氣相色譜法測定麝香跌打風濕膏中水楊酸甲酯的含量

劉莉蘭

麝香跌打風濕膏是由馬錢子、顛茄草、水楊酸甲酯等十八味藥制成的復方制劑，屬臨床常用藥。原標準無含量測定項，本法采用GC法測定水楊酸甲酯的含量，方法簡便、專屬性強，結果準確，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試劑

Agilent 6890N氣相色譜儀，FID檢測器，G2613A自動進樣器，Agilent 6890化學工作站。水楊酸甲酯對照品(110707-200107):中國藥品生物制品檢定所。供試品(E03012、E06005、G02001、G02002、G02003、G03004、G03005、G03006、G03008、G04011):廣州敬修堂(藥業)股份有限公司。其他試劑:分析純。

2 GC測定水楊酸甲酯的含量［1～5］

2.1 色譜條件 聚乙二醇(PEG)-20 M毛細管柱(Agilent 19091N-233 HP-INNOWAX，柱長30 m，內徑0.25 mm，膜厚度0.5 μm);程序升溫:初始溫度100℃，以每分鐘4℃的速率升溫至200℃，保持6 min;進樣口和檢測器溫度250℃;分流比10:1;流速1.0 ml/min。

2.2 內標物的選擇 在相同色譜條件下測定水楊酸甲酯對照品、萘和供試品，結果未加萘的供試品在萘的出峰時間沒有峰，加入萘后萘與水楊酸甲酯分離良好;在相同色譜條件下測定分析純萘和溶劑乙酸乙酯，將萘的色譜圖減去溶劑色譜圖的峰，剩余的色譜峰僅有一個，表明萘的純度較高。表明可以萘作為內標物。

2.3 提取溶劑的選擇 分別用乙酸乙酯、無水乙醇和甲醇作為溶劑，用相同的方法提取同一批供試品，結果各色譜峰無明顯差別，其含量分別為6.60、6.20及6.42 mg/g(n=2)，表明乙酸乙酯提取率最高，宜作為提取溶劑。

2.4 提取方法的選擇

2.4.1 分別用超聲30、60、90 min和冷浸8 h提取同一批供試品，結果各色譜峰無明顯差別，其含量分別為6.22、6.60、6.56及6.37 mg/g(n=2)，表明以超聲60 min的提取率最高。

2.4.2 分別用超聲60 min，加熱回流30、60、90 min、在燒瓶中加乙酸乙酯提取揮發油及在燒瓶中不加乙酸乙酯提取揮發油六種方法提取同一批供試品，結果各色譜峰無明顯差別，其含量分別為 6.58、7.46、7.44、7.42、7.34 及 6.52 mg/g(n=2)，表明以加熱回流30 min的提取率最高。宜以加熱回流30 min作為提取方法。

2.5 溶液的制備

2.5.1 供試品溶液的制備:取本品10片，揭去蓋襯，精密稱定，計算平均片重，剪碎，混勻，取相當于1片的重量，精密稱定，精密加入內標溶液5 ml，再精密加入乙酸乙酯25 ml，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.5.2 內標溶液的制備 精密稱取萘適量，加乙酸乙酯制成每1 ml含1 mg的溶液，即得。

2.5.3 陰性對照溶液的制備 取按本品處方及制法自制的缺水楊酸甲酯陰性對照樣品0.24 g(相當于供試品1片的量)，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.6 校正因子測定 取水楊酸甲酯對照品25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，精密加入內標溶液10 ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取2.0 μl，注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子。

2.7 供試品測定 取供試品溶液，吸取2.0 μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。

2.8 線性范圍考察 精密吸取水楊酸甲酯對照品溶液(2.1796 mg/ml)0.1、0.2、0.5、1、2、3、4、5 ml于 10 ml量瓶中，各精密加入內標溶液2 ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得系列標準溶液。分別精密吸取上述八種溶液各2.0 μl注入氣相色譜儀，依法測定，以對照品的濃度與內標物的濃度之比作為橫坐標，以對照品的峰面積與內標物的峰面積之比作為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:y=0.54x+0.0041，r=0.99993。結果表明，水楊酸甲酯在濃度0.021796～1.0898 mg/ml范圍內，其與內標物的濃度之比和其與內標物的峰面積之比呈良好的線性關系。

2.9 精密度試驗

2.9.1 重復性試驗 取同一批供試品6份，依法測定，結果平均含量為7.29 mg/g(RSD=0.4%，n=6)。表明本法重復性良好。

2.9.2 中間精密度試驗 取同一批供試品6份，分別由三人用同一臺儀器依法測定，結果平均含量為7.79 mg/g(RSD=0.8%，n=6)。表明本法中間精密度良好。

2.10 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，自制備后分別在0、2、4、6、8、25、50 h 依法進樣測定。結果峰面積基本不變，RSD=1.2%(n=7)，表明供試品溶液在50 h內測定基本穩定。

2.11 不同色譜柱考察 取同一批供試品2份，分別用兩條不同商品規格的毛細管柱依法測定含量，結果無明顯差別，平均值為7.31 mg/g(RSD=0.3%，n=4)。

2.12 專屬性試驗 精密吸取供試品溶液、水楊酸甲酯對照品溶液、陰性對照溶液各2.0 μl，分別用4.11項下的兩條色譜柱依法測定。結果陰性對照無干擾。(見圖1～3)

圖1 麝香跌打風濕膏GC圖(供試品)

圖2 麝香跌打風濕膏GC圖(水楊酸甲酯對照品)

圖3 麝香跌打風濕膏GC圖(缺水楊酸甲酯陰性對照)

2.13 回收率試驗 取已知含量的同一批供試品，低濃度每份取0.2 g、中間濃度每份取1 g、高濃度每份取2 g，分別各取三份，按供試品所含水楊酸甲酯的量約1:1的比例分別精密加入水楊酸甲酯對照品，依法測定，計算水楊酸甲酯的回收率。結果平均回收率為101.42%，RSD=2.9%(n=9)。表明本法回收率良好。

2.14 供試品含量測定:取供試品十批，依法測定。結果見表1。

3 討論

3.1 曾對五種程序升溫、兩種分流比進行了比較，結果以本法的色譜條件最適合，既能保證水楊酸甲酯峰的柱效、分離度，又能同時檢測本品中的薄荷腦、桂皮醛及丁香酚。

表1 麝香跌打風濕膏中水楊酸甲酯的測定結果(n=2)

3.2 十批供試品的含量差異較大，在生產過程中應嚴格控制工藝條件，控制煉膠的攪拌時間及烘干溫度，以免揮發性成分的損失;另外，增加半成品的含量測定，可以更好地控制成品的質量。

［1］劉杰，董文玲.4種中藥橡膠膏劑中樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯含量的氣相色譜法測定.中成藥，2004，26(10):798.

［2］肖樹雄，馬麗莎，鄭劍紅.氣相色譜法同時測定薄荷通吸入劑中幾種成分的含量.數理醫藥學雜志，2005，18(1):51.

［3］國家藥典委員會.中國藥典(一部).化學工業出版社，2005:392.

［4］李瑋玲，邱娟.HPLC法測定復方水楊酸甲酯搽劑的含量.廣東藥學院學報，2007，23(5):533-535.

［5］郭環娟，鐘穎，張玉嬋.氣相色譜法測定雙靈油中水楊酸甲酯的含量.廣東藥學院學報，2008，24(2):146-147.