蘭索拉唑在正常及潰瘍模型家兔體內藥代動力學研究*

韓 強，潘桂玲，張永文

徐州醫學院附屬醫院藥劑科，江蘇 徐州 221002

蘭索拉唑是由日本武田公司開發的H+/K+-ATP酶抑制劑，于1991年首次在法國上市，主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合口潰瘍及反流性食管炎、卓－艾綜合征的治療[1]。與奧美拉唑相比，由于蘭索拉唑的吡啶環4-位引入了三氟乙氧基，使得其具有更好的療效、較少的副作用和更強的穩定性[2]。在胃潰瘍狀態下，生理及病理上的變化，必將影響藥物的藥代動力學行為。現有的蘭索拉唑的藥代動力學研究報道，尚無在胃潰瘍病家兔體內的藥代動力學研究報道[3-5]。因此本實驗建立了測定血漿中蘭索拉唑的高效液相色譜法，并采用此方法研究了該藥在正常及潰瘍兔體內的藥代動力學特征，為臨床合理應用提供參考。

1 材料和方法

1.1 動物

家兔，體重(2.5±0.2)kg，雌雄各半，由徐州醫學院實驗動物中心提供（SYXK(蘇)2001-0050）。

1.2 儀器

Shimadzu LC-10A高效液相色譜儀（日本島津制作所），包括SCL-10Avp系統控制器，SPD-M20A二極管陣列檢測器，LC-10ADvp兩元泵，SIL-20A自動進樣器，FCV-10Alvp四元低壓梯度洗脫系統，DGU-20As在線脫氣機，島津Lcsolution色譜數據工作站。梅特勒托利多AE240電子天平(十萬分之一，瑞士Mettler Toledo)；臺式高速冷凍離心機（5417R，德國 Eppendorf公司）。

1.3 藥品與試劑

注射用蘭索拉唑 （江蘇奧賽康藥業有限公司，批號：090501，規格：30 mg/支）；蘭索拉唑對照品（揚州市三藥制藥有限公司提供，批號：20080605，純度＞99.0%）；奧美拉唑對照品（江蘇奧賽康藥業有限公司提供，批號：0908005，純度＞99.0%）；甲醇、乙腈為色譜純；二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醚、無水碳酸鈉為分析純；水為去離子水。

1.4 供試樣品及對照品溶液的制備

1.4.1 蘭索拉唑注射液將30 mg/支注射用蘭索拉唑用10 mL 0.9%氯化鈉注射液稀釋，取1 mL稀釋液加入99 mL生理鹽水中，備用。

1.4.2 對照品溶液精密稱取蘭索拉唑對照品5.16 mg置5 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配成1.03 mg·L-1的蘭索拉唑對照品溶液。

1.4.3 蘭索拉唑標準溶液精密稱取蘭索拉唑5.16 mg，置于5 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得1.03 mg·L-1蘭索拉唑的儲備液。臨用前用流動相 56%甲醇稀釋成為 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg·mL-1的標準溶液，置冰箱 4℃冷藏保存，待用。

1.4.4 內標溶液精密稱取奧美拉唑對照品5.18mg置5 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配成1.03mg·L-1的奧美拉唑儲備液，并稀釋成10.0μg·mL-1作為內標濃度。

1.5 動物實驗方案及血漿樣品處理方法

1.5.1 動物實驗方案健康家兔12只，雌雄各半，體重（2.5±0.2）kg。禁食24 h后，其中6只綁于兔臺上置于20℃水中，水量漫過兔的胸骨，8 h后取出吹干。待家兔可以自由活動后，耳緣靜脈給藥，控制在30 min左右滴注完畢，給藥前及給藥后5、10、15、20、30、45、60、75、90、120、150、210、270、390 min 頸總動脈取血2 mL，根據實際情況補充適量生理鹽水。將全血置于肝素處理過的試管中3000 r·min-1離心10 min，分取血漿，-20℃冷凍保存，待測。

1.5.2 血漿樣品處理方法精密量取離心后的血漿500 μL，至離心管中，精密加入 50 μL 10.0 μg·mL-1奧美拉唑內標溶液，混勻。加入200 μL 0.1 mol·L-1碳酸鈉,渦旋混勻30 s，再加入2 mL乙腈，渦旋混勻2 min，于 4000 r·min-1離心 10 min。 取有機層 45℃下氮氣流吹干，殘渣用200 μL流動相溶解，于14000 r·min-14℃離心10 min。取上清液20 μL進樣分析。

1.6 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18柱 (大連依利特有限公司，250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(56︰44，v/v)；檢測波長：284 nm；柱溫：35℃；進樣量 20 μL；流速 0.8 mL·min-1。

1.7 數據處理

藥代動力學參數的估算按中國藥理學會推薦的藥代動力學程序“DAS2.0”對血藥濃度-時間數據進行自動擬合，根據AIC進行房室模型判別，參數AUC(0-t)、AUC0-∞、t1/2、MRT(0-t)、CL、V 等分別作方差分析及雙側t檢驗。

2 結 果

2.1 方法學考察

2.1.1 專屬性在上述色譜條件下檢測空白血漿、模擬血漿樣品和家兔給藥后血漿樣品，蘭索拉唑的保留時間為19.9 min，內標奧美拉唑的保留時間為13.3 min。血漿中的內源性物質和代謝物不干擾蘭索拉唑和內標的測定。色譜圖見圖1。

2.1.2 線性關系取兔空白血漿0.5 mL，精密加入7個不同質量濃度的蘭索拉唑標準溶液50 μL，按“1.5.2”項血漿樣品處理方法進行處理，使其含蘭索拉唑濃度為 0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg·mL-1的標準血漿，每種濃度做兩份。在“1.6”項色譜條件下進樣分析，記錄色譜圖、蘭索拉唑峰面積（As）及內標奧美拉唑峰面積（Ar）。以蘭索拉唑對奧美拉唑峰面積平均值的比值（As/Ar）對蘭索拉唑血藥濃度（C）作回歸計算，得回歸方程As/Ar=0.0016C+0.0438（權重系數 w=1/y）。結果表明，蘭索拉唑在 0.02～2.0 μg·mL-1濃度范圍內，其峰面積與內標奧美拉唑峰面積的比值與蘭索拉唑濃度之間呈現良好的線性關系（r2=0.9981）。

2.1.3 定量下限本方法蘭索拉唑的定量下限（LLOQ）為標準曲線最低濃度 0.02 μg·mL-1，且連續3次測定結果的準確度及精密度均符合生物樣品測定方法的要求，見表1。

2.1.4 回收率考察

2.1.4.1 絕對回收率 精密量取不同濃度的蘭索拉唑標準溶液100 μL，加入內標奧美拉唑100 μL，再加入200 μL流動相，渦旋混勻，配成含蘭索拉唑濃度分別為低、中、高（0.1、0.5、1.6 μg·mL-1）的溶液，每種濃度各做3份樣品，精密吸取20 μL上清液進樣分析。記錄色譜圖，測定蘭索拉唑與內標奧美拉唑的色譜峰面積(As與Ar)。

精密量取不同濃度的蘭索拉唑標準溶液50 μL，加入空白血漿 0.5 mL， 制備 0.1、0.5、1.6 μg·mL-1的血漿，每種濃度各做3份樣品。每份按“血漿樣品的處理”項下“精密加入 50 μL 10.0 μg·mL-1奧美拉唑內標溶液”起操作。記錄色譜圖，測定蘭索拉唑與內標奧美拉唑的色譜峰面積(As1與Ar1)，對上述As1、Ar1與 As、Ar按 As1/As×100%計算，即為蘭索拉唑的絕對回收率（R）。結果表明，蘭索拉唑的高中低濃度回收率均大于75%。

2.1.4.2 相對回收率 對“絕對回收率”中得到的As1、Ar1與 As、Ar按(As1/Ar1)/(As/Ar)×100%計算，即得各濃度“血漿樣品處理方法”的相對回收率，結果表明，蘭索拉唑的高中低濃度相對回收率均大于80%。

2.1.5 精密度考察精密量取不同濃度的蘭索拉唑標準溶液50 μL，加入空白血漿0.5 mL，制備0.1、0.5、1.6 μg·mL-1的血漿，每種濃度各做 5 份樣品。每份按“血漿樣品的處理”項下“精密加入50μL 10.0μg·mL-1奧美拉唑內標溶液”起操作。在批內和批間（連續5天）對每種濃度各做5份樣品，記錄色譜圖，記下蘭索拉唑峰面積（As）對奧美拉唑峰面積（Ar），用標準曲線計算蘭索拉唑的濃度。求得批內和批間相對標準差，結果見表2，其表明血漿樣品分析的精密度良好，RSD均小于10%。

表2 HPLC法的批內和批間變異 (±s，n=5)

表2 HPLC法的批內和批間變異 (±s，n=5)

2.1.6 穩定性考察

血漿樣品處理后室溫放置穩定性 精密量取蘭索拉唑標準溶液50 μL，加入空白血漿0.5 mL，制備低、中、高3個不同濃度水平的血漿樣品，按“血漿樣品處理”項下“精密加入 50 μL 10.0 μg·mL-1奧美拉唑內標溶液”起至 “于14000 r·min-14℃離心10 min”止操作后，各濃度每2份一組在室溫下分別放置 0、12、24 h 后取上清液 20 μL 進樣分析，測定各組分濃度，計算血藥濃度變異系數。結果表明按實驗方法處理后蘭索拉唑血漿樣品在室溫下是穩定的，RSD均小于10%。

血漿樣品冷藏放置穩定性 精密量取蘭索拉唑標準溶液50μL，加入空白血漿0.5mL，制備低、中、高3個不同濃度水平的血漿樣品，按“血漿樣品處理”項下“精密加入50μL 10.0ng·mL-1奧美拉唑內標溶液”起至“于14000r·min-14℃離心10min”止操作后，各濃度每2份一組置4℃冰箱中保存，分別在0、4、7天后取20 μL進樣。測定各組分濃度，計算血藥濃度變異系數。結果表明按實驗方法處理后蘭索拉唑血漿樣品在4℃下冷藏是穩定的，RSD均小于10%。

血漿樣品凍融穩定性 精密量取蘭索拉唑標準溶液50 μL，加入空白血漿0.5 mL，制備低、中、高3個不同濃度水平的血漿樣品，每2份一組在-20℃下分別凍融1次、2次、3次后按“血漿樣品處理”項下 “精密加入 50 μL 10.0 μg·mL-1奧美拉唑內標溶液”起操作。結果表明血漿中蘭索拉唑在-20℃下反復凍融是穩定的，RSD均小于10%。

2.2 蘭索拉唑在正常及潰瘍模型家兔體內藥代動力學研究

將蘭索拉唑注射液分別給予正常及潰瘍模型家兔耳緣靜脈滴注，按“1.5.1”項下采血方案進行試驗，血漿樣本處理方法按“1.5.2”項下進行，血藥濃度按照“2.1.2”項下標準曲線進行計算。結果見表3，蘭索拉唑平均血藥濃度對時間曲線見圖2。

表3 正常及潰瘍模型家兔靜脈滴注蘭索拉唑后血漿中的藥物濃度（±s，n=6）

表3 正常及潰瘍模型家兔靜脈滴注蘭索拉唑后血漿中的藥物濃度（±s，n=6）

（注：0表示藥物濃度低于最低檢測限）

圖2 正常及潰瘍模型家兔靜脈給予蘭索拉唑后平均藥時曲線

根據AIC進行房室模型判別，結果表明蘭索拉唑在潰瘍兔體內藥代動力學行為符合二室模型，故采用“DAS2.0”軟件按二室模型進行擬合，求得正常及潰瘍兔靜脈滴注蘭索拉唑后的主要藥代動力學參數，結果見表4（按矩量法求得）。

表4 正常及潰瘍模型家兔靜脈給予蘭索拉唑后藥代動力學參數 (±s,n=6)

表4 正常及潰瘍模型家兔靜脈給予蘭索拉唑后藥代動力學參數 (±s,n=6)

（與正常組比較：*P＜0.05）

由表4可見，分析時間內蘭索拉唑在潰瘍模型家兔體內AUC明顯升高（P＜0.05），蘭索拉唑在潰瘍模型家兔體內平均滯留時間延長，代謝速度減慢，血漿清除亦減慢（MRT(0-t)、t1/2、tmax、CL 及 Cmax和正常組比較P均＜0.05），提示胃潰瘍病理狀態影響蘭索拉唑的藥代動力學行為。

3 討 論

本實驗發現，蘭索拉唑在潰瘍模型家兔體內過程發生了顯著變化，其體內AUC(0-6.5)明顯增加，體內平均滯留時間顯著延長，血漿消除半衰期顯著增大，血漿清除率顯著減小，推測可能是在胃潰瘍病狀態下，體內肝藥酶體系發生了改變，導致蘭索拉唑代謝減慢。

本實驗建立了HPLC法測定蘭索拉唑兔血漿藥物濃度的方法，樣品前處理方法簡單,分析方法的靈敏度、選擇性、精密度和定量分析線性關系均良好,符合生物樣品分析測定要求。應用本試驗所建立的分離、檢測方法測定正常及潰瘍兔體內蘭索拉唑的血藥濃度，計算其主要藥動學參數，闡明了蘭索拉唑在體內的經時過程，為臨床藥物濃度監測提供了實驗依據,提高用藥的安全性。

[1] 沈海蓉，李中東，鐘明康.新型抗真菌藥蘭索拉唑[J].中國新藥與臨床雜志，2004，23(5):3081.

[2] 劉學峰，蔣軍榮，陳建軍.蘭索拉唑合成路線圖解[J].中國醫藥工業雜志，2004，35(10):635-7.

[3] Dugger HA,Carlson JD,Henderson W,et al.Bioequivalence evaluation of lansoprazole 30-mg capsules(Lanfast and Lanzor)in healthy volunteers[J].Eur J Pharmacol Biopharm,2001,51(2):153-7.

[4] D.Vijaya Bharathi,Kishore Kumar Hotha.Simultaneous estimation of four proton pump inhibitors-lansoprazole,omeprazole,pantoprazole and rabeprazole:development of a novel generic HPLC-UV method and its application to clinical pharmacokinetic study[J].Biomed.Chromatogr,2009,23(9):732-9.

[5] 曾曉暉，石 磊，羅新根，等.反相高效液相色譜法測定人血漿中蘭索拉唑的濃度[J]. 中國藥師，2006，9（9）:823.