HCV/HIV-1合并感染者血清GP73變化特征

李 鑫，黃玉波，張仁雯，郝曉花，李興旺，魏紅山

首都醫科大學附屬北京地壇醫院，北京 100015

HCV/HIV-1合并感染者血清GP73變化特征

李 鑫，黃玉波，張仁雯，郝曉花，李興旺，魏紅山

首都醫科大學附屬北京地壇醫院，北京 100015

目的 觀察合并艾滋病的丙型肝炎患者血清GP73水平的變化特征。方法 本研究主要觀察了3個人群:50例健康體檢者;22例AIDS患者，其中10例患者合并慢性HCV感染;28例沒有合并癥的單純慢性丙型肝炎的患者。血清GP73采用標準ELISA法檢測。結果 與健康對照人群(36.18±12.26)ng/mL相比，慢性丙型肝炎患者血清GP73(79.73±43.91)ng/mL顯著升高(P ＜0.0001);而AIDS患者血清GP73(122.6±65.51)ng/mL較單純慢性丙型肝炎患者也顯著升高(P=0.008)。對22例AIDS患者血清GP73分析顯示，合并丙型肝炎的患者(98.32±60.14)ng/mL，低于單純HIV-1感染的患者(142.8±65.23)ng/mL，但兩組之間差異并無統計學意義(t=1.65，P=0.11)。AIDS患者的血清GP73水平與CD4+T和CD8+T細胞的絕對計數呈顯著負相關(r值分別為－0.58和－0.49)，而與HIV RNA拷貝數成正相關(r=0.61，P=0.0026)。結論 合并HIV-1感染可以顯著增加丙肝患者血清GP73水平。檢測血清GP73水平的變化在一定程度上可以反映HIV-1復制情況及免疫狀態的變化。

丙型肝炎病毒;人類免疫缺陷病毒-1;合并感染;獲得性免疫缺陷綜合征;高爾基體蛋白73

高爾基體蛋白73(Golgi Protein 73，GP73)是一個新的肝癌診斷標志物。該蛋白最初于2000年由Kladney等［1］首先體外克隆和表達。早期的研究結果提示，該基因高表達于病毒感染的肝實質細胞、膽管上皮細胞。隨后的研究顯示，該蛋白是一個良好的肝癌診斷標志物［2］。國內的研究甚至揭示，該蛋白診斷原發性肝癌的特異性和敏感性優于甲胎球蛋白［3-4］。近期研究還揭示，該蛋白的表達與慢性乙型肝炎患者的肝病進程有關［5］。不僅是國際上對GP73的應用研究越來越深入，我國肝癌診斷專家推薦指南中也將GP73列為肝癌診斷的一個新的標志物。但目前有關該標志物在肝病合并其他疾病，尤其是合并慢性病毒感染的變化特征的研究資料尚缺乏。本研究旨在觀察慢性丙型肝炎患者合并HIV-1感染時，該蛋白的變化特征及可能的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 本研究所觀察的患者為北京地壇醫院2011年2月－2012年2月22例住院AIDS患者，其中10例患者合并慢性丙型肝炎(所有患者HCV抗體、HCV-RNA均陽性半年以上)。所有HIV-1感染者均已經進入艾滋病期。其中10例患者接受HAART治療半年以上(AZT+3TC+EFV)。50例健康對照者為本院健康體檢者。28例沒有合并癥的單純慢性丙型肝炎患者。所有慢性丙型肝炎患者均為未經干擾素治療的患者。丙型肝炎患者剔除標準為:存在組織學證據的肝硬化;合并惡性腫瘤;合并自身免疫性肝病;膽結石等阻塞性膽管疾病;合并酒精性肝病;其它病毒性肝炎。

1.2 血清標本采集及分析 所有患者均于入院開始臨床治療前采集血清或血漿標本，－80℃凍存備用。患者入院后常規進行肝功能等生化檢查(autoanalyzer Hitachi 917，德國);HIV-RNA采用 AmplicorTMHIV-1 Monitor Test(Roche Diagnostic Systems，美國)進行;CD4+T、CD8+T細胞亞群分析采用BD公司的FASCalibur進行。

1.3 血清GP73檢測 血清GP73采用標準ELISA分析法進行分析，試劑盒為北京熱景公司產品，按照供應商提供的標準操作說明書進行分析。

1.4 統計學分析 計量資料以均數±標準差表示。組間均數差異采用t檢驗。指標之間的相關性采用Spearman相關分析。多組間均數差異采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。統計軟件采用GraphPad Prsim 5.0。

2結果

2.1 不同人群血清GP73的差異 本研究所觀察的患者及健康體檢人群均為我院連續入組的人群。其中AIDS患者22例;單純慢性丙型肝炎患者28例;健康體檢人群包括50人。被觀察對象的人口學資料如表1所示。

表1 被觀察對象的人口學資料Tab 1 The demography data of subjects

對上述人群的血清GP73分析結果顯示，無論是單純慢性丙型肝炎患者，還是合并AIDS的患者，其血清GP73的濃度均顯著高于健康對照人群(見圖1)。與健康對照人群(36.18±12.26)ng/mL相比，慢性丙型肝炎(CHC)患者血清 GP73(79.73±43.91)ng/mL顯著升高(P＜0.0001);而AIDS患者血清 GP73(122.6±65.51)ng/mL較單純慢性丙型肝炎患者也顯著升高(P=0.008)。對22例AIDS患者血清GP73分析顯示，合并丙型肝炎的患者血清GP73(98.32±60.14)ng/mL低于單純 HIV-1感染的患者(142.8±65.23)ng/mL，但兩組之間比較差異無統計學意義(t=1.65，P=0.11)。

圖1 不同人群血清GP73的差異 A:Control，健康體檢者;CHC，慢性丙型肝炎患者;AIDS，艾滋病患者;B:HCV(－)，不合并丙肝的單純AIDS患者;HCV(+)，合并丙肝的AIDS患者Fig 1 The serum GP73 concentration of patients in different groups A:Control，healthy persons;CHC，patients with chronic hepatitis C;AIDS，AIDS patients;B:HCV(－)，AIDS patients not co-infection with hepatitis C virus;HCV(+)，AIDS patients co-infection with hepatitis C virus

2.2 AIDS患者血清GP73可能的影響因素 為了明確AIDS患者血清GP73升高的可能影響因素，我們對既往報告的一些影響因素進行了分析(見圖2)。

根據對AIDS患者血清相關因素的分析，AIDS患者血清GP73濃度與病毒核酸之間的相關性最高(r=0.61，P=0.0026);其次是患者的 CD4+T 細胞的絕對計數(r= －0.58，P=0.005);與患者外周血CD8+T細胞計數也有很好的相關性(r=－0.49，P=0.02)。ALT 和 GP73之間無顯著相關性(r=0.003，P=0.98)。以上結果提示，對AIDS患者而言，病毒復制和患者免疫狀態可能是決定血清GP73的重要因素。

圖2 AIDS患者病毒載量、免疫細胞及生化指標與血清GP73之間的相關性Fig 2 The correlation between the serum GP73 of AIDS patients，viral load，immune cells，and biochemical indicators

2.3 HAART治療對患者血清GP73的影響 為了進一步明確HIV-1病毒復制對患者血清GP73水平可能的影響，我們觀察了HAART治療對患者血清GP73水平的影響。如圖3所示，與未接受治療的患者(159.2±66.24)ng/mL相比，經過抗病毒治療后，10例患者的HIV-RNA均低于可檢測下限，患者的血清GP73(78.63 ±26.82)ng/mL 顯著降低(t=3.60，P=0.0018)。在未接受HAART治療的12例患者中，5例患者的血清GP73高于150 ng/mL，占全部未治療患者的41.67%(5/12);而且，未接受抗病毒治療的患者中，僅2例(16.67%)患者的血清GP73低于100 ng/mL。而接受HAART治療的10例患者中，僅2例患者的血清GP73高于100 ng/mL。顯然，病毒復制是血清GP73升高的主要影響因素之一。

圖3HAART對AIDS患者血清GP73表達的影響 HAART:HAART組;no-HAART:未接受HAART組Fig 3 The effect of HAART on serum GP73 concentration of AIDS patientsHAART:the HAART group;no-HAART:not receiving HAART group

3 討論

通過本研究對部分丙型肝炎患者，以及AIDS合并丙型肝炎患者的血清GP73分析觀察，我們發現，合并感染HIV-1后患者血清GP73顯著升高。該研究結果提示，對于那些丙型肝炎患者血清GP73過高，不僅需要考慮肝癌及終末期肝病，還需要考慮是否有合并感染HIV的可能。

最初的研究報道顯示，GP73高表達于膽管上皮細胞、炎癥及肝癌細胞［1］。隨后的一系列研究揭示，該蛋白還高表達于其他腫瘤組織，被認為是前列腺癌［6］、睪丸癌、肺癌［7-8］，以及中樞神經疾病，諸如腦膠質瘤［9］等疾病，而被認為一個有前景的臨床標志物。與AFP等其他標志物相比，GP73診斷HCC敏感性較高，特異性較低［10］。而近期的研究揭示，GP73的表達水平可能與乙型肝炎的進程有關［5］。我們對部分肝硬化患者的觀察也提示，GP73的水平與肝硬化患者的Child-Pugh分級密切相關［11］。聯合檢測GP73和AFP也已經成為我國肝癌診斷的一個重要手段［12］。

作為一個新的肝癌診斷標志物，GP73的來源和影響因素一直是臨床和基礎研究人員所關注的焦點問題之一。GP73是一種II型跨膜蛋白，功能未知，主要功能域位于胞內C區［13］。C-末端截短型小鼠基因模型顯示，GP73功能喪失的小鼠主要表現為肝腎組織結構的異常，提示該基因主要調控靶器官為肝臟和腎臟［14］。但有關該蛋白的主要來源研究顯示，增生的肝細胞、膽管上皮細胞，以及前列腺上皮、肺組織可能是血清GP73的主要來源［1，14］。盡管外周血單個核細胞中可以檢測到GP73 mRNA，但蛋白印跡顯示，脾臟可能GP73表達唯一證實了的器官。我們的研究顯示，HIV-1感染可能通過免疫系統的功能而不是通過肝功能的變化而影響了GP73的表達。因為，對這一部分AIDS患者的分析顯示，血清ALT的水平差異與GP73水平變化無關。但更為客觀的結論還需要更大樣本分析。

與既往早期的報道一致，我們的結果也提示，HIV-1復制可能上調GP73的表達。目前至少已知腺病毒［15］、HBV 和HCV 感染可以上調GP73 的表達［16］。AIDS患者血清GP73表達與抗病毒療效、患者CD4+T細胞和CD8+T細胞的變化均有顯著的相關性，提示對血清GP73的檢測在一定程度上可以反映患者病情的變化。

總之，丙型肝炎患者合并HIV-1感染可以導致血清GP73的顯著增加，而且多數合并AIDS的丙型肝炎患者血清GP73在150 ng/mL以上，提示:對那些GP73過高的肝病患者，除考慮肝癌的診斷外，還需要考慮合并有HIV-1感染的可能。對AIDS患者血清GP73評價的臨床意義也是一個非常有趣的課題，相關的工作我們也在進行中。

［1］ Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection［J］.Gene，2000，249(1-2):53-65.

［2］ Marrero JA，Romano PR，Nikolaeva O，et al.GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma［J］.J Hepatol，2005，43(6):1007-1012.

［3］ Mao Y，Yang H，Xu H，et al.Golgi protein 73(GOLPH2)is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma ［J］.Gut，2010，59(12):1687-1693.

［4］ Sun Y，Yang H，Mao Y，et al.Increased Golgi protein 73 expression in hepatocellular carcinoma tissue correlates with tumor aggression but not survival［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26(7):1207-1212.

［5］ Zhang F，Gu Y，Li X，et al.Up-regulated Golgi phosphoprotein 2(GOLPH2)expression in lung adenocarcinoma tissue［J］.Clin Biochem，2010，43(12):983-991.

［6］ Varambally S，Laxman B，Mehra R，et al.Golgi protein GOLM1 is a tissue and urine biomarker of prostate cancer［J］.Neoplasia，2008，10(11):1285-1294.

［7］ Fritzsche FR，Kristiansen G，Riener MO，et al.GOLPH2 expression may serve as diagnostic marker in seminomas［J］.BMC Urol，2010，10:4.

［8］ Zhang F，Gu Y，Li X，et al.Up-regulated Golgi phosphoprotein 2(GOLPH2)expression in lung adenocarcinoma tissue［J］.Clin Biochem，2010，43(12):983-991.

［9］ Li XY，Liu W，Chen SF，et al.Expression of the Golgi phosphoprotein-3 gene in human gliomas:a pilot study［J］.J Neurooncol，2011，105(2):159-163.

［10］ Fimmel CJ，Wright L.Golgi protein 73 as a biomarker of hepatocellular cancer:development of a quantitative serum assay and expression studies in hepatic and extrahepatic malignancies［J］.Hepatology，2009，49(5):1421-1423.

［11］ Huang YB，Li X，Qiao Y，et al.Relationship between N-glycosylated protein gp73 and Child-Pugh stage in cirrhotic patients［J］.Chin J Gastroenterol Hepatol，2011，20(4):335-337.

黃玉波，李鑫，喬雍，等.N-糖基化修飾蛋白gp73與肝硬化患者Child-Pugh的關系［J］.胃腸病學和肝病學雜志，2011，20(4):335-357.

［12］ Xu WF，Fei YM，Zhou JK，et al.Significance of serum golgi protein 73(GP73)，alpha-fetoprotein(AFP)and lectin-reactive alphafetoprotein(AFP-L3)expresssion in primary hepatic carcinoma［J］.Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi，2011，25(4):286-288.

［13］ Zhou Y，Li L，Hu L，et al.Golgi phosphoprotein 2(GOLPH2/GP73/GOLM1)interacts with secretory clusterin［J］.Mol Biol Rep，2011，38(3):1457-1462.

［14］ Wright LM，Yong S，Picken MM，et al.Decreased survival and hepato-renal pathology in mice with C-terminally truncated GP73(GOLPH2)［J］.Int J Clin Exp Pathol，2009，2(1):34-47.

［15］ Kladney RD，Tollefson AE，Wold WS，et al.Upregulation of the Golgi protein GP73 by adenovirus infection requires the E1A CtBP interaction domain［J］.Virology，2002，301(2):236-246.

［16］ Kladney RD，Cui X，Bulla GA，et al.Expression of GP73，a resident Golgi membrane protein，in viral and nonviral liver disease［J］.Hepatology，2002，35(6):1431-1440.

Variation characteristics of serum GP73 in Patients with HCV/HIV-1 co-infection

LI Xin，HUANG Yubo，ZHANG Renwen，HAO Xiaohua，LI Xingwang，WEI Hongshan
Beijing Ditan Hospital，Capital Medical University，Beijing 100015，China

ObjectiveTo investigate the Variation characteristics of serum GP73 in HCV/HIV-1 co-infected patients.MethodsThree study groups included in this study:50 healthy individuals as control;22 HIV patients including 10 patients with HCV/HIV-1 co-infection;28 chronic HCV-infected patients.Serum GP73 was measured with ELISA according to the protocol.ResultsThe serum GP73 concentration in chronic HCV-infected patients(79.73 ±43.91)ng/mL was significantly higher than that in healthy individuals(36.18 ± 12.26)ng/mL(P ＜0.0001);but the level of GP73 in chronic HCV-infected patients was significantly lower than that in HIV-1-infected patients(122.6± 65.51)ng/mL(P=0.008).The serum GP73 concentration in HCV/HIV-1 co-infected patients was(98.32 ±60.14)ng/mL，which was lower than that in HIV-1 infected patients(142.8 ± 65.23)ng/mL，but the difference was not significant(t=1.65，P=0.11).More importantly，serum GP73 protein in HIV-1 infected patients was negatively related with CD4+cell counts(r= －0.58)and CD8+cell counts(r= －0.49)，and positively related with HIV viral loads(r=0.61，P=0.0026).ConclusionSerum GP73 in HCV/HIV-1 co-infected patients was significantly increased，and changes of serum GP73 to a certain extent reflect the HIV-1 replication and immune status.

HCV;HIV-1;Co-infection;AIDS;GP73

R512.6+3

A

1006－5709(2012)08－0778－04

2012-06-27

10.3969/j.issn.1006-5709.2012.08.027

國家自然科學基金(30872243;81071411);北京市科委“艾滋病急性期治療研究”(D09050703590903);北京市優秀人才培養專項經費資助項目(2009D003015000001)

李鑫 ，醫學博士，副主任醫師。E-mail:Leaxin@sina.com通訊作者:魏紅山，E-mail:drwei@ccmu.edu.cn