氧化苦參堿提取工藝的研究

摘要：采用單因素試驗和正交試驗對從苦參藥材中提取氧化苦參堿的工藝進行了研究。試驗結果表明，最適提取溶劑為乙醇溶液，最佳提取條件為：溶劑乙醇濃度為60％、料液比為1:30、溫度為80℃、時間為85min，在此條件下提取氧化苦參堿得率達到6.58 mg·g^－1，較優化前提高了2.8倍。

關鍵詞：苦參；氧化苦參堿；提取工藝

中圖分類號：R284.2

文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349(2009)06-0055-02

苦參又名地槐、野槐、牛參等，為豆科槐屬植物(Sophoraflavescens Ait)的干燥根，主產于我國山西、河南、河北及西北各省Ⅲ。苦參含有多種生物堿，氧化苦參堿是其中的主要有效藥用成分。現代藥理研究表明，氧化苦參堿具有抗炎、保肝、抗腫瘤、抗心律失常和免疫調節等功能。近年來有關苦參生物堿提取的研究報道多數集中在其分析檢測上，所采用的提取方法多為分析檢測其含量時的前處理方法，存在著工藝路線長、步驟多、效率低、能耗物耗高等問題，缺少生產應用價值。本研究采用單因素試驗和正交試驗探討了溶劑種類、溶劑濃度、料液比、提取溫度和時間對氧化苦參堿提取得率的影響，以期確定其最佳提取條件，為實際生產提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2000紫外可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)，BS110S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，PHS-3C酸度計(上海精密科學儀器有限公司)，R201D-Ⅱ旋轉蒸發儀(上海申順生物科技有限公司)，SHB-3循環水多用真空泵(鄭州杜甫儀器廠)，JY96－Ⅱ超聲波儀(寧波海曙祥鑫科教儀器有限公司)，DZKW-4恒溫水浴鍋(北京中興儀器廠)，回流提取裝置(自制)。

1.2 材料 氧化苦參堿對照標準品，中國藥品生物制品檢定所；苦參購自南陽市張仲景中藥材市場；硅膠G預制板，山東省青島海洋化工廠；乙醇、甲醇、三氯甲烷、氨水、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、碘、溴麝香草酚藍等均為分析純。

2 方法與結果

2.1 標準曲線的繪制

2.1.1 標準品溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的氧化苦參堿標準品，以無水乙醇溶解，配制成每1mL含2.5mg的標準品溶液。

2.1.2 標準曲線的制備 吸取標準品溶液10、20、30、40、50μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－氨水(5:0.6:0.2)為展開劑展開，展距約10cm取出，晾干，碘蒸氣顯色。刮下氧化苦參堿斑點處硅膠，移入離心管中，加無水乙醇6mL，超聲提取2次，每次15min，離心15min(2000r.min^-1)，傾出上清液合并至50mL具塞三角燒瓶中，水浴蒸干。冷至室溫后分別加入pH為7.6的0.0125％溴麝草酚蘭緩沖溶液和氯仿各6mL，密塞，振搖2min，移入50mL分液漏斗中，靜置30min，分出氧仿層于具塞試管中，以氯仿為空白，置入分光

光度計中在波長為410nm處測各濃度吸光度。以濃度(μg.mL^-1)為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為：A=0.0096×－0.0853，r=0.999

2.2 提取液樣品的測定

2.2.1 提取液樣品的制備 苦參藥材經干燥、粉碎，過20目篩。準確稱取苦參藥材粉末10.0g，按試驗方案設計的條件回流提取3次，過濾，合并濾液。濾液經減壓濃縮蒸干，殘渣用無水乙醇溶解、定容至100mL，作為提取液樣品備用。

2.2.2 測定方法 精密吸取提取液樣品20μL，按2.1.2項的方法進行點樣、展開、刮板、洗脫、顯色、測定。由標準曲線得出樣品的濃度，計算出樣品相應的產品得率。

2.3 單因素試驗及結果

2.3.1 提取溶劑的選擇 準確稱取苦參藥材粉末5份，每份10.0g，在其它提取條件相同的情況下，分別用甲醇、氯仿、95％乙醇、水、0.2％鹽酸為溶劑回流提取，按2，2項的方法測定，計算出氧化苦參堿得率(每1g

苦參藥材經提取所得氧化苦參堿的mg數，mg·g^-1)分別為1.91、1.44、2.35、1.82、2.06。結果表明，在所選用的5種提取溶劑中，乙醇溶劑提取的氧化苦參堿得率最高，為2.35mg·g^－1。因此，乙醇為最適提取溶劑。

2.3.2 提取溶劑濃度的選擇 準確稱取苦參藥材粉末7份，每份10.0g，在其它提取條件相同的情況下，分別用體積分數為35％、45％、55％、65％、75％、85％、95％的乙醇溶液為溶劑回流提取，按2.2項的方法測定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為2.19、2.34、2.57、2.76、2.65、2.51、2.36。由此可知，乙醇溶液為提取溶劑時，適宜的乙醇濃度為65％左右。

2.3.3 提取料液比的選擇 準確稱取苦參藥材粉末6份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液為溶劑，分別按料液比為1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30進行回流提取，按2.2項的方法測定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為2.17、2.53、2.75、2.78、2.83、2.85。由試驗結果可以看出，適宜的提取料液比為1:25左右。

2.3.4 提取時間的選擇 準確稱取苦參藥材粉末8份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液為溶劑，料液比為1:25，提取時間(min)分別按30、40、50、60、70、80、90、100進行回流提取，按2.2項的方法測定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^-1)分別為2.87、3.59、3.72、3.97、4.35、4.49、4.46、4.48。由此可以看出，適宜的提取時間為80min左右。

2.3.5 提取溫度的選擇 準確稱取苦參藥材粉末8份，每份10.0g，采用上述試驗所確定的提取溶劑、料液比和提取時間，提取溫度(℃)分別按25、35、45、55、65、75、85、95進行回流提取，按2.2項的方法測定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為1.26、1.97、2.53、3.76、4.51、4.85、4.82、4.83。結果表明，適宜的提取溫度為75℃左右。

2.4 正交試驗及結果

2.4.1 正交試驗設計 為確定最佳提取條件組合，進一步提高提取液的氧化苦參堿得率，根據單因素試驗結果進行正交試驗設計。選擇設計的正交試驗因素和水平見表1。

2.4.2 正交試驗結果 準確稱取苦參藥材粉末9份，每份10.0g，按表1設計的因素和水平，采用L₉(3⁴)正交表安排試驗。按2.2項的方法測定，得出各試驗處理的氧化苦參堿得率(mg·g^-1)，結果見表2。

由表2正交試驗結果的極差分析可以看出，各因素對氧化苦參堿得率影響的主次順序為c>A>B>D；最佳提取條件為A₁ B₃ C₃D₃，在此條件下提取氧化苦參堿得率達到6.58mg·g^-1。

2.4.3 正交試驗結果的驗證 準確稱取苦參藥材粉末3份，每份10.0g，按正交試驗所確定的最佳提取條件A₁ B₃ C₃D₃進行3次平行提取試驗，按2.2項的方法測定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為6.61、6.57、6.59。結果表明，所確定的最佳提取條件穩定可靠。

3 討論

提取溶劑選擇試驗的結果表明，乙醇為溶劑時氧化苦參堿得率最高，而且乙醇具有毒性小、容易回收、提取液雜質含量少等特點，故選擇乙醇作為氧化苦參索的最佳提取溶劑。

在單因素試驗基礎上經正交試驗，確定了氧化苦參堿的最佳提取條件為A₁ B₃ C₃D₃，即提取溶劑乙醇濃度為60％、提取料液比為1:30、提取溫度為80℃、提取時間為85min，在此條件下提取氧化苦參堿得率達到6.58mg·g^－1，較優化前乙醇為提取溶劑時的氧化苦參堿得率2.35mg·g^－1提高了2.8倍。

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