載脂蛋白M可能經NF-κB介導大鼠腎缺血再灌注損傷

唐 華，張春梅，陳 蓉，黃 珀，萬 英，曾維誠

(瀘州醫學院1.病理生理學教研室;2.醫學機能學實驗室，四川瀘州646000)

載脂蛋白M(apolipoprotein M，APOM)是最近發現的一種新型載脂蛋白，主要在肝細胞和腎小管上皮細胞特異性表達［1－2］。肝臟表達的APOM可能與血脂的代謝與轉運相關［3］，而腎臟表達APOM的生理意義尚不明確。肝細胞核因子1α(hepatic nuclear factor-1α，HNF-1α)、肝 X 受體(hepatic X receptor，HXR)等炎性相關轉錄因子能調節APOM在體內或體外 HepG2細胞的表達［4－7］，表明 APOM 可能參與炎性反應，但炎性反應的關鍵轉錄因子NF-кB與APOM的關系目前尚不清楚。

腎臟缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)在臨床上常見于失血或中毒性休克及腎移植等，是決定移植腎存活和患者生存率的主要因素之一。據報道，由NF-кB介導的炎性級聯反應在腎IRI過程中發揮重要作用［8］。本研究采用腎缺血再灌注大鼠模型，分別從基因和蛋白水平檢測腎組織APOM的表達及NF-кB抑制劑——吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamat，PDTC)對 APOM 表達的影響，旨在探討APOM參與腎IRI的發病機制。

1 材料與方法

1.1 實驗分組和標本采集

清潔級75只250～300 g雄性SD大鼠［瀘州醫學院動物實驗中心提供，合格證號:SCYK(川)2006-0004］隨機分為3組:假手術組、腎缺血再灌注模型(IRI)組和PDTC干預組(IRI+PDTC)，各組按取材時間又分為再灌注3、6、12、24和48 h組，每組5只。腎 IRI模型按常規制作［9］，PDTC 組在術前0.5 h腹腔注射PDTC(Sigma公司)100 mg/kg，假手術組和IRI組注射等量0.9%氯化鈉注射液。于再灌注各時間點再次開腹，下腔靜脈取血3 mL用于檢測血肌酐(creatinine，Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN);同時切除左腎，分離腎皮質用于提取總RNA、胞質蛋白和核蛋白;其余腎組織常規制片，HE染色觀察腎臟病理改變。

1.2 實時熒光定量PCR檢測APOM mRNA的表達

用Trizol試劑(Invitrogen公司)提取總RNA，反轉錄成cDNA。……