金屬硫蛋白在肺癌細胞系中的表達及其臨床意義

【摘要】 目的 探討肺鱗癌、腺癌中金屬硫蛋白在肺癌細胞系中的表達。方法 運用SP免疫組化方法檢測檢測肺癌細胞系的表達定位。結果 MT在肺癌細胞系A549、BE1表達，均為胞漿表達。在HBE為胞核表達。結論 MT在非小細胞肺癌轉移起促進作用。

【關鍵詞】 金屬硫蛋白；肺癌；轉移

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.120 文章編號：1004-7484（2012）-08-2512-01

Expression and clinical significance of metallothionein in lung cancer cell lines

LIU Jun，ZHANG Yun-biao，ZHANG Ting，SHEN Xiao-xia，ZHANG Jun-yi，JIANG Gui-yang

1.Liaoning province Shenyang city Sujiatun district hospital pathology department，Liaoning Shenyang 110101；

2.Liaoning province Shenyang Hunnan New District Hospital，Liaoning Shenyang 110068；

3.Department of Ophthalmology the First Affiliated Hospital China Medical University，Liaoning Shenyang 110001；

4.The Fourth Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine Department of hemodialysis，Liaoning Shenyang 110101；

5.Department of Pathology，Chifeng University School of medicine in Inner Mongolia，Affiliated Hospital Pathology Department，Inner Mongolia Chifeng 024000；

6.Department of Pathology，China Medical University，Liaoning Shenyang 110001

【Abstract】Objective Lung squamous cell carcinoma，adenocarcinoma of metallothionein expression in lung cancer cell lines.Methods Sp immunohistochemical methods to detect Expression and localization of the detection of lung cancer cell lines.Results MT results in lung cancer cell line A549，BE1 expression are cytoplasm.In HBE expression for the nucleus.Conclusion MT role in non-small cell lung cancer and metastasis.

【Key words】 Metallothionein protein；Lung cancer；Transfer

金屬硫蛋白（Metallothionein，MT）參與許多病理過程，包括金屬離子穩態和解毒、保護氧化損傷。在人體多種腫瘤，如乳腺癌、腎癌等表達增加，但在某些腫瘤，如肝細胞癌（HCC）表達下調，結論不盡一致。MT在肺癌細胞系中的表達目前研究報道較少。我們應用免疫組化方法來檢測MT在肺癌細胞系的表達，并簡單探討其發生機制。

1 材料與方法

1.1 標本來源 肺癌細胞系，取自中國醫科大學病理教研室，三種分別為：肺腺癌細胞系A549、HBE、肺巨細胞癌細胞系BE1。

1.2 試劑 實驗試劑兔抗人MT單克隆抗體（FL-61，sc-11377）購自（三塔公司），s-p試劑盒（kit-9701）購自（福州邁新生物技術開發有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 細胞培養 肺腺癌細胞系A549用DAAM培養基培養、HBE、BE1細胞系用含10%的胎牛血清的1640培養基培養后，于含0.5%CO2的37°C孵箱內培養，0.25%胰蛋白酶消化、傳代。

1.3.2 肺癌細胞系的免疫化學染色（s-p）法 選擇生長狀態好的細胞一瓶，待細胞貼壁生長且伸開偽足，形態恢復正常時倒掉培養基，制作細胞爬片。加入固定液固定20分鐘。加入0.2%的Triton-100打孔，37°C孵育15分，加入A液，室溫孵育20分，加入B液，室溫孵育20分，加稀釋的一抗（1：100），4℃冰箱過夜，加入C液，室溫孵育15分，PBS洗5′×3遍。加入D液，室溫孵育15分，PBS洗5′×3遍。DAB顯色（棕褐色反應產物代表抗原定位），蘇木素復染，中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為陰性對照。

2 結 果

MT在肺癌細胞系HBE、A549、BE1的表達。采用SP法進行免疫組織化學染色檢測MT在肺癌細胞系A549、BE1表達，均為胞漿表達。在HBE為胞核表達。

3 討 論

MT是由位于染色體16q13上的10個功能性基因（MT—lA、1B、lE、lF、IG、lH、IX、2A、3A、4A）的異構體基因家族編碼[1]。MT分子可與自由基結合，具有多種重要的生理功能[2]，抗氧化損傷，防止機體衰老功能增強機體應激能力。

本次實驗，我們首次用免疫細胞化學方法檢測了HBE胞核表達，A549和BE1細胞系，同樣有癌細胞的胞漿表達。從實驗結果可得到，MT在非小細胞肺癌轉移起促進作用，并且這種作用是在細胞漿上發揮的。MT的表達可能是非小細胞肺癌發生的早期事件，在非小細胞肺癌發生演變中起促進作用。

參考文獻

[1] West A K，Stallings R，Hildebrand C E，et al.Human metallothionein genes：structure of the functional locus at 16q13.Genomics，1990，8（3）：513-518.

[2] Miles A T，Hawksworth G M，Beattie J H，et a1.Induction，regulation，degradation and biological significance of mammalian metallothionein[J].Crit Rev Biochem Mol Biol，2000，35（1）：35-70.