PCR測序證實為馬紅球菌感染個案

【關鍵詞】 馬紅球菌；PCR測序

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.671 文章編號：1004-7484（2012）-08-2955-02

馬紅球菌（Rhodococcus equi）主要對動物治病（馬、豬、牛），被認為是人類少見的機會致病菌。近年來，人類馬紅球菌感染的報道逐漸增多，尤其發生于免疫受損的人群。今年四月我院兒科收治了一位2歲患兒，“間歇性咳嗽、發熱20余天入院”，血培養陽性，最后經南方醫院檢驗科PCR測序證實為馬紅球菌感染，現將該患兒的診治過程，血培養分離鑒定過程報告如下：

1 患者資料

1.1 簡要病史 患兒，男，1歲，20余天前無明顯誘因出現咳嗽，伴有間斷性發熱，最高體溫40.2℃，曾在外院就診，診斷為支氣管炎，予以頭孢美唑、阿奇霉素針劑、氨溴索靜脈滴注，期間病情有好轉幾天，但停藥后咳嗽癥狀又加重，仍有反復發熱。于當日因“間歇性咳嗽、發熱20余天”由門診抱送入院。自起病以來，患兒精神、睡眠欠佳，大小便正常。后用阿奇霉素聯合頭孢曲松，稍有好轉，體溫仍有波動，38左右，偶有咳嗽。到家屬被告知血培養陽性，目前治療療程未到時，家長表示已了解病情，堅決要求出院，隨簽字患兒出院。

1.2 查體 T39.8，P135次/分，R50次/分，Wt7Kg，咽部充血，扁桃體I度腫大，雙肺呼吸音粗，肺底可聞及細濕性啰音，心、肝脾正常。

1.3 輔助檢查 血清肺炎支原體抗體陰性，血常規：WBC26.7*109/L，N82.1%，L10.7%。X線檢查：雙肺紋理增多，模糊，右中下肺大片狀模糊陰影，密度不均勻，邊緣模糊。血培養陽性，API CORYNE鑒定為低分辨率紅球均屬。

2 檢查方法

2.1 血培養分離鑒定

2.1.1 標本采集 嚴格無菌操作抽取患兒靜脈血3mL，無菌注入雙向培養瓶，及時送往檢驗科微生物室37培養。

2.1.2 培養觀察、鑒定

2.1.2.1 37℃培養第三天，雙向培養基固相有大小0.5-1mm、不透明、圓形菌落生長，液相微渾濁。革蘭氏染色鏡檢為G+桿菌，細菌形態呈多形性。隨轉種哥倫比亞血平板、伊紅美蘭平板37℃純培養，24小時后，血平板上出現大小0.5-1mm、灰色、不透明、濕潤如水跡樣菌落，革蘭氏染色鏡檢為G+球菌。此時雙向培養基里的培養物革蘭氏染色鏡檢多為G+球菌。37℃培養48小時后血平板上的菌落顏色變為深黃色，粘稠度增加。

2.1.2.2 轉種伊紅美藍、巧克力平板均不生長，轉種普通營養平板生長良好。

2.1.2.3 觸酶陽性，氧化酶陰性，通過API CORYNE板條鑒定出低分辨率紅球均屬%ID 59.3 T0.86。

生化反應：硝酸鹽還原+、堿性磷酸酶+、比嗪酰胺+、七葉靈（水解）-、明膠-、不分解任何的糖類、用金黃色葡萄球菌做CAMP-。

2.1.3 PCR測序結果如下：

GGGAGGAGTCGGATACTGGGCGTAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCGTCCGTGAAAACTTGGGGCTCAACCCCAAGCTTGCGGGCGATACGGGCAGACTTGAGTACTGCAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGGTCTCTGGGCAGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCGCTAGGTGTGGGTTTCCTTCCACGGGATCCGTGCCGTAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGTTTGACATATACCGGAAAGCCGTAGAGATACGGCCCCCCTTGTGGTCGGTATACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTGTGTTGCCAGCGCGTAATGGCGGGGACTCGCAGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCCAGGGCTTCACACATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGCTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCTTAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATCGGGGTCTGCAACTCGACCCCGTGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCATGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGAGGGAGCCGTCGAAGGTGGGATCGGCGATTGGGACGAGTCGTACAGGCAGCCCAAATATAAA。

2.2 藥敏試驗 棒狀桿菌沒有藥敏板條，馬紅球菌還沒有藥敏標準，用ATB STAPH 2（00）板條做的藥敏24小時和48小時結果見下表：

3 結果

3.1 根據其血培養新鮮菌落為G+桿菌，形態具有多形性，陳舊培養物為G+球菌，在血平板培養48小時后，菌落顏色變深黃，生化反應觸酶+、硝酸鹽還原+、氧化酶-、不分解任何糖類，API CORYNE鑒定結果以及抗生素敏感試驗，都與劉玲梅等和葉東方、伍偉國報道的馬紅球菌生物特性相符。在普通營養平板、血平板上生長良好，而在伊紅美藍、巧克力平板上不生長。現在還未見有馬紅球菌在巧克力平板上生長的文獻報道。本菌株在巧克力平板上是不生長，是共性還是個性，因病例太少不能說明。

3.2 經過PCR測序，也證實該菌為馬紅球菌。

3.3 患兒咳嗽、發熱，血清CRP106.37mg/L，WBC26.7*109/L，N82.1%，說明存在細菌感染，此時血培養陽性與臨床癥狀相符；李慶，劉祥泉，趙禾，等報道的馬紅球菌的治療療程與感染個體的免疫情況、感染部位和病程長短有關，5-60天不等[4]，患兒在院外、院內都用了阿奇霉素和頭孢類藥物，病情有所好轉，但仍有體溫波動、間斷咳嗽，而馬紅球菌對紅霉素、左氧氟沙星、萬古霉素敏感，對青霉素耐藥，所用阿奇霉素屬敏感藥物，但因為在外院是間斷用藥、在本院療程太短患兒家長就要求出院，療程不夠療效自然不明顯，患兒血清肺炎支原體抗體陰性，肺X線出現大片模糊陰影，這與馬紅球菌對肺泡吞噬細胞持續破壞[2]相吻合；該患兒1歲，Wt7Kg，其免疫狀態加大了其被感染的機會，以上說明血培養陽性菌就是該患兒的致病菌。

綜上所述，該患兒感染了馬紅球菌。

4 討論

現文獻報道的馬紅球菌的感染主要是有免疫損傷、免疫缺陷的人群，僅有少數病例屬于免疫功能正常的患者[5]，該病例是位免疫力低下的小兒。所以，在臨床工作中，對于免疫力低下人群的肺部感染，也要考慮到馬紅球菌感染的可能；而臨床微生物檢驗工作中遇到新鮮培養物為G+桿菌，形態具有多形性，陳舊培養物為G+球菌，在血平板培養48小時后，菌落顏色變深黃，生化反應觸酶+、氧化酶-，就要考慮馬紅球菌的可能，應快速報出藥敏結果，以便指導臨床選擇有效抗菌藥物，對患者進行足夠療程的有效治療。另外，對于痰液標本，因菌較雜，應將平板培養48-72小時，再觀察菌落呈色變化，以防漏檢。

參考文獻

[1] 劉玲梅，崔龍秀，金鳳玲.血培養中馬紅球菌的分離和鑒定.蘭州醫學院學報，1996，22（1）：53.

[2] 葉東方，伍國偉.艾滋病患者并發肺部馬紅球菌病九例臨床分析.中華臨床感染病雜志，2008，1（4）：235-236.

[3] 劉志遠，劉貴建，潘健，等.馬紅球菌致老年女性肺部感染一例.中華臨床醫師雜志，2011，5（1）：301-302.

[4] 李慶，劉祥泉，趙禾，等.中西醫結合治療馬棒狀桿菌感染38例.中國中西醫結合雜志，1998，18（2）：91.

[5] 王敬之.革蘭氏陽性桿菌的鑒定//李仲興，鄭家齊，李家宏.診斷細菌學.香港：黃河文化出版社，1992：214.