酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法測定茶多酚的比較

王燁軍，徐奕鼎，黃建琴，王文杰，方吳云

（1.安徽省農業科學院茶葉研究所，祁門 245600；2.國家茶樹育種安徽分中心，祁門 245600）

酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法測定茶多酚的比較

王燁軍1,2，徐奕鼎1,2，黃建琴1,2，王文杰1,2，方吳云1,2

（1.安徽省農業科學院茶葉研究所，祁門 245600；2.國家茶樹育種安徽分中心，祁門 245600）

采用酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法對26個茶樣進行測試，比較兩種方法所得數據的差異，結果表明：酒石酸亞鐵比色法雖然快速、簡便、重現性好，但與高錳酸鉀滴定法相比結果要高5.48～37.88%不等，高錳酸鉀滴定法相對而言數據更接近真實值。

茶多酚；茶水浸出物；酒石酸亞鐵比色法；高錳酸鉀滴定法

茶多酚（tea polyphenol,TP）是茶葉的主要有效成分之一，具有抗衰老、抗癌、清除人體自由基、抗輻射、降血糖血脂等多種生物學活性。茶多酚測定方法較多，酒石酸亞鐵比色法為國家標準測定方法（GB8313-87～GB8313-2003），具有快速、簡便、重現性好的特點。但酒石酸亞鐵比色法做出的數據往往偏高[1，2]。因此，為了探討測定數據偏高的原因，于2009年6月2日至4日，分別對26個茶樣采用酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法進行測試，比較兩種方法所得數據的差異，為茶葉多酚檢測推薦相對準確、簡便、通用的方法。

1 材料與方法

1.1 材料共測試樣品26個，其中1～17號樣為“國家級茶樹良種鳧早2號高效繁育推廣”送檢樣品；18～26號由國家科技支撐項目“主要經濟作物減災避災關鍵技術集成與示范”支項目“茶樹減災避災關鍵技術集成與示范”提供。茶葉樣品采制參照《茶樹種質資源描述規范和數據標準》[3]。2009年6月2日至6月4日進行茶多酚測定。

1.2 儀器與試劑UV-2550紫外-可見分光光度計（日本島津公司生產），751、721分光光度計，所用試劑均為AR級。

1.3 測定方法茶多酚含量檢測采用酒石酸亞鐵比色法[4]和高錳酸鉀滴定法[5]。

2 結果與分析

2.1不同日期酒石酸亞鐵比色法測定結果比較

表1 不同日期酒石酸亞鐵比色法測定結果

表1為不同日期、由不同檢測人員采用酒石酸亞鐵比色法和UV-2550測定4個茶葉樣品所得結果。由表1知：6月2日和4日采用酒石酸亞鐵比色法所得結果差距不大，都在允許誤差范圍之內，尤其是11、12和25號樣變異系數≤0.28?？梢娋剖醽嗚F比色法和測定儀器的穩定性都很好，茶葉樣品多酚含量在兩日內也沒因儲放問題而發生變化。2.2不同儀器酒石酸亞鐵比色法測定結果比較

表2 不同儀器酒石酸亞鐵比色法測定結果

表2為6月4日，采用酒石酸亞鐵比色法并利用UV-2550、751、721分光光度計三種儀器進行比色所得結果。結果表明：采用三種儀器測定的數據變異系數以11號樣最大，12號樣最小，分別為2.43%和1.33%?？梢娋剖醽嗚F比色法所得數據偏高也不是因為儀器精度原因所造成的。

2.3 不同批次試劑酒石酸亞鐵比色法測定結果比較

表3為原有試劑和新購試劑，采用UV-2550于6月4測試所得結果，試劑1為6月2日測試所配試劑，試劑2為新購藥品于6月4日所配試劑。由于原配試劑開瓶時間較長，考慮到試劑純度問題，故而新購一批試劑用于測試。結果表明：試劑1測試結果普遍高于試劑2的測試結果，變異系數以26號樣最高，達到了2.72%，以25號樣最低，為1.97%，整體比較穩定。可見試劑1由于存放時間影響，純度有所下降，但兩批試劑測試結果的變異系數在1.97～2.72%之間，屬于正常波動。

表3 試劑對酒石酸亞鐵比色法結果的影響

2.4高錳酸鉀滴定法與酒石酸亞鐵比色法測定結果比較

表5為6月2日采用酒石酸亞鐵比色法（比色儀器為UV-2550）和6月4日采用高錳酸鉀滴定法所得結果。由表1知，茶葉樣品多酚含量在兩日內沒有因儲放問題而發生變化，故2組數據可以進行比較。由表5可知，酒石酸亞鐵比色法測得結果普遍要比高錳酸鉀滴定法測的結果要高5.48～37.88%不等。尤其是18號樣酒石酸亞鐵比色法的結果高達39.93%，接近42.55%的水浸出物含量。此外，18～26號樣酒石酸亞鐵比色法測得結果比高錳酸鉀滴定法測的結果高5.48～12.99%，可能對于蒸青樣2種方法的差異度要小。

表4 水浸出物含量

表5 高錳酸鉀滴定法與酒石酸亞鐵比色法測定結果

3 討論

酒石酸亞鐵比色法是利用多酚類在一定pH值條件下與酒石酸亞鐵形成藍紫色絡合物[6]，用分光光度法定量，該法重復性好。而高錳酸鉀滴定法則除了能氧化茶葉中的多酚類物質外，還能氧化部分非多酚類物質，如維生素C（其含量不及1%）[7]。理論上講高錳酸鉀滴定法測定的茶多酚含量應該比茶多酚的實際含量要稍高，然而通過測定26個茶樣的茶多酚含量發現：酒石酸亞鐵比色法測定的多酚含量卻遠高于高錳酸鉀滴定法測定茶多酚的含量，幅度在5.48～37.88%不等。究其原因可能是：①茶葉中不同多酚的組分對酒石酸亞鐵的呈色能力有差異。如兒茶素組分中具有連位羥基的呈色能力比具有鄰位羥基的呈色強3倍，導致含連位羥基兒茶素含量高的綠茶或茶葉提取物的多酚測定結果偏高，尤其是兒茶素含量超過70%，用此方法測定的結果超過100%[6]。②酒石酸亞鐵比色法的換算系數是否準確。目前酒石酸亞鐵比色法的換算系數采用3.913，用此系數測定某些品種茶葉樣品時，有的數值明顯偏高，因此換算系數采用3.913是否可取，值得研究。③酒石酸亞鐵比色法測得的結果偏高可能是因為酒石酸亞鐵比色法是測定茶葉中酚類物質總量[2]。由表4、表5發現有的多酚的百分含量幾乎接近水浸出物含量，這與實際含量不相符，因為茶葉水浸出物中除了含有多酚類物質外，還有蛋白質、咖啡堿、氨基酸等多種組分。

通過以上分析可知：酒石酸亞鐵比色法雖然重復性較好，數據穩定，但所得結果差異較大，而高錳酸鉀滴定法所得數據相對而言更接近真實含量，至于滴定終點難以把握的問題，如果利用自動電位滴定儀能較好地解決。

[1] 陳惠衡，施玲，劉芳，等．酒石酸比色法和Folin-Denis 法測定茶多酚的比較[J]．中華預防醫學雜志，2008，42（4）：272～274.

[2] 黃皓，毛志方，涂云飛，等．兩種方法測定茶葉中茶多酚含量的比較[J].中國茶葉加工，2009，（2）：43～44.

[3] 陳亮，楊亞軍，虞富蓮，等．茶樹種質資源描述規范和數據標準，中國農業出版社，2005年10月第一版：70～72.

[4] GB/T8313-2002 茶 茶多酚的測定[S].

[5] 商業部茶葉畜產局,商業部杭州茶葉加工研究所.茶葉品質理化分析[M].上海：上?？茖W技術出版社，1989：256～257.

[6] 商業部茶葉畜產局,商業部杭州茶葉加工研究所.茶葉品質理化分析[M].上海：上海科學技術出版社，1989：256～258.

[7] 劉仲華，黃建安，王增盛，等．兒茶素提取工藝技術研究[J].湖南農業大學學報，1997，23：537～542

TS207.3

B

1006-5768（2010）02-0061-03

2009-12-03

國家科技支撐項目“主要經濟作物減災避災關鍵技術集成與示范”支項目“茶樹減災避災關鍵技術集成與示范”（2008BADC0B03）