一種中藥組合物的抗氧化清除自由機效果實驗

【摘要】 目的 考察一種延緩衰老美白肌膚的組合物，通過實驗驗證其抗氧化清除自由機的效果。方法 將該組合物通過水煎的方法提取其有效成份，通過抑制酪氨酸酶活性的實驗[1]和對DPPH自由基的清除實驗[2]這兩個實驗來考察。結果 本組合物提取液有較強的酪氨酸酶活性抑制能力，其活性亦與Vc乙基醚、熊果苷相當，有較強的DPPH自由基清除能力，其活性也與Vc乙基醚、熊果苷相當。結論 本組合物具有抗氧化清除自由機的效果，有延緩衰老美白肌膚的作用。

【關鍵詞】 中藥組合物；抗氧化清除自由機

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.650 文章編號：1004-7484（2012）-08-2938-02

一種中藥組合物，其組分以重量計為：芍藥花41份，銀杏葉21份，黃芪24份，枸杞子14份，被作為延緩衰老美白肌膚的袋泡茶使用。為驗證其是否具有所述效果，筆者進行了以下實驗：

1 抑制酪氨酸酶活性的實驗

1.1 儀器與試劑 UV762紫外可見分光光度計（上海分析儀器廠），FA2004電子分析天平（上海良平儀器有限公司），酪氨酸酶、Vc乙基醚、熊果苷為成都德萊生物科技有限公司提供。

1.2 樣品的制備 稱取芍藥花41g、銀杏葉21g、黃芪24、枸杞子14g，加水1000ml，置燒瓶中加熱，保持微沸1.5小時，濾過，收集濾液備用，再加水1000ml，保持微沸1小時，濾過，收集濾液，與前面的濾液合并，靜置，取上清液，濃縮至200ml，即得。

1.3 測試方法 取四只試管分別標上1#、2#、3#、4#；參照表1的試劑用量和濃度，在四只試管內分別加入各列所列的相應反應液，振搖混和均勻，于37oC預熱10min，然后在各試管內分別加入酪氨酸酶溶液，于37°C準確反應5min，迅速轉移至比色皿中，于475nm處測吸光度值（A）。

1.4 結果計算與統計 按下式計算對酪氨酸酶的抑制率：

抑制率=[1-（A3-A4）/（A1-A2）]×100%

式中：A1、A2、A3、A4分別代表表3中1#、2#、3#、4#四個試管中反應后于475nm處所測得的吸光度值。

以導致酪氨酸酶活力下降50%的抑制劑濃度（IC50）來表征抑制劑的功效。抑制酪氨酸酶活性檢測，詳細結果，見表2。

以上結果表明本組合物提取液有較強的酪氨酸酶活性抑制能力，其活性亦與Vc乙基醚、熊果苷相當。

2 對DPPH自由基的清除實驗

2.1 儀器與試劑 FA2004電子分析天平（上海良平儀器有限公司），UV762紫外可見分光光度計（上海分析儀器廠），自由基（DPPH）、Vc乙基醚、熊果苷為成都德萊生物科技有限公司提供，乙醇為成都金山試劑有限公司提供。

2.2 樣品的制備 稱取芍藥花41g、銀杏葉21g、黃芪24、枸杞子14g，加水1000ml，置燒瓶中加熱，保持微沸1.5小時，濾過，收集濾液備用，再加水1000ml，保持微沸1小時，濾過，收集濾液，與前面的濾液合并，靜置，取上清液，濃縮至200ml，即得。

2.3 樣品對DPPH自由基的清除實驗。

DPPH溶液的配制：

準確稱取DPPH7.88mg，置于100ml容量瓶中，用無水乙醇溶解至刻度，即得濃度為2×10-4mo1/l的DPPH溶液，避光保存（0-4℃）。

供試液的制備：

取本組合物的提取液20ml，置于100ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度。

測定方法：

分別取樣品溶液5ml與2×10-4mo1/lDPPH溶液5ml均勻混合，在黑暗中放置30min，以甲醇為空白在525nm處測定其吸光度A，并以下式計算其清除率：

清除率（%）=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%

式中：Ac：5ml乙醇加5mlDPPH溶液的吸光度；

Ai：5ml待測液加5mlDPPH溶液的吸光度；

Aj：5ml待測液加5ml乙醇的吸光度。

按照上面公式計算清除率。

以清除DPPH自由基50%的活性物濃度（IC50）來表征自由基清除劑的功效。抗DPPH自由基活性檢測，詳細結果，見表3。

結果表明本組合物提取液有較強的DPPH自由基清除能力，其活性與Vc乙基醚、熊果苷相當。

通過以上體外活性檢測，證明本組合物具有抗氧化清除自由機的效果，有延緩衰老美白肌膚的作用。

參考文獻

[1] 樓彩霞，樸香蘭.《時珍國醫國藥》，2011年第11期.

[2] 彭瓊，陳叢瑾.《光譜實驗室》，2008年第3期.