ATF4基因在小鼠胚胎圍著床期子宮內膜的表達

柴路維，姜 蓉，何小茜，黃 燕，楊 戎

(重慶醫科大學干細胞與組織工程研究室生理教研室，重慶400016)

轉錄激活因子4(activating transcription factor4，ATF4)是ATF家族的一員，該家族識別順式作用轉錄增強子cAMP效應元件，是一種包含Jun和Fos結合位點的DNA結合蛋白，屬于較大的堿性白氨酸鏈超家族［1］。近年來發現它能使腫瘤細胞在乏氧或其他應激的腫瘤微環境中促進細胞存活，啟動細胞增殖，抑制細胞凋亡，在多種惡性腫瘤的發生發展中起著重要的作用［2-5］。此外，ATF4能誘導同一信號通路的血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的轉錄［6］，而 VEGF 已證實在著床過程中起重要作用［7］。鑒于胚胎植入過程與腫瘤侵襲轉移過程的相似性以及目前對ATF4在胚胎植入方面的作用未見報道，本研究旨在探討ATF4在早孕小鼠子宮內膜的表達規律和在胚泡著床過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

標本的收集:清潔級昆明種系小鼠，6～8周齡，體質量25～30 g［由重慶醫科大學實驗動物中心提供，合格證號:SCXK(渝)20050002］。按雌雄2∶1自然合籠，次晨發現陰栓者記為妊娠1 d。隨機將小鼠按妊娠天數分為 8 組(分別為0、1、2、3、4、5、6 和7 d)，每組20只，各組小鼠到時點后尾靜脈注射臺盼藍0.2 mL，15 min后脫頸處死，取出子宮刮取除胚泡外的雙側子宮內膜。另取每組8只小鼠，取子宮立即放入4% 多聚甲醛中固定，石蠟包埋，切片(4 μm)備用。

1.2 主要試劑

RT-PCR試劑 (TaKaRa公司);一抗 (兔抗小鼠ATF4抗體) (Proteintech Group公司);二抗(辣根酶標記山羊抗兔IgG)(Santa cruz公司);免疫組化試劑盒 (北京中山生物公司);蛋白提取試劑盒 (凱基公司)、化學發光檢驗試劑盒ECL(上海碧云天公司)。

1.3 方法

1.3.1 RT-PCR:按試劑盒說明提取總RNA，判定RNA純度及濃度;取部分RNA凝膠電泳，確定其完整性。……