羌活提取物抗哮喘的研究

【摘要】 目的 研究羌活提取物對小鼠哮喘模型的末梢血液內炎性細胞及肺泡灌洗液（BALF）內IL—4、IL—5、IL—6水平是否有抑制作用，探討羌活預防和治療哮喘作用。方法 本實驗中利用雞卵清蛋白（OvalbuminOVA）誘導BALB/C小鼠建立小鼠哮喘模型，將羌活提取物分低、中、高劑量組分別在小鼠激發前1小時給予2㎎/ml、10㎎/ml、50㎎/ml羌活提取物霧化吸入20ml時間為25min，處死小鼠后取末梢血通過Diff—quik染色檢測嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞的數量，利用酶聯免疫吸附法檢測BALF中IL—4、IL—5、IL—6水平。結果 大，中劑量組與模型組和小劑量組相比，嗜酸性粒細胞顯著減少（p<0.01）；IL—4、IL—5、IL—6水平顯著降低（p<0.05）。結論 羌活提取物能有效的預防OVA誘導的小鼠哮喘發作。

【關鍵詞】 羌活；哮喘；小鼠；雞卵清蛋白

doi：10.3969/j.issn.1004—7484（x）.2012.08.035 文章編號：1004—7484（2012）—08—2431—02

支氣管哮喘是一種慢性呼吸道炎癥，表現為反復發作性的喘息、呼吸困難、胸悶和咳嗽等癥狀，并伴有大量嗜酸性粒細胞、肥大細胞和T淋巴細胞侵潤。這些炎癥細胞釋放大量的炎癥介質引起支氣管收縮，粘液分泌和氣道重構。近年來多數學者認為，嗜酸性粒細胞和T淋巴細胞在哮喘的發作及病程發展過程中起著重要的角色，并是分泌細胞因子促進細胞生長、分化、增殖和凋亡。此外Th1/Th2平衡機制失調被認為是引起哮喘發病的重要免疫學機制[1]，主要表現為Th2細胞反應增強，分泌的細胞因子主要有IL—4、IL—5、IL—9、等。這些細胞因子影響著T細胞的分化。提高B細胞表面的抗原呈遞蛋白和MHCⅡ型分子的表達，結果提高抗原呈遞到T細胞的分化能力，從而促進Th2細胞分化[2]。在Th2細胞所分泌的細胞因子中IL—5在促進嗜酸性粒細胞募集、增殖、和分化的起著重要的調控作用。嗜酸性粒細胞是哮喘氣道炎癥的主要效應細胞[3]，多數研究證實哮喘炎癥的嚴重性與嗜酸性粒細胞在氣道募集的程度有關，嗜酸性粒細胞的募集和凋亡時間影響著肺內炎癥情況。此外嗜酸性粒細胞本身也能產生細胞因子，包括TNF—α、TGF—α、IL—1、IL—5、IL—6、IL—8、GM—CSF、和β。肺泡灌洗液中IL—6水平與嗜酸性粒細胞的數量呈正相關，認為IL—6可能在哮喘慢性氣道炎癥的持續中起著重要的作用，嗜酸性粒細胞的募集、浸潤、遷移入呼吸道并對其炎癥反應的持續形成了正向調控作用，通過對哮喘氣道炎癥相關的炎癥細胞激活因子、抑制因子以及其分泌的化學媒介物質的作用、哮喘相關基因的多態情研究等揭示哮喘的發病機制，開發預防哮喘的藥物。

1 材料與方法

1.1 材料 BALB/C小鼠50只，5—8周齡，均為雄性，體重為18—22g（延邊大學動物實驗中心）。羌活提取物（延邊大學天然藥物研究中心提供）根據實驗要求將羌活提取物用二次蒸餾水稀釋到實驗用濃度2㎎/ml、10㎎/ml、50㎎/ml。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及給藥 小鼠適應性喂養一周后，無不良反應隨機分為5組，每組10只，正常對照組；模型組；羌活提取物低；中；高劑量組。

模型組BALB/C小鼠在第1天和第7天2次腹腔注射50μgOVA和1㎎氫氧化鋁的生理鹽水混合液200ul，使小鼠處于致敏狀態。第14、21、22和23天進行霧化吸入1%OVA溶液每10只小鼠20ml，持續進行霧化吸入25min，激發哮喘，在第24天處死小鼠后進行取材。羌活提取物低；中；高劑量組在激發前1小時分別給予濃度為2㎎/ml、10㎎/ml、50㎎/ml羌活提取物霧化吸入（20ml）25min，在第24天乙醚麻醉處死小鼠后進行取材。

1.2.2 取材 小鼠乙醚麻醉處死后，去眼球取血，放在含有乙二胺四乙酸（EDTA）試管中保存，行Diff—quik染色，每只小鼠隨機抽取載玻片，取10個視野記錄每平方毫米內的細胞數（N/㎜2），用均數±標準差表示。氣管插管，注入1ml的生理鹽水溶液，按摩小鼠胸部然后回抽，取得BALF。1500rpm4℃下離心10min，吸取上清液行酶聯免疫吸附法檢測IL—4、IL—5、IL—6。

1.2.3 統計學處理 實驗數據應用SPSS13.0統計軟件包統計分析，數據以均數±標準差（χ±s）表示，P<0.05表示有統計學意義。

2 結 果

2.1 羌活對末梢血液中炎癥細胞的影響 模型組組和正常對照組相比，嗜酸性粒細胞數量顯著增多（p<0.01）；羌活中、高劑量與模型組組、羌活低劑量組相比，嗜酸性粒細胞顯著減少（p<0.01）實驗組之間中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞無明顯變化，詳細結果，見表1。

*P<0.01與正常組相比；**P<0.01與模型組相比。

2.2 BALF中IL—4，IL—5，IL—6 模型組組和正常對照組相比，IL—4、IL—5、IL—6的量顯著增高（p<0.05）；羌活中、高劑量與模型組組、羌活低劑量組相比，IL—4、IL—5、IL—6的量顯著減少（p<0.01），詳細結果，見表2。

3 討 論

嗜酸性粒細胞在哮喘中起著重要的角色，對嗜酸性粒細胞的監測從某種意義上說也就是對氣道炎癥的監測。嗜酸性粒細胞是產生細胞因子的主要細胞，這些細胞因子促進細胞生長、分化、增殖。Th1/Th2平衡機制失調被認為是引起哮喘發病的重要免疫學機制，Th2細胞分泌的細胞因子IL—4和IL—5是目前所知的兩個得要的細胞因子主要表現在，IL—4通過與細胞表面的受體結合調節B細胞生長、分化、活化和發揮功能過程中起到非常重要的作用[4]，從而促進Th2細胞分化[5]。血管中的IL—4能夠啟動血管內皮表達VCAM—1，能募集嗜酸性粒細胞等炎癥細胞從血管向炎癥部位游走[6]。IL—5是與嗜酸性粒細胞關系最密切細胞因子，對嗜酸性粒細胞的生長、成熟、分化等起著重要的調節作用。IL—5表達的轉基因鼠的嗜酸性粒細胞存活時間明顯延長[7]。嗜酸性粒細胞分泌的細胞因子IL—6，被認為與氣道重構有關。在哮喘患者和哮喘動物模型的支氣管肺泡灌洗液和肺組織中都可測得IL—6的高表達，本實驗模型組B組BALF內IL—6的數量顯著增高，與A組相比（p<0.05）與此種論述一致；但IL—6在哮喘中的作用仍不清楚。近來發現IL—6高表達的小鼠氣道上皮下纖維化、膠原沉積都很明顯。與BALF內IL—6的水平呈正相關，本實驗通過激發前給予羌活提取物低、中、高三個濃度霧化吸入，末梢血內嗜酸性粒細胞及BALF內IL—6明顯降低，提示羌活提取物具有抗哮喘的效果。

參考文獻

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