蒺藜皂甙對體外培養胰島細胞胰島素分泌的影響

李明娟 楊蘭 趙俊梅

蒺藜(Tribulus terretris L.又名刺蒺藜、硬蒺藜等)系蒺藜科蒺藜屬一年生草本植物，在我國大部分地區均有分布。蒺藜的傳統入藥部位是果實，具有平肝解郁、活血祛風、明目、止癢的功效，用于“頭痛眩暈，胸肋脹痛，乳閉乳癰，目赤翳障，風疹瘙癢”［1］。蒺藜中的主要生理活性成分為蒺藜皂甙、黃酮、生物堿以及蒺藜多糖等。綜合目前國內外的研究發現，蒺藜具有降低血壓、利尿、抗衰老及增強中樞神經系統等作用，蒺藜全草入藥治療心血管疾病也有產品上市。同時，研究發現蒺藜皂甙對糖尿病動物模型具有明顯的降血糖作用［3］。本試驗采用體外培養的大鼠胰島細胞，進一步在細胞水平上觀察蒺藜皂甙對體外培養的正常大鼠胰島細胞胰島素釋放的影響。

1 材料與方法

1.1 蒺藜皂甙的制備 蒺藜干品采自山東濟南。取蒺藜全草干品機械粉碎，取蒺藜粉末用10倍量的水在100℃提取2 h，共提取3次，濾過，合并濾液 ，濃縮，沉糖，再濃縮，后用水飽和的正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮后烘干至恒重得蒺藜總皂甙，臨用前用水配制。

1.2 胰島細胞的培養

1.2.1 準備工作 環境條件:超凈工作臺，標準無菌間;設備條件:恒溫水浴，二氧化碳培養箱，冷凍離心機(配水平轉子);器材條件:手術器械(止血鉗、鑷子、手術剪、頭皮針、注射器、20目不銹鋼篩網)，5 cm培養皿，細胞培養瓶(螺紋口)，5 ml移液管，吸管，50 ml玻璃離心管，15 ml塑料離心管，小反口塞，紗布若干，解剖板。試劑條件:膠原酶p(寶靈曼公司)，Fico11400(Pharmacia公司)，1640培養基，小牛血清，D-Hank’s液，戊巴比妥鈉，75%酒精，碘酒。上述準備工作嚴格按細胞培養的要求進行。

1.2.2 胰島細胞分離純化 將SD大鼠大腿肌內注射戊巴比妥鈉麻醉后消毒固定，在超凈工作臺上做總膽管插管，注射8 ml膠原酶;分離大鼠胰腺，放入細胞培養瓶中，37℃水浴消化10 min;分離去除胰腺上的脂肪，將消化過的組織撕碎，震搖至呈細沙狀;過20目篩，篩下物移入50 ml離心管，Hank’s液洗滌兩次(4℃，2000rmp，2 min);所得細胞移入15 ml離心管中，Hank’s液洗滌(4℃，2000rmp，2 min);然后采用Ficoll密度梯度離心(4℃，300rmp，20 min)取第二、第三分界面細胞移入50 ml離心管，Hank’s液洗滌，1640培養液洗滌(4℃，2000rmp，2 min)，將所得細胞移入培養瓶或培養板。

1.2.3 胰島細胞的培養 將培養瓶放置過夜(12 h)，觀察胰島細胞是否污染。其后將未污染的胰島細胞轉入24孔培養板繼續培養48 h后將原液吸出，分為對照組和蒺藜皂甙給藥組。給藥組分別加入含有1 mg/ml，0.1 mg/ml，0.01 mg/ml的蒺藜皂甙藥液孵育24 h后將藥液吸出，加入含糖11.1 mol/L培養液刺激20 min，分別收集胰島細胞進行胰島素含量測定。

1.3 胰島素含量測定 采用胰島素免疫放射試劑盒(由上海市第一人民醫院糖尿病研究室測定)。

2 結果

2.1 蒺藜皂甙對體外培養的胰島細胞胰島素釋放的影響:試驗結果見表2。

表1 蒺藜皂甙對體外培養胰島細胞胰島素釋放的影響

3 討論

實驗中采用體外培養大鼠胰島細胞，進一步在細胞水平上觀察蒺藜皂甙對體外培養的正常大鼠胰島細胞胰島素釋放的影響。結果表明:低濃度0.01 mg/ml蒺藜皂甙能夠增加體外培養的胰島細胞胰島素的分泌，但效果不明顯;中濃度0.1 mg/ml時，與對照組相比，蒺藜皂甙能夠明顯增加胰島素的分泌量;高濃度1 mg/ml蒺藜皂甙組胰島素分泌不增加，反而有所減少，是高濃度時受體已經達到飽和還是藥液高濃度反饋抑制作用，還需做進一步的研究。

［1］中華人民共和國藥典.化學工業出版社，2005:244.

［2］江蘇新藥學院編.中藥大辭典.上?？茖W技術出版社，1999，1274-1276;2452-2453.

［3］李明娟，瞿偉菁，王煜非，等.蒺藜皂甙的降血糖作用.中藥材，2002，25(6):420-422.