自身免疫性肝炎和乙型肝炎患者自身抗體檢測及對比分析

張利方 李 方 石莉萍

自身免疫性肝炎(Automiune Hepatitis,AIH)是一種累及肝臟實(shí)質(zhì),由自身免疫反應(yīng)引起,伴有血清自身抗體陽性,不明原因的慢性肝病,通常經(jīng)相關(guān)自身抗體檢測進(jìn)行診斷。但由于某些自身抗體陽性也見于乙型肝炎(HB)患者(約10～15%),因而影響臨床診斷和治療。本文應(yīng)用間接免疫熒光法檢測AIH和HB患者血清自身抗體、對比分析兩種疾病自身抗體的表現(xiàn)特征。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2001年10月至2008年5月在我院住院確診的AIH 患者(AIH 組)43例,其中男12例,女31例,平均年齡57歲,符合國際自身免疫性肝炎組(IAIHC)修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。HB患者(HB組)為2006年5月至2008年5月乙肝表面抗原陽性,且病史兩年以上的住院患者100例,其中男78例,女22例,平均年齡55歲,符合2000年9月西安會議病毒性肝炎防治方案規(guī)定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.2 檢測方法

(1)應(yīng)用間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體(Anti-Nuclear Antibody,ANA)、抗平滑肌抗體(Anti-Smooth Muscle Antibody,SMA)、抗線粒體抗體(Anti-Mitchondral Antibody,AMA)和抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(Antineutrophil Cytoplas Mic Antibody,ANCA,包括核周型pANCA、胞漿型cANCA自身抗體),基質(zhì)選用甲醛固定的人中性粒細(xì)胞、HEP-2細(xì)胞和5種組織(猴肝、心肌組織,大鼠肝、腎和胃組織)的冰凍切片作抗原,以生物薄片技術(shù)將帶有細(xì)胞和組織的6種切片組合成一個(gè)反應(yīng)區(qū),待測起始血清1∶10、1∶100稀釋,與各種組織細(xì)胞共同孵育30min,加入異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的抗體孵育30min,洗片,甘油封片后熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。組織或細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)特征性綠色熒光為陽性。以上檢測試劑和技術(shù)由德國 EUROIMMUN實(shí)驗(yàn)免疫試劑公司提供。

(2)應(yīng)用美國BECKMAN UNICEL DXC800全自動(dòng)生化分析儀,按常規(guī)方法檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL),應(yīng)用美國IMMAGE特種蛋白全自動(dòng)免疫儀檢測IgG、IgA、IgM 。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 二組血清自身抗體檢出率比較

AIH組血清中各種自身抗體陽性率均明顯高于HB組,差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。AIH患者主要以ANA,SMA抗體為主,其中有24例患者ANA合并SMA抗體陽性,占55.8%,而HB患者只有16例ANA抗體陽性,無一例SMA抗體陽性。見表1。

2.2 二組患者ANA滴度比較

ANA陽性的40例AIH患者和16例HB患者ANA滴度存在非常顯著性差異(P＜0.01),AIH患者抗體以高滴度(≥1∶320)為主,而HB患者以低滴度(≤1∶100)為主。見表2。

2.3 二組患者ANA熒光模型比較

AIH患者熒光模型以核仁型和核膜型為主,HB患者以顆粒型所占比例較高。見表3。

表1 二組患者自身抗體檢出率比較(n,%)

表2 二組患者ANA滴度比較(n,%)

表3 二組患者ANA熒光模型比較(n,%)

2.4 二組患者肝功能和免疫球蛋白指標(biāo)比較

AIH患者血清ALT、AST濃度明顯高于HB患者(P＜0.05)。AIH患者免疫球蛋白以IgG升高為主,而 HB患者以IgA輕度升高為主。TBIL和IgM 二組患者無明顯差異。見表4。

3 討 論

盡管自身抗體在AIH發(fā)病機(jī)制中的確切作用尚未得到證實(shí),但自身抗體的檢測越來越受到臨床及實(shí)驗(yàn)室的重視,尤其對AIH自身抗體新的檢測項(xiàng)目的應(yīng)用,為過去原因不明的肝功能異常或治療效果不佳的AIH患者提供了鑒別診斷和治療的依據(jù)。

表4 二組患者肝功能和免疫球蛋白指標(biāo)比較(±s)

表4 二組患者肝功能和免疫球蛋白指標(biāo)比較(±s)

注:與 HB組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01

?

本文中AIH和HB患者自身抗體檢出率存在非常顯著性差異(P＜0.01),AIH患者主要以ANA(93.0%)和SMA(67.4%)抗體為主,其中 ANA合并SMA陽性患者占55.8%,AMA和pANCA、cANCA抗體陽性率分別為 13.9%和6.9%、2.3%。而HB患者僅有ANA陽性,陽性率占16.0%。抗體滴度檢測中,AIH患者自身抗體均為高滴度(≥1∶320),而HB患者以低滴度為主,高滴度僅見于5例患者中,這5例患者產(chǎn)生高滴度抗體是由病毒感染過程中的自身免疫反應(yīng)所導(dǎo)致,還是病毒參與激活自身免疫性疾病及誘導(dǎo)產(chǎn)生自身抗體值得進(jìn)一步研究。一般認(rèn)為,多數(shù)低滴度自身抗體可反映機(jī)體出現(xiàn)自身免疫反應(yīng)或疾病狀態(tài),不直接影響免疫系統(tǒng)功能,即高滴度自身抗體的存在即與自身免疫性疾病密切相關(guān)[3,4]。在臨床治療上AIH采用免疫抑制劑治療,而HB患者只用干擾素抗病毒治療,若對存在高滴度自身抗體HB患者采用干擾素治療,可能誘導(dǎo)或增強(qiáng)自身免疫活性細(xì)胞,使HB病毒復(fù)制增加。因而需進(jìn)行自身抗體及滴度監(jiān)測以實(shí)施有針對性的個(gè)體化治療。

ANA免疫熒光模型包括均質(zhì)型、顆粒型、核仁型、核點(diǎn)型、核膜型、著絲點(diǎn)型等,在肝病的發(fā)生發(fā)展過程中,自身免疫功能的變化多集中在與細(xì)胞增值、分裂有關(guān)的核仁成分上,本文結(jié)果中AIH患者主要以核仁型(50.0%)、核膜型(25.0%)為主,而HB患者以顆粒型(37.5%)較常見,兩組熒光模型的特點(diǎn)可輔助臨床進(jìn)行鑒別診斷。ALT、AST、TBIL是反映肝功能損害較為敏感的指標(biāo)[5],自身抗體與肝細(xì)胞相互作用所產(chǎn)生的超敏反應(yīng)可損傷肝細(xì)胞和影響轉(zhuǎn)氨酶的釋放,進(jìn)一步加重肝臟的損害[6],本文中AIH 組ALT、AST和IgG明顯升高,進(jìn)一步證實(shí)了這種變化。

血清自身抗體檢測對AIH的診斷具有重要意義,隨著檢查方法的普及,AIH檢出率顯著增加,已逐漸成為非病毒性肝病中的主要病種。因此,對原因不明的肝炎患者常規(guī)檢測自身抗體,監(jiān)測抗體的滴度,有利于AIH的臨床診斷、鑒別診斷和治療。