ＲＰ－ＨＰＬＣ法測定滿山香中槲皮素和山奈素的含量

摘 要:目的：建立同時測定滿山香中槲皮素和山奈素兩種黃酮含量的反相高效液相色譜系統。方法：Agilent C18(250mm×4.6mm)柱，以甲醇-水-磷酸（500：500：1）為流動相；流速：1ml/min；檢測波長：360nm;柱溫：30℃。結果：該法線性關系良好，槲皮素的平均回收率為98.4%，RSD為1.67%。山奈素的平均回收率為97.7%，RSD為2.28%。結論：本方法可靠，準確，分離度好，可用于滿山香的質量控制和評價。

關鍵詞：滿山香；槲皮素；山奈素；RP-HPLC;質量控制

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197（2008）01-032-03

滿山香為報春花科植物細梗香草Lysimachia capillipies Hemsl的干燥全草，具有祛風，止咳，調經等功效，臨床主要用于感冒咳嗽，氣管炎，哮喘，月經不調，神經衰弱等［1］。從細梗香草中分離得到香草內酯、香草素、胡蘿卜苷、琥珀酸、槲皮素、3，4，5，5，7-五羥基黃酮、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和山奈素［2］，還含有揮發油。本實驗同時對滿山香中的山奈素和槲皮素進行了HPLC含量測定，提供了一種更為合理的滿山香質量標準控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent-1200高效液相色譜儀（Agilent化學工作站、UV檢測器、四元泵）、arium○R611UV型超純水系統（德國Sartorius公司）、KQ-250超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）、山奈素對照品（中國藥品生物制品檢定所，0861-200002）、槲皮素對照品（中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，1078-050205），甲醇為色譜純，其它試劑為分析純。滿山香經江西中醫學院藥用植物教研室賴學文教授鑒定為報春花科植物細梗香草Lysimachia capillipies Hemsl的干燥全草。

2 方法與結果

2.1 色譜條件:色譜柱

Agilent C18(250mm*4.6mm);流動相：甲醇-水-磷酸（500：500：1）；流速：1ml/min；檢測波長：360nm;柱溫：30℃。在此條件下槲皮素在約9.4min有一色譜峰，山奈素在約16.2min有一色譜峰，見圖1，2。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取經五氧化二磷干燥過夜的山奈素（K）對照品4.92mg，槲皮素(Q)對照品0.9mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度。搖勻，作為對照品貯備液。（Q為90ug/ml，K為492ug/ml）。

2.3 供試品溶液制備

取滿山香粉末1.0g粉末，精密稱定，置索氏提取器中，加50%甲醇60ml，回流提取3h，加鹽酸0.5ml在水浴上微沸回流30min，揮干，用約10ml甲醇溶解與15g硅膠攪拌均勻，直至甲醇揮干，裝柱，用50ml石油醚洗脫，棄去石油醚液，再以100ml氯仿：甲醇（4：1）液過柱，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并加至5ml，搖勻，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察

精密量取上述儲備液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1ml、2ml、4ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋成10ml，分別吸取10ul，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定對照品峰面積。將山奈素濃度與槲皮素溶度與峰面積進行回歸處理，回歸方程分別為：槲皮素（Q）：Y=86.388X-5.4903，R=0.9998，線性范圍為：3.6~72ug/ml；山奈素（K）:Y=71.307X+21.155，R=0.9999，線性范圍為：19.68~393.6ug/ml。結果表明槲皮素（Q）與山奈素（K）分別在3.6~72ug/ml與19.68~393.6ug/ml范圍內，對照品進樣量與其峰面積積分值具有良好的線性關系。

2.4.2 穩定性試驗

精密吸取供試品溶液10ul，按上述色譜條件，在0、0.5、1、2、3、4h測定槲皮素（Q）與山奈素（K）峰面積值，結果槲皮素（Q）與山奈素（K）RSD分別為2.61%與2.76%（n=6）。

2.4.3 精密度試驗

精密吸取標準品溶液10ul，按上述色譜條件，重復進樣5次，測定槲皮素（Q）與山奈素（K）峰面積值，結果槲皮素（Q）與山奈素（K）RSD分別為2.74%與2.82%。

2.4.4 重現性試驗

取同一樣品，共6份，制成供試品溶液，按上述色譜條件進行測定結果槲皮素（Q）與山奈素（K）含量，計算，結果RSD分別為2.34%與1.82%。

2.4.5 加樣回收率試驗

精密稱取同一樣品滿山香粉末0.5g，共5份，置索氏提取器，各精密加入槲皮素（Q）與山奈素（K）對照品溶液（Q：33ug/ml，K：812ug/ml）1ml，加50%甲醇提取3h，余同“供試品溶液的制備”項下操作，制成供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算回收率，結果平均回收率分別為98.4%與97.7％，RSD為1.67％與2.28％。

2.5 樣品測定

精密稱取不同產地滿山香藥材，照“供試品溶液的制備”項下方法制備，精密吸取上述對照品溶液與各供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，結果槲皮素（Q）與山奈素（K）的分別含量為0.0061％與0.107％。

3 小結

3.1 提取溶劑選擇

分別選擇了甲醇、50%甲醇、80%甲醇作為提取溶劑，槲皮素含量測定結果表明：50%甲醇甲醇＞80%甲醇，山奈素含量測定結果表明：甲醇≥50%甲醇80%甲醇，因此，綜合考慮，選用50%甲醇時，峰形最好，且目標物含量較高，故選用甲醇作為該方法的提取溶劑。

3.2 提取方法選擇

分別選擇了3種提取滿山香粉末的方法，即超聲30min、索氏提取3h、回流提取1h，槲皮素含量測定結果表明：索氏3h超聲30min≥回流1h，山奈素含量測定結果表明：超聲30min≥索氏3h回流1h，因此，綜合考慮，選用索氏提取3h時，峰形最好，且目標物含量較高，故選用索氏提取3h作為該方法的提取方法。

3.3 分離方法選擇

分別選擇了聚酰胺過柱，石油醚、乙酸乙酯萃取分離，硅膠過柱3種分離方法，槲皮素含量測定結果表明：硅膠過柱分離聚酰胺過柱分離＞石油醚、乙酸乙酯萃取分離，山奈素含量測定結果表明：硅膠過柱分離≥聚酰胺過柱分離石油醚、乙酸乙酯萃取分離，因此，綜合考慮，選用硅膠過柱的分離方法，具有峰形較好，且目標物含量較高，故選用硅膠過柱作為該方法的提取方法。

參考文獻：

［1］ 江西省衛生廳.江西省中藥材標準［M］.南昌：江西科學技術出版社，1996.

［2］ 謝忱，徐麗珍，趙保華.細梗香草化學成分的研究［J］.中草藥，2000，31（2）：81-83.

(責任編輯：王尚勇)