精神分裂癥腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子C270T基因多態(tài)性研究☆

大量研究表明，精神分裂癥可能是多基因復雜遺傳性疾病，其遺傳度約 80％～85％［1－3］。國外的研究人員對精神分裂癥患者進行了BDNF基因C270T多態(tài)性的研究后發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥攜帶C270T變異型者顯著多于正常人，提示BDNF基因C270T多態(tài)性增加了個體患精神分裂癥的易感性［4－5］。然而與很多基因一樣，C270T 多態(tài)性可能存在種族和地區(qū)差異。筆者對山東地區(qū)漢族精神分裂癥患者BDNF基因C270T多態(tài)性進行研究，結果報告如下。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象 全部患者取自2007年10月至2008年6月在濟寧醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院住院的精神分裂癥患者。入組標準：①均符合《美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第4版》（DSM-Ⅳ）有關精神分裂癥的診斷標準［6］；②年齡 16～60歲；③漢族；④籍貫為山東省。排除標準：①有其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神疾病及重大軀體疾病史、有物質依賴史者；②有物質依賴、神經(jīng)、精神疾病家族史者；③病例間存在親緣關系者。共收集精神分裂癥患者224人，其中男 118人，女106人；年齡 16～60歲，平均（31.4±12.6）歲。全部患者或監(jiān)護人簽署書面知情同意書。

根據(jù)陽性與陰性癥狀量表（Positive and Negative Syndrome Scale，PANSS）評定結果，將精神分裂癥患者分陽性組和陰性組。陽性組：PANSS的陽性癥狀量表（Scale for Assessment of Positive Symptoms，SAPS）評分≥4分的項目≥3項，但陰性癥狀量 表（Scale for Assessment of Negative Symptoms，SANS）評分≥4分的項目＜3項；陰性組：PANSS的SANS評分≥4分的項目≥3項，但SAPS評分≥4分的項目＜3項。共篩出符合標準，且資料完整者陽性組精神分裂癥患者102例，陰性組96例。

對照組為同期在濟寧地區(qū)收集健康志愿者。年齡（t＝0.838）、性別（χ2＝1.687）、受教育時間（t＝1.244）等與患者組相匹配（均 P＞0.05）。共收集220人，均為漢族山東省人，無重大軀體疾病、遺傳性疾病，既往無精神病史及精神疾病陽性家族史。220人中男 115人，女105人；年齡 17～60歲，平均（32.5±11.2）歲。均征得本人對本研究的知情同意，簽署書面知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 量表評定 符合納入條件的精神分裂癥患者由兩名精神科醫(yī)生進行PANSS評定。

1.2.2 DNA提取 于早晨7時至8時取被試者肘靜脈血5 mL，12 g／L依地酸抗凝，用淋巴細胞分離液分離單核細胞，常規(guī)酚、氯仿法［7］提取基因組DNA，置于－70℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 基因型檢測 采用聚合酶鏈反應（PCR）技術對BDNF基因C270T多態(tài)性進行分析。上游引物：5′-CAGAGGAGCCAGCCCGGTGCG-3′，下游引物：5′-CTCCTGCACCAAGCCCCATTC-3′。由深圳晶美生物制品公司合成。100 ng的基因組DNA放入25 μL 的體系中，其中含 1.1 μmol／L Mgcl 2 200 μmol／L dNTP（dATP，dCTP，dGTP，dTTP），1 μmol／L上下引物，1.5u Taq酶。PCR的反應條件為94℃5 min預變性，繼以 94℃變性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸30 s，共30個循環(huán)，出循環(huán)后72℃延伸5 min。將PCR產(chǎn)物通過Hinfl內切酶酶切，之后經(jīng)過60 g／L非變性聚丙已烯酰胺（PAGE）凝膠中電泳分離，以銀染色法檢視各區(qū)帶，與分子量標準物比較各片段的大小，進行基因型判讀。單個213 bp片段為T／T型；2條分別為87，126片段的為CC型；3條分別為213，126，87片段的為C／T型。

1.3 統(tǒng)計學方法 全部數(shù)據(jù)輸入SPSS 11.5進行Hardy-Weinberg定律的遺傳平衡吻合度檢驗。計算各組研究對象的BDNF基因C270T的基因型和等位基因頻率，組間頻數(shù)比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Hardy-Weinberg平衡的吻合度檢驗 經(jīng) χ檢驗表明，患者組和對照組BDNF基因多態(tài)性位點的基因頻率均符Hardy-Weinberg平衡定律，基因型的觀測值和期望值Hardy-Weinberg平衡吻合良好，患者組 χ2＝0.624，P＞0.05；對照組 χ20.254，P＞0.05。提示該研究對象來自大的群體，個體間為隨機婚配，無明顯的自然選擇、遷移等因素對遺傳平衡的影響，資料可靠。

2.2 BDNF 基因C270T 多態(tài)性檢測 患者組的C／T基因型分布頻率顯著高于對照組（χ2＝1.68，P＜0.01）。患者組的 T 等位基因分布頻率顯著高于對照組（χ2＝24.56，P＜0.001）。見表 1。

表1 兩組BDNF基因C270T多態(tài)性（n，％）

2.3 陽性組與陰性組精神分裂癥 BDNF 基因C270T 多態(tài)性比較 BDNF基因C270T的基因型C／C、C／T、T／T 分布頻率和等位基因 C、T 的分布頻率，陽性組與陰性組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P 均＞0.05）。見表 2。

表2 陽性組與陰性組BDNF基因C270T多態(tài)性（n，％）

3 討論

有研究顯示，BDNF不但與神經(jīng)元的發(fā)育、存活、重塑等功能有關，而且在學習、記憶功能相關的突觸調節(jié)中發(fā)揮關鍵性作用，特別是促進海馬突觸傳遞長時程增強（long-term potentiation，LTP）［8－9］，神經(jīng)元的重塑也正是學習記憶發(fā)生的生理基礎［8－10］，而學習和記憶功能是認知功能的重要組成部分，因此推測BDNF與精神分裂癥認知功能存在關聯(lián)。認知功能是精神分裂癥的核心和持久癥狀，從發(fā)病前就已經(jīng)出現(xiàn)，貫穿于疾病的始終，具有遺傳傾向。

國外的研究人員對精神分裂癥患者進行了BDNF基因C270T多態(tài)性的研究后發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥組攜帶C270T變異型者顯著多于對照組，提示BDNF基因C270T多態(tài)性增加了個體患精神分裂癥的易感性［4－5，11－12］。

國內郭曉娟等［13］對91個精神分裂癥核心家系，采用單體型相對風險（haplotype relative risk，HRR）和傳遞不平衡檢驗（transmission／disequilibrium test，TDT）對精神分裂癥與BDNF基因C270T多態(tài)性位點進行關聯(lián)分析，并分析該位點與PANSS各因子分的關系。結果未發(fā)現(xiàn)BDNF基因C270T多態(tài)性和精神分裂癥關聯(lián)，但發(fā)現(xiàn)T等位基因與陽性癥狀存在關聯(lián)。Li W等［14］在中國漢族人口進行類似研究，也沒有發(fā)現(xiàn)C270T多態(tài)性與精神分裂癥存在關聯(lián)性。

本研究以山東地區(qū)漢族精神分裂癥患者為研究對象，結果表明，BDNF基因C270T多態(tài)性與精神分裂癥的易感性相關，患者組的C／T基因型分布頻率顯著高于對照組，患者組的T等位基因分布頻率顯著高于對照組。本研究未發(fā)現(xiàn)BDNF基因C270T多態(tài)性與精神分裂癥的臨床癥狀存在相關性。本研究與上述研究結論不同。造成上述研究結果差異巨大的原因可能是多方面的，最主要的原因在于精神分裂癥目前仍然病因不明，與精神分裂癥可能相關的基因較多，C270T基因也只是其中之一，大多基因可重復性差，不同研究、不同人群的研究結論不一。

日本學者Shinichiro等［15］對178例日本患者進行了研究，發(fā)現(xiàn)患者C／T基因型的分布頻率（9.6％）約為正常對照（4.5％）的 2 倍，存在統(tǒng)計學差異（P＝0.034），但他們未發(fā)現(xiàn) 270T的純合子，說明同一人種的基因亞型仍有一定的差異。Szekeres等（2003）［4］對精神分裂癥 BDNF 基因 C270T 多態(tài)性進行研究，并與正常人對照，發(fā)現(xiàn)C／T基因型和T等位基因在精神分裂癥組（分別為25.7％和13.9％）顯著高于對照組（5.9％和 2.9％），進一步研究后還發(fā)現(xiàn)，BDNF基因C270T多態(tài)性與精神分裂癥病理生理學方面存在聯(lián)系。推測BDNF基因C270T多態(tài)性還可能與精神分裂癥認知功能存在關聯(lián)。

精神分裂癥屬于復雜的多基因遺傳疾病，具有高度的遺傳異質性，而精神分裂癥的發(fā)病是遺傳因素和環(huán)境因素通過復雜的相互作用的結果，要明確BDNF基因多態(tài)性在精神分裂癥的發(fā)病過程中所起的作用，有待進一步深入研究。

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