雞胚地龍接骨膏治療骨折的實(shí)驗(yàn)研究

【摘要】 目的 觀察雞胚地龍接骨膏促進(jìn)骨折愈合的過程及其機(jī)理。方法 將60只新西蘭大白兔制作骨折動物模型，隨機(jī)分成三組，治療組20只，于患處外貼雞胚地龍接骨膏，對照組20只，口服傷科接骨片，開放組20只，不使用任何藥物。三組均以相同大小外用繃帶、膠布固定，治療28天。分別于術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天、術(shù)后28天處死動物，取橈骨標(biāo)本作X線檢查、抗折力測試、骨折處組織學(xué)觀察、骨痂評分并應(yīng)用微機(jī)圖像處理系統(tǒng)作骨痂內(nèi)骨系細(xì)胞立體定量分析。結(jié)果 治療組術(shù)后21天新西蘭大白兔傷肢完全愈合，骨折線消失，骨髓腔再通，而對照組和開放組動物骨折處未愈合，斷端清晰可見。X線檢查顯示治療組的骨折修復(fù)優(yōu)于對照組和開放組，并且生物力學(xué)性能、骨痂評分及骨痂內(nèi)成骨細(xì)胞立體定量均顯著高于對照組和開放組（P＜0.05或＜0.01）。結(jié)論 雞胚地龍接骨膏外貼治療能加速促進(jìn)骨折愈合過程和提高骨折愈合質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 雞胚地龍接骨膏；骨折；中藥外治法

文章編號：1003-1383(2010)02-0117-04 中圖分類號：R 683.41 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.02.001

Experimental study of the influence of Jipeijiegu ointment for treatment of fracture

SHEN Zhenhua，HU Jianshan，ZHAO Suping，LI Pu，LI Wenzhong，QIN Jiayong，SONG Xillun

(Department of Pathology，The Hosptial of TCM of Qiannan，Duyun 558000，China)

【Abstract】 Objective To observe the effect of Jipeijiegu ointment for the treatment of fracture and explore its mechanism.

Methods Animal fracture models were made in in 60 rabbits.They were divided randomly into treatment group，control group and open group.The treatment group was given JiPeijiegu ointment，while the control group was given shangkejiegutabella，and the open group didn't given medicine. All rabbits were fixed with the same bandageand adhesive tapefor 28 days.The animals were sacrificed respectively in the 7th，14th，21st and the 28th day after treatment，and the radius specimen were examined by Xray，restence test， histological observation，calus score，and made cell stereoquantitative analysis on bone cell lineage within osteotylus by using computer image processing system.Results The wounded limbs repaired completely，fracture disappeared and marrow cavity unobstructed again in treatment group within 21 days after operation，the Xray films suggested that the fracture healing of the treatment group were better than that of the control group and the open group.the result of biomechanical property tested and integrate intensity of callus by Xray film and bone cell lineage within osteotylus by using computer image processing system of the treatment group were significantly better than that of the control group and the open group(P＜0.05 or P＜0.01).Con

clusion Jipeijiegu ointment can promote fracture healing and improve fracture healing quality.

【Key words】 Jipeijiegu ointment；fracture；TCM external use

骨折是臨床上常見的病癥，嚴(yán)重威脅患者的健康和生活質(zhì)量，甚至導(dǎo)致殘廢和死亡。中醫(yī)中藥治療促進(jìn)骨折愈合療效肯定，已被臨床廣泛證實(shí)。但大多偏向于內(nèi)服中藥方面的研究，而外用中藥促進(jìn)骨折愈合的研究較少。雞胚地龍接骨膏為我院臨床應(yīng)用20多年治療骨折的外用中藥制劑，具有活血祛瘀、消腫止痛、續(xù)筋接骨之功效。我們選擇新西蘭大白兔制作骨折動物模型，采用雞胚地龍接骨膏外用治療，觀察其促進(jìn)骨折愈合的療效并探討其作用機(jī)理，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)藥物 （1）雞胚地龍接骨膏：①藥物組成：由透骨草、地龍、五加皮、骨碎補(bǔ)、乳香、沒藥、血竭、川續(xù)斷、紅花、威靈仙、自然銅、五倍子及剛出殼的小雞等23味中藥組成。②配料:按處方將上藥炮制合格，稱量配齊，先研成細(xì)粉備用。③提取:取植物油置鍋中，微熱投入藥料，后下透骨草、地龍、五加皮、骨碎補(bǔ)、川續(xù)斷、紅花、威靈仙、自然銅、五倍子，文火炸至表面深褐色，內(nèi)部焦黃為度，溫度控制180℃～200 ℃，加入血竭、乳香、沒藥熔融。④煉油:改用中文火，繼續(xù)熬煉，不斷撩油，避免觸及鍋底，程度通過溫度、油煙、油花、滴水成珠判定。⑤下丹成膏:溫度約300 ℃時(shí)，加入黃丹(除去水分，過80目篩) 采用火上下丹法，同向攪拌，速度適宜，隨時(shí)用“滴水成珠”法檢視合適度，加入蜂蠟熔融，收膏。⑥去“火毒”:膏藥傾入冷水中，木棒攪拌，使成帶狀，反復(fù)捏壓，制成團(tuán)狀，浸入水中，每天換水1 次，約2 周，使火毒去盡。⑦攤涂:取膏藥熔化，加冰片，粉碎小雞攪勻，塑料袋包裝，由本院制劑科生產(chǎn)。規(guī)格:80 cm×80 cm，院內(nèi)制劑。（2）傷科接骨片（大連美羅中藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字Z21021461，生產(chǎn)批號080924）。

2.動物分組 10月齡健康新西蘭大白兔60只，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心統(tǒng)一提供，體重（2.0±0.2）kg，雌雄各半，隨機(jī)分為治療組、對照組及開放組，每組各20只。

3.動物模型制備及治療方法 所有動物于實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，按體重劑量30 mg/kg靜脈注射3％戊巴比妥鈉麻醉，左前臂皮膚去毛，用碘酒、酒精常規(guī)消毒，局部作一切口，剝離骨膜。于旋前圓肌止點(diǎn)遠(yuǎn)端用雙鋸片造成右側(cè)橈骨中段3 mm寬的骨缺損后，縫合傷口，不作任何固定。術(shù)后用抗生素3 d，并隨機(jī)分為3組分籠喂養(yǎng)。造模后1日，治療組待傷口干燥后，外敷雞胚地龍接骨膏，每只動物取該膏藥25 g，約相當(dāng)于人的等效劑量，平攤于無紡石膏藥棉上，以骨折處為中心寬大約5 cm，環(huán)狀包裹，外用繃帶、膠布固定，每7 d 換藥1次。對照組不外敷藥，僅以相同大小外用繃帶、膠布固定，更換時(shí)間與治療組相同，術(shù)后第1天即開始口服傷科接骨片，每天150 mg/kg，相當(dāng)于人的等效劑量。開放組不外敷藥，僅以相同大小外用繃帶、膠布固定，更換時(shí)間同治療組。三組試驗(yàn)時(shí)間為28天，飼養(yǎng)條件相同，研究期間三組均無動物死亡。

4.觀察指標(biāo)及方法

（1）X線檢查 術(shù)后7、14、21、28天三組動物分別在48 kV，25 mA，0.12 s，50 cm的投照條件下進(jìn)行X線攝片，以觀察骨折修復(fù)過程和效果。

（2）抗折力測試 采用直接抗折力方法，取兔完整橈骨標(biāo)本。剔除骨膜，測試時(shí)以骨折處為中心，跨距5cm，謹(jǐn)慎添加重量至標(biāo)本自骨折處折斷，得抗折力（單位：g）。

（3）組織學(xué)觀察 術(shù)后7、14、21、28天各組隨機(jī)殺死5只新西蘭白兔，取下右側(cè)橈骨，10％甲醛固定，混合脫鈣液脫鈣，逐級脫水，石蠟包埋，每只兔作2張切片，HE染色，光鏡觀察。

（4）骨痂積分 每個(gè)標(biāo)本切片鏡下所見4種骨痂（外骨痂、內(nèi)骨痂、橋梁骨痂、聯(lián)接骨痂）記分按：血腫1分，纖維（成纖維細(xì)胞）2分，軟骨細(xì)胞和類骨細(xì)胞3分，小梁骨4分，計(jì)算所得分相加為總分。

（5）骨痂內(nèi)骨系細(xì)胞立體定量分析 在HE染色切片上，取骨痂遠(yuǎn)、中、近3個(gè)視野，利用微機(jī)圖像處理系統(tǒng)處理切片圖像，分別計(jì)算出骨折后7、14、21、28天骨痂內(nèi)成骨細(xì)胞的平均體積密度(Vvt)，平均體積(Vv)，數(shù)量密度(Nv)。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（-±s）表示，三組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用q檢驗(yàn)（NewmanKeuls法），計(jì)數(shù)資料的比較采用χ²檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.X線檢查所見 術(shù)后14天，治療組動物右橈骨折處已有明顯骨性骨痂形成，局部增粗，骨密度較高，骨折線不清，但斷端骨髓腔未通。而對照組在骨折處僅見纖維性骨痂，骨痂密度較低，骨折線清楚可見。開放組動物傷肢局部軟組織腫脹明顯，未見有骨痂形成，斷端無骨連接，骨折線清楚。術(shù)后第21天，治療組動物傷肢已完全愈合，骨折線消失，斷端骨髓腔再通，骨皮質(zhì)厚度與健側(cè)完全相同。對照組動物傷肢局部已形成了骨性骨痂，但骨髓腔未通。開放組動物傷肢局部僅生有大量纖維性骨痂，密度較低，斷端清楚可見。術(shù)后28天，治療組動物骨小梁排列較規(guī)則，分布較均勻，連續(xù)性好，順力線排列，骨折端修復(fù)的塑形基本恢復(fù)到解剖形態(tài)。對照組和開放組顯示骨折處膨大狀，塑形效果差。

2.三組抗折力比較 同一時(shí)間測試抗折力，測試跨距5 cm。術(shù)后7天三組抗折力比較無顯著性差異（P＞0.05）；14、21、28天時(shí)治療組、對照組橈骨標(biāo)本抗折力較開放組顯著增強(qiáng)（P＜0.05或0.01），治療組優(yōu)于對照組（P＜0.01）。見表1。

3.三組組織學(xué)觀察治療組動物術(shù)后7天，外骨痂中含有較多的成纖維細(xì)胞和纖維性結(jié)締組織及新生的毛細(xì)血管，骨生成細(xì)胞數(shù)量較多，呈群存在，位于幼稚骨小梁邊緣有眾多呈層排列的成骨細(xì)胞；術(shù)后14天，骨小梁進(jìn)一步成熟，呈網(wǎng)狀或海綿狀，功能活躍的成骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞與功能活躍的破骨細(xì)胞同期發(fā)揮作用，進(jìn)行內(nèi)外骨痂塑建和改建，部分骨小梁被吸收；術(shù)后21天，內(nèi)外骨痂改建、塑建進(jìn)一步完善，骨髓腔已通，骨折線消失，骨折被修復(fù)；術(shù)后28天，骨折處大部分可見內(nèi)外骨痂已橋接，與相連的健康骨相近似，骨小梁數(shù)量較多，順力線排列，骨髓腔全部已貫通，血管豐富，可見大量密集排列整齊的成骨細(xì)胞，破骨細(xì)胞數(shù)量少。對照組動物至21天，內(nèi)外骨痂處于塑建和改建階段，而開放組在骨折處有大量纖維組織和成纖維細(xì)胞，僅見大量成骨細(xì)胞，斷端依然明顯；至28天，對照組、開放組兩組骨痂生長稀疏，排列紊亂，外骨痂數(shù)量大、較厚，未形成與健康骨形態(tài)相近的致密性骨皮質(zhì)，骨小梁大部分未會師橋接，骨折處可見較多纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，部分標(biāo)本軟骨化骨不全，骨髓腔未再通。

4.三組骨痂積分比較 每個(gè)時(shí)間段動物數(shù)為5只，每只兔作2張切片，每組觀察10張切片。術(shù)后7天三組骨痂積分的比較無顯著性差異（P＞0.05），術(shù)后14、21、28天治療組骨痂積分與開放組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，治療組骨痂積分優(yōu)于對照組(P＜0.01)。見表2。

5.三組不同時(shí)期骨痂內(nèi)骨系細(xì)胞立體定量比較 每個(gè)時(shí)間段動物數(shù)為5只，每只兔作2張切片，每組觀察10張切片。術(shù)后7、14、21、28天三組Vvt、Vv比較有顯著性差異(P＜0.01)，術(shù)后28天三組Nv比較有顯著性差異(P＜0.01)，治療組術(shù)后7、14、28天Vvt、Vv、Nv三項(xiàng)指標(biāo)定量值均顯著高于對照組和開放組 (P＜0.05或0.01)。見表3。

討論

骨折屬于中醫(yī)損傷“血瘀證”范疇。中醫(yī)認(rèn)為，骨折損傷氣血，導(dǎo)致血液離經(jīng)妄行，惡血留滯，形成血瘀，以致氣血運(yùn)行不暢，瘀積不散。氣血瘀阻，經(jīng)絡(luò)閉塞是創(chuàng)傷骨折的病機(jī)核心。歷代醫(yī)家均把藥物外敷視為治療骨折的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，并且占有非常重要的地位。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為骨折愈合就是“瘀去、新生、骨合”的過程。《內(nèi)經(jīng)》曰:“氣傷痛”，“形傷腫”，骨折損傷氣血、經(jīng)脈， 氣血運(yùn)行失常，致“氣血凝結(jié)”。以活血化瘀、消腫止痛、續(xù)筋接骨作為治療骨折疾病的基本原則， 是骨折修復(fù)的必用之法。雞胚地龍接骨膏是我院應(yīng)用多年治療骨折的外治藥，其遣方用藥嚴(yán)格遵循祖國醫(yī)學(xué)外治之法。《理瀹駢文》曰:“外治之理，即內(nèi)治之理，外治之藥，亦即內(nèi)治之藥;所異者，法耳”。外治之法， 藥物可直達(dá)病所。“用膏貼之，閉塞其氣，使藥性從毛孔而入腠理，通經(jīng)貫絡(luò)，或提而出之，攻而激之，較之服藥尤有利，此至妙之法也”。現(xiàn)代藥理學(xué)的研究表明［1~4］，外用活血化瘀中藥后，骨折部位的脈沖迅速下降，增加了骨折斷端組織毛細(xì)血管的開放量， 改善循環(huán)，瘀血消散，代謝產(chǎn)物的清除加快。改善微創(chuàng)傷造成的血液流變學(xué)向高凝狀態(tài)轉(zhuǎn)化。促進(jìn)骨折局部的血腫吸收，多核白細(xì)胞活性明顯增強(qiáng)，表現(xiàn)為吞噬功能增強(qiáng)，血腫吸收機(jī)化加快。

雞胚地龍接骨膏由透骨草、五倍子、五加皮、骨碎補(bǔ)、乳香、沒藥、血竭、川續(xù)斷、紅花、威靈仙、自然銅、地龍等23味中藥組成。該方針對骨折損傷后血脈受阻，瘀血，留滯經(jīng)絡(luò)，局部腫脹，疼痛或骨已接正，筋已理順，瘀血未凈，合而不堅(jiān)。損傷后期筋骨軟弱，筋肉攣縮，關(guān)節(jié)不利，兼有外邪等癥組方。方中乳香、沒藥、紅花、牛膝活血散瘀，行氣通經(jīng)；川續(xù)斷、西瓜子、自然銅、骨碎補(bǔ)補(bǔ)肝腎、壯筋骨；五加皮、透骨草祛風(fēng)濕，止痹痛，強(qiáng)筋壯骨、威靈仙、川草烏祛風(fēng)除濕，通經(jīng)止痛；生鹿角清營涼血，地丁、銀花清心解毒，消散瘀痛；檀香、冰片走竄之品開竅醒腦；兒茶清熱止血，妙用出殼之小雞血肉有情之品，益氣補(bǔ)精生肌，引藥入骨肉血脈為使藥。使藥物通過皮膚直接作用于病所， 發(fā)揮諸藥之功。其中川續(xù)斷［5］、自然銅［6~8］等均有改變骨的形態(tài)，促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的作用。縱觀全方組成， 君臣佐使， 相得益彰，諸藥合用可使腠理疏通，活血散瘀，消腫止痛，接骨續(xù)筋，風(fēng)邪得去，散瘀止痛不忘壯骨生新，標(biāo)本同治。本研究顯示，給予雞胚地龍接骨膏外敷治療21天，新西蘭大白兔傷肢完全愈合，骨折線消失，骨髓腔再通，而對照組和開放組動物骨折處未愈合，斷端清晰可見。并且觀察到雞胚地龍接骨膏組用藥14、21及28天的X線檢查顯示，骨折修復(fù)、作生物力學(xué)性能抗折力測試、骨痂評分及骨痂內(nèi)成骨細(xì)胞立體定量顯著高于對照組和開放組（P＜0.05或＜0.01）。提示雞胚地龍接骨膏外敷后能使骨折斷端間形成大量的膠原纖維可供較多的骨礦物質(zhì)沉積，具有促進(jìn)骨痂生長，提高骨的愈合質(zhì)量，加速骨折愈合的功效。

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(收稿日期：2010-02-08修回日期：2010-03-30)

(編輯：梁明佩 英文審校：鐘京梓)