血紅蛋白與轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)合檢測(cè)在消化道出血疾病中的臨床價(jià)值研究

【摘要】 目的 探討血紅蛋白（Hb）法與轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）法檢測(cè)消化道出血性糞便標(biāo)本的臨床診斷符合率，研究Hb和Tf 聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率及其方法的互補(bǔ)性。方法 使用便隱血試紙條及轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測(cè)試紙條對(duì)61例消化道出血性疾病患者的糞便標(biāo)本及20例無(wú)消化道出血性疾病糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)兩種方法單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)（或Hb或T f其中一項(xiàng)陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性）的陽(yáng)性率，并與化學(xué)法（匹拉米酮）比較。結(jié)果 聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率：正常對(duì)照組5%，上消化道組60%，下消化道組67.7%，p>0.05，消化道出血繼發(fā)性貧血（簡(jiǎn)稱貧血）組62.7%，非貧血組64.3%；單獨(dú)檢測(cè)人Hb陽(yáng)性率：正常對(duì)照組為0%，上消化道組40%，下消化道組64.5%，P<0.05，（有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），貧血組52.6%，非貧血組52.3%；單獨(dú)檢測(cè)Tf陽(yáng)性率：正常對(duì)照組為5%，上消化道組50%，下消化道組61.3%，P>0.05，貧血組57。9%，非貧血組54.8%。結(jié)論 Hb/Tf聯(lián)合檢測(cè)比其單一檢測(cè)對(duì)診斷消化道出血性疾病更具臨床價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 消化道出血；血紅蛋白檢測(cè)；轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測(cè)；聯(lián)合檢測(cè)

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.042 文章編號(hào)：1004-7484（2012）-08-2438-03

The clinical value of the joint detection of hemoglobin and transferrin in the digestive tract bleeding disorders

XU Guo-sheng，CHEN Hui

1.Yonghe district of guangzhou city rose street community health service center of laboratory 511356；

2.Guangzhou City Development Zone，the functions of hospitals Branch Zip Code 510730

【Abstract】Objective To investigate the hemoglobin （Hb） method and transferrin protein （Tf） was detected by gastrointestinal bleeding stool specimens of clinical diagnosis coincidence rate，the joint detection of Hb and Tf-positive rate and its method of complementarity.Methods Will occult blood test strip and transferrin detection test strip on the stool specimens of 61 cases of gastrointestinal bleeding in patients with diseases and 20 cases of gastrointestinal bleeding disease stool specimens for testing and evaluation of two methods were tested alone，and the United detection （or Hb or T f one positive is judged to be positive） positive rate，and compared with the chemical method （horses Lamy ketone）.Results The testing positive rate： 5% of the normal control group，60% of the upper gastrointestinal group，the lower digestive tract group 67.7%，p>0.05，gastrointestinal bleeding secondary anemia （referred to as anemia） Group 62.7%，non-anemia group was 64.3 %；separate detection of human Hb-positive rate： the normal control group was 0%，40% of the upper gastrointestinal group of lower gastrointestinal group 64.5%，P<0.05 （statistically significant），anemia，52.6%，non-anemia group was 52.3 %；are independently tested positive rate of T f： the normal control group was 5%，upper gastrointestinal group 50%，61.3% of the lower digestive tract group，P>0.05，anemia group 57.9%，54.8% of the non-anemia group.Conclusion Hb / Tf joint detection than single detection in the diagnosis of gastrointestinal bleeding disorders more clinical value.

【Key words】 Gastrointestinal bleeding hemoglobin detection switch to the joint detection of ferritin

便隱血實(shí)驗(yàn)（FOB）為雙抗體夾心法檢測(cè)糞便中人Hb抗原的一種方法，因其檢測(cè)的敏感度高，特意性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單快捷且不受食物和藥物的影響而被當(dāng)今各醫(yī)院作為臨床檢測(cè)便隱血的一種常規(guī)手段，但臨床檢驗(yàn)實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，患者有消化道出血的表現(xiàn)，而FOB試驗(yàn)結(jié)果為陰性。Tf檢測(cè)法為一種新型檢測(cè)消化道出血的方法，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：Tf與Hb聯(lián)合檢測(cè)可顯著提高消化道出血檢出的陽(yáng)性率，為進(jìn)一步探討Tf/Hb聯(lián)合檢測(cè)消化道出血的臨床價(jià)值，我們對(duì)中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院20例正常對(duì)照和61例臨床診斷為消化道出血（其中19例繼發(fā)貧血）性疾病患者糞便進(jìn)行Tf與Hb的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 ①20例正常對(duì)照標(biāo)本（經(jīng)檢查無(wú)消化道出血），其中男12，女8例，年齡24-77歲，平均年齡49歲。②61例臨床診斷為消化道出血性疾病的患者（包括胃及腸的潰瘍、出血、腫瘤、息肉），以屈氏韌帶為界，分上/下消化道，其中上消化道出血30例，下消化道出血31例，貧血（輕、中度）19例，11例有營(yíng)養(yǎng)不良的指標(biāo)。其中男35例，女26例，年齡7-85歲，平均年齡54歲。

1.2 試劑 ①血紅蛋白法：“消康保”便隱血試紙條：采用免疫雙抗體夾心原理檢測(cè)糞便中人Hb，LOT：20070618，有效期至20081228，由（萬(wàn)華普曼公司）生產(chǎn)。②轉(zhuǎn)鐵蛋白法：“消康保”轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測(cè)試紙條：采用免疫雙抗體夾心原理檢測(cè)糞便中人Tf。LOT：20061118，有效期至20080517，由萬(wàn)華普曼公司生產(chǎn)。③化學(xué)法：A液為匹拉米酮，B液為H2O2、乙醇。采用Hb具有過(guò)氧化物酶活性催化H2O2釋放新生態(tài)O2，氧化顯色劑匹拉米酮而呈色判斷。LOT：060530，有效期至080530，由珠海BASO生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 條形試紙（免疫法）檢測(cè)操作步驟 ①使用采便棒取樣：將小試管編號(hào)放置在試管架上，加入1ml蒸餾水，用采便棒在樣本的6個(gè)不同部位取樣，將收集的標(biāo)本放入小試管內(nèi)，攪拌混勻；②將檢測(cè)試紙條標(biāo)有MAX線的一端插入小試管中，液面深度不得超過(guò)MAX線。在小試管中停留約1min后取出，5min內(nèi)觀察結(jié)果。

1.3.2 化學(xué)法操作步驟 ①使用采便棒取樣：將小試管編號(hào)后放置在試管架上，加入1ml蒸餾水，用采便棒在樣本的6個(gè)不同部位取樣，將收集的標(biāo)本放入小試管內(nèi)，攪拌混勻；②往小試管中分別加入0.5ml A液和0.5ml B液，輕輕震蕩混勻，3-5min觀察結(jié)果。

1.3.3 Hb和Tf的線性范圍 ①取Hb濃度為44g/L的全血標(biāo)本0.5ml，經(jīng)蒸餾水對(duì)倍稀釋，進(jìn)行檢測(cè)。3.2 取Tf標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為9.46g/L和2.37g/L，蒸餾水稀釋后進(jìn)行檢測(cè)。3.3 Hb和Tf的穩(wěn)定性比較；②取血紅蛋白與轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果均為弱陽(yáng)性的糞便標(biāo)本，經(jīng)37度孵育20h再進(jìn)行Hb和Tf檢測(cè)；③分別取血紅蛋白與轉(zhuǎn)鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，再酸性環(huán)境下（PH值1-2），轉(zhuǎn)鐵蛋白至少穩(wěn)定20小時(shí)，而血紅蛋白易被破壞，4h衰減約60%-90%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 ①用同種方法（如Hb法）對(duì)上消化道和下消化道出血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果，使用行x列表的X2檢驗(yàn)，所得P值。②用不同方法對(duì)同一標(biāo)本（如上消化道出血標(biāo)本）進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果使用配對(duì)資料X2檢驗(yàn)，所得值為P1值。

2 結(jié) 果

注：1.61例樣本中有11例具有營(yíng)養(yǎng)不良的指標(biāo)（Alb和PAlb同時(shí)下降），但臨床尚未診斷為營(yíng)養(yǎng)不良的病歷標(biāo)本，Hb檢出8例，Tf檢出7例，聯(lián)合檢測(cè)檢出10例，化學(xué)法檢出10例。2.P值為上消化道和下消化道出血標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行行x列表的X2檢驗(yàn)所得：p1值為Hb/Tf聯(lián)合檢測(cè)和單一檢測(cè)Hb結(jié)果進(jìn)行配對(duì)資料X2檢驗(yàn)所得。

注：61例樣本中有11例具有營(yíng)養(yǎng)不良的指標(biāo)（Alb和PAlb同時(shí)下降），但臨床尚未診斷為營(yíng)養(yǎng)不良的病歷標(biāo)本，Hb檢出8例，Tf檢出7例，聯(lián)合檢測(cè)檢出10例，化學(xué)法檢出10例。

Hb和Tf的線性及穩(wěn)定性結(jié)果：①測(cè)得Hb的線性范圍：0.2-2000ug/ml；②測(cè)得Tf的線性范圍：40ng-2000ug/ml；③血紅蛋白與轉(zhuǎn)鐵蛋白經(jīng)37度20h后檢測(cè)，雖仍能判斷出弱陽(yáng)性，但孵育前后Hb測(cè)試線清晰度的減弱程度較Tf的明顯。

3 討 論

從表1可看出，正常對(duì)照組單獨(dú)檢測(cè)Hb陽(yáng)性率為0，單獨(dú)檢測(cè)Tf陽(yáng)性率為5%；聯(lián)合檢測(cè)時(shí)陽(yáng)性率為5%，P1>0.05（無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），化學(xué)法陽(yáng)性率為15%。Tf檢測(cè)到1例（與化學(xué)法重疊）弱陽(yáng)性，經(jīng)臨床隨訪，該患者為鼻中隔偏曲患者，留取標(biāo)本時(shí)天氣較冷干燥，鼻腔出現(xiàn)少量出血，部分血液吞咽入胃，其他2例化學(xué)法陽(yáng)性者與正常進(jìn)食的肉類，菠菜相關(guān)聯(lián)屬假陽(yáng)性。在免疫法檢測(cè)中，可因試紙靈敏度過(guò)高而引起一些假陽(yáng)性的出現(xiàn)，如服用刺激胃腸道的藥物引起的消化道出血（2-5ml/24h）[1]，但本課題20例正常對(duì)照中Hb陽(yáng)性率為0，可能與所檢標(biāo)本數(shù)較少有關(guān)。

對(duì)于上/下消化道出血，單獨(dú)檢測(cè)Hb陽(yáng)性率分別為40%、64.5%，P<0.05（有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），單獨(dú)檢測(cè)Tf陽(yáng)性率為50%、61.3%，聯(lián)合檢測(cè)時(shí)陽(yáng)性率為60%、67.7%。單一檢測(cè)Hb時(shí)對(duì)上/下消化道出血病人組P<0.05，說(shuō)明Hb法檢測(cè)下消化道出血病人標(biāo)本陽(yáng)性率大于檢測(cè)上消化道出血病人標(biāo)本陽(yáng)性率；而單一檢測(cè)Tf對(duì)于上/下消化道出血病人標(biāo)本陽(yáng)性率之差較Hb的顯著下降，且P>0.05，說(shuō)明單一檢測(cè)Tf對(duì)于上/下消化道出血的病人標(biāo)本陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，而兩種方法聯(lián)合檢測(cè)時(shí)陽(yáng)性率均明顯提高。而僅僅針對(duì)于上消化道出血的標(biāo)本，Hb/Tf聯(lián)合檢測(cè)和單一檢測(cè)Hb結(jié)果進(jìn)行配對(duì)資料X2檢驗(yàn)所得P1<0.05，下消化道出血的P1>0.05，說(shuō)明Hb/Tf聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率比單一檢測(cè)Hb陽(yáng)性率高，原因在于在上消化道出血時(shí)，由于Hb經(jīng)過(guò)胃液、小腸液等消化液的作用，加上消化系統(tǒng)為一開(kāi)放式的系統(tǒng)，糞便中含有大量細(xì)菌，也可作用分解部分的血紅蛋白，使得Hb抗原下降，故其對(duì)上消化道出血檢出率較低[2]，僅為40%，而對(duì)下消化道出血，Hb在腸道中停留時(shí)間較為短暫，受以上兩種情況的影響較少，其檢出率大有提高。國(guó)外學(xué)者對(duì)Hb以外的血液成分Tf研究得出，Tf在腸道內(nèi)的抗菌能力和穩(wěn)定性都比Hb要強(qiáng)，且活性持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。取Hb和Tf都為弱陽(yáng)性的標(biāo)本，經(jīng)37度孵育20h再進(jìn)行Hb和Tf檢測(cè)，雖仍能判斷出弱陽(yáng)性，但孵育前后Hb測(cè)試線清晰度的減弱程度較Tf的明顯，在酸性環(huán)境下（PH值1-2），轉(zhuǎn)鐵蛋白至少可穩(wěn)定20小時(shí)，而血紅蛋白易被破壞，4h衰減約60%-90%，說(shuō)明轉(zhuǎn)鐵蛋白的穩(wěn)定性高于血紅蛋白，在檢測(cè)上消化道出血標(biāo)本時(shí)，Tf有優(yōu)于Hb的一面。

為進(jìn)一步探討Hb與Tf檢測(cè)的影響因素，我們還作了消化道出血引起的繼發(fā)性貧血組合非貧血組的對(duì)比，如表2.所示，19例繼發(fā)性貧血的患者標(biāo)本，Hb檢出10例，Tf檢出11例，聯(lián)合檢測(cè)檢出12例，繼發(fā)性貧血組和非貧血組標(biāo)本，Hb的檢測(cè)陽(yáng)性率前后變化不大，說(shuō)明輕、中度的貧血對(duì)Hb的檢測(cè)影響并不大。在消化道出血的病人中，由于消化道處于出血的狀態(tài)，機(jī)體很容易丟失部分的Hb和Fe2+離子，當(dāng)機(jī)體在缺Fe離子的狀態(tài)下，血漿Tf的濃度會(huì)上升，經(jīng)Fe2+治療后可恢復(fù)正常，而機(jī)體在缺Fe2+性低色素性貧血時(shí)，Tf會(huì)代償性合成增加[3]，根據(jù)表2.在Tf檢測(cè)中繼發(fā)性貧血組陽(yáng)性率比非貧血組稍高說(shuō)明了Tf的這一特性。

Tf的檢測(cè)存在一定的局限性，Tf為一種負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，血清中含量相對(duì)于Alb和Glb來(lái)說(shuō)并不高，營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)常隨Alb和Palb同時(shí)下降[4]，在消化道出血合并各種惡性疾病、遺傳性低/無(wú)轉(zhuǎn)鐵蛋白血癥中表現(xiàn)為測(cè)定值低甚至無(wú)的現(xiàn)象。在實(shí)踐中我們也發(fā)現(xiàn)，61例樣本中有11例具有營(yíng)養(yǎng)不良的指標(biāo)（Alb和PAlb同時(shí)下降），Hb檢出8例，Tf檢出7例，聯(lián)合檢測(cè)檢出10例，化學(xué)法檢出10例。Hb和Tf的聯(lián)合檢測(cè)能起到優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的作用，進(jìn)而提高檢測(cè)的陽(yáng)性率[5]。

傳統(tǒng)的化學(xué)法（AB液）常受患者服食某些藥物及進(jìn)食動(dòng)物血類制品的影響，大量臨床實(shí)踐和文獻(xiàn)報(bào)道[6]，其假陽(yáng)性率較高，故臨床檢驗(yàn)中不作為常規(guī)使用，但臨床上高度懷疑出血（如黑便），Tf和Hb檢測(cè)可能由于抗原過(guò)剩而出現(xiàn)后滯現(xiàn)象而使結(jié)果呈假陰性，化學(xué)法卻呈現(xiàn)出強(qiáng)陽(yáng)性，此時(shí)應(yīng)對(duì)所檢標(biāo)本進(jìn)行稀釋后再檢測(cè)，故化學(xué)法在臨床中也有一定的使用價(jià)值。

值得注意的是我們?cè)趯?shí)踐中發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)的氧化劑（如新生態(tài)O2）能氧化膠體金試紙條，使得測(cè)試線上出現(xiàn)一條淡橙紅色的線，造成假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，故在進(jìn)行便隱血試驗(yàn)時(shí)，試紙應(yīng)避免與AB液接觸，且在5min內(nèi)觀察結(jié)果。由于消化道出血在糞便中具有節(jié)段性，為了進(jìn)一步提高檢出的陽(yáng)性率，在進(jìn)行Tf/Hb聯(lián)合檢測(cè)的過(guò)程中，建議臨床連續(xù)3天采集標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)分析。

Hb法和Tf法在檢測(cè)消化道出血性疾病中都具有其自身的局限性，因此，為提高臨床診斷的準(zhǔn)確率，Hb/Tf聯(lián)合檢測(cè)為一種更有效的檢驗(yàn)方法。

4 結(jié) 論

Hb/Tf聯(lián)合檢測(cè)比其單一檢測(cè)對(duì)診斷消化道出血性疾病更具臨床價(jià)值。

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