文獻

[1] 中華人民共和國藥典委員會 中華人民共和國藥典一部（2005年版）[S].化學工業出版社，552.