紫外分光光度法測定枸杞中多糖含量

摘 要:目的：提供一種測定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同時合理篩選枸杞品種。方法：運用苯酚-硫酸紫外分光光度法測定3種枸杞品種中多糖的含量。結果：寧夏枸杞中的多糖含量為4.01%，新疆枸杞中的多糖含量為3.85%，青海枸杞中的多糖含量為4.01%；同時發現使用紫外分光光度法測定精密度好、重復性好、方法簡便。結論：寧夏枸杞中多糖含量明顯高于新疆枸杞和青海枸杞，差異達到顯著水平；紫外分光光度法是一種測定枸杞多糖質量分數的理想方法，亦可為其它類多糖質量分數的測定提供依據。

關鍵詞：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖

中圖分類號：R282.5 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197（2008）01-030-02

枸杞(Lycium Barbrum L.)屬茄科枸杞，為落葉灌木植物干燥成熟果實。近年的醫學研究表明，枸杞含有多種營養成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有廣泛的藥理學作用，可促進造血、降血脂、保肝及治療神經衰弱等。枸杞多糖(LBP)是由多個單糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物學作用的主要有效成分之一，其結構按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的順序水溶性依次遞減，不溶于乙醇、丙酮等有機溶劑。枸杞多糖對機體具有非特異性免疫調解功能，可調節機體免疫力、抑制腫瘤生長和細胞突變、延緩衰老、提高適應能力，并具有抗疲勞和加速消除疲勞的作用，已成為保健食品中的一種重要功能性添加劑，顯示出良好的應用前景。為了進一步開發新疆黑枸杞的藥用價值，本文采用紫外分光光度法測定了幾種枸杞葉中的多糖含量。

1 材料與方法

1.1 原理

多糖在80%乙醇溶液中沉淀，與單糖和低聚糖及甙類物質分離。沉淀用水溶解后，再用堿性二階銅試劑選擇性地從其它高分子物質中沉淀出具有葡聚糖結構的多糖。苯酚-硫酸可與其中的多糖起顯色反應，生成橙黃色化合物，可于485nm處比色，定量。

1.2 材料與儀器

TU-1901型紫外-可見分光光度計(北京普析通用)、島津CS-9301PC薄層掃描儀、定量毛細管(美國Dummond)、手動點樣儀(CAMAGIII型)、硅膠G(青島海洋化工集團公司)自制板；D-無水葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所生產，批號110833200302)；試劑：所用試劑均為分析純。3種枸杞子分別購于藥店、藥材集市等，經藥品檢驗所侯惠嬋主任藥師鑒定，分別編號為枸杞1、枸杞2、枸杞3。

1.3 標準曲線的繪制

標準曲線的測定及線性范圍：精密稱取105℃下干燥至恒重的葡萄糖250mg置500ml量瓶中。加水溶解并稀釋至刻度，搖勻(每1ml中含葡萄糖0.5mg，此為對照品溶液)。根據已確定的最大吸收度485nm，以濃度為橫坐標，以吸收度為縱坐標繪制標準品曲線，并得出回歸方程：A=11.775C+0.0611，r=0.9992。結果表明，無水葡萄糖在0.02~0.1g#8226;L-1范圍內，其質量濃度與吸收度線性關系良好。

1.4 樣品中枸杞多糖的測定

1.4.1 樣品提取與純化

稱取150g枸杞子于60℃烘干，放置干燥器18h，粉碎，稱取100g干燥枸杞粉，每次用氯仿/甲醇(2∶1)300mL，用索氏回流裝置于60℃回流脫脂2次，每次2h。殘渣風干后，再用80%乙醇300mL，回流2次，每次2h。殘渣加適量水于90℃3次，每次1h。離心10min，5000r/min，合并上清液，濃縮成200mL。在磁力攪拌下，將濃縮液滴入5倍體積的95％乙醇中，靜置12h。抽濾，固形物分別用95%乙醇、無水乙醇、丙酮洗滌，真空干燥，得LBP粗品。

1.4.2 樣品中多糖的測定

稱取干燥后所得的枸杞多糖粗粉50.0mg，置于50mL容量瓶中，加水溶解至刻度，精密吸取該溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL和5.0mL于50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，各取1mL于10mL比色管中，分別加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，勻速加入5mL濃H2SO4，立即搖勻后置于冷水浴冷卻至室溫，以蒸餾水同法作空白參比，兩種方法的樣品均選擇在485nm處測定吸收度，計算多糖含量(以葡萄糖計)。

2 結果

2.1 樣品含量

按下式計算樣品中多糖的含量，結果見表1。

多糖(%)=(C×Df/m)×100%

C=供試溶液中葡萄糖含量(u/ml)；D=供試溶液的稀釋倍數；f=換算因子；w=樣品重量(mg)

2.2 精密度實驗

分別精密吸取葡萄糖對照品溶液1mL并定容至25mL，取該樣品溶液1mL于10mL比色管中，依前法測定吸收度，測定A值，求得其RSD為1.14%(n=3)，精密度良好。

2.3 重現性實驗

取同一批枸杞樣品3份，分別依上述方法制備多糖溶液，測定多糖含量，RSD=0.47%(n=3)，重復性好。

3 討論

枸杞屬植物枸杞為多棘刺落葉小灌木，抗旱能力很強，其漿果枸杞子在《神農本草經》中被引為上品，是我國傳統名貴中藥材，素有“紅寶”美稱。其甘寒無毒，治五內不足，味甘、淡，具有清肝、潤肺、滋腎明目、益氣生精、祛虛癆、強筋骨、抗癌等功效，既含有碳水化合物、蛋白質、脂肪、胡蘿卜素、核黃素、鈣、磷、鐵、鋅，還含有多種維生素及玉蜀黍黃素，因而一直受到中外醫學與食療專家的高度重視。枸杞多糖(LBP)是其一種重要活性成分，具有調節機體免疫力、抑制腫瘤生長和細胞突變、延緩衰老、抗脂肪肝和降血糖等藥理作用。新近的研究發現，枸杞多糖可明顯改善腦缺血再灌注小鼠的行為障礙及卒中癥狀，顯著提高腦缺血再灌注小鼠的學習、記憶能力，并能促進其學習、記憶能力的恢復。枸杞多糖還可明顯促進conA活化的脾淋巴細胞DNA蛋白質的生物合成，對白細胞介素-2的產生有明顯的增強作用。但我國大多數研究使用的都是枸杞多糖的粗品，對枸杞多糖的測定方法以及其組成成分和結構的分析研究報道甚少，因此，筆者在這些方面進行了較為詳細的研究，此研究結果為枸杞多糖的深入研究奠定了堅實的基礎。

苯酚-硫酸比色法測定枸杞多糖的原理是：枸杞多糖成分在濃H2SO4的作用下會水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛衍生物，與苯酚縮合成有色化合物，再用分光光度法測定其含量。本法操作簡單、顯色穩定、靈敏度高、重現性好，可作為枸杞及其它多糖含量的測定方法。由于枸杞中含有單糖、低聚糖等雜質，且呈紅色，因此在測定之前要先用乙醇除去單糖、低聚糖等雜質，并以丙酮-石油醚脫色，才能避免其對測定產生干擾。同時，苯酚-硫酸分光光度計法在吸收波長為485nm、苯酚-硫酸試劑加入量與多糖溶液的體積比為1∶2、水解顯色10min、室溫放置10min時，能較為準確地測定樣品中多糖的質量分數，其平均精密率RSD=1.14%，重復性RSD=0.47%(n=3)。該方法精密度好，準確可靠，方法簡便，測試費用低，可用于各種多糖樣品及相關食品類物質中多糖質量分數的測定。本組資料顯示，枸杞2—寧夏枸杞中多糖含量明顯高于枸杞1—新疆枸杞和枸杞3—青海枸杞，差異達到顯著水平。同時試驗中還發現，濃硫酸的加入方式對實驗的結果影響較大，采取移液管懸空垂直加入濃硫酸并立即搖勻的方式，顯色反應充分，且顯色結果穩定。

總之，近來關于枸杞子的藥理作用報道較多，尤以免疫調節、延緩衰老、抗腫瘤、保肝作用等為主，并已基本上明確了枸杞多糖為其中有效成分。本文對3種枸杞子多糖含量進行了測定，并根據各地區均有使用多種枸杞子品種的習慣等情況作了綜合分析，提示可對上述枸杞子與寧夏枸杞子作更多的比較研究，特別是新疆枸杞子，其價格僅次于寧夏枸杞子，可望作為法定枸杞子的新來源。

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(責任編輯：杜 靖)