止嗽定喘丸（濃縮丸）質量標準研究

摘 要:目的：制定提高止嗽定喘丸（濃縮丸）質量標準的方法。方法：用RP-HPLC法對制劑中的鹽酸麻黃堿進行含量測定，TLC法對止嗽定喘丸（濃縮丸）中苦杏仁進行定性鑒別，化學反應鑒別石膏。色譜柱：Allsphere ODS(4.6mm×250mm，2.5μm)；流動相：乙腈：水（1mL#8226;L-1磷酸和1mL#8226;L-1三乙胺）（3/97）；檢測波長：207nm。結果：鹽酸麻黃堿對照品在0.2246～1.1240μg范圍內線性關系良好，平均回收率為98.03%，處方中的藥材苦杏仁能得到很好的專屬性定性鑒別。結論：處方中苦杏仁的TLC定性鑒別專屬性好，君藥麻黃中鹽酸麻黃堿含量測定方法準確、操作簡單、專屬性和重現性良好，可以有效用于止嗽定喘丸（濃縮丸）的質量控制。

關鍵詞：止嗽定喘丸（濃縮丸）；中藥質量標準；RP-HPLC；TLC

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197（2008）01-023-03

止嗽定喘丸（濃縮丸）來源于《傷寒論#8226;辨太陽病脈證并治》麻黃杏仁甘草石膏湯，由君藥麻黃、苦杏仁、石膏、甘草四味藥材組方而成，具有辛涼宜泄，清肺平喘之功效。君藥麻黃在處方中取其清肺平喘止咳之功［2］，但是其含有的鹽酸麻黃堿作為處方藥時不良反應較多，包括頭痛、失眠、肢體震顫和心悸不良反應，臨床有發生變態反應和嚴重過敏反應的報道［3-4］。這些常見的不良反應往往由于劑量過大引起。止嗽定喘丸原質量標準收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第二十冊中［1］，只有甘草和麻黃的TLC定性鑒別，本實驗對止嗽定喘丸原質量標準進行了提高，在原標準基礎上，除去麻黃的TLC定性鑒別，增加了君藥麻黃的含量測定和苦杏仁的TLC定性鑒別，以及石膏的化學鑒別反應。本文研究采用RP-HPLC法測定止嗽定喘丸中鹽酸麻黃堿的含量，TLC定性鑒別苦杏仁以及石膏的化學鑒別反應，建立了控制止嗽定喘丸質量的分析方法。該法供試品制備操作方便，方法穩定、可靠，重現性好，可作為止嗽定喘丸質量標準控制的指標。

1 儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜儀、Waters 2996二極管陣列檢測器，中文版Empower色譜工作站；昆山KQ-500E型超聲提取器（功率500W、工作頻率40KHZ）；梅特勒-托利多Excellence XP205分析天平。乙腈：HPLC級別，Fisher scientific公司；磷酸：分析純，北京化工廠（批號20060310）；甲醇：分析純，北京化工廠（批號20051028）；水為mili-Q超純水。對照品：鹽酸麻黃堿（中國藥品生物制品檢定所購置，批號：110721-200512，為含量測定用對照品）；樣品：市售（第一批、第二批、第三批）。

2 方法與結果

2.1 鈣鹽及硫酸鹽的鑒別反應

取本品0.5g，除去包衣，研細，加稀鹽酸1mL，加熱使溶解，溶液顯鈣鹽（《中國藥典》2005年版附錄Ⅳ）和硫酸鹽（《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅳ）的鑒別反應［5］。

2.2 苦杏仁薄層鑒別

取本品7g，除去糖衣，研細，加甲醇50mL超聲處理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加水20mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20mL，合并正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；另取苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制得每1mL含3mg的溶液，作為對照品溶液；按處方配比，取除杏仁外的其它藥材，按制法工藝制成丸劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版附錄ⅥB）試驗［5］，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿、甲醇、水（26∶14∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，立刻噴以磷鉬酸硫酸溶液（磷鉬酸2g加入20mL水，再將30mL濃硫酸緩慢注入水中，搖晃后顯色劑呈深藍色），在105℃烘箱中加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。

2.3 止嗽定喘丸中鹽酸麻黃堿的含量測定

2.3.1 色譜條件

參照《中國藥典》2005年版一部有關含量測定方法制定［5］。用十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-1mL#8226;L-1三乙胺的1mL#8226;L-1磷酸水溶液（3∶97）為流動相；檢測波長為207nm；柱溫：室溫；流速：1mL/min。理論板數按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于3000。

2.3.2 溶液的制備

供試品溶液的制備：取本品適量，研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲30min，冷卻至室溫，稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5mL，置10mL量瓶中，0.5%磷酸甲醇溶液定容置刻度，搖勻，測定各樣品中鹽酸麻黃堿含量。對照品溶液的制備：取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加0.5%磷酸甲醇溶液制成每1mL含56μg鹽酸麻黃堿的溶液，即得。陰性樣品溶液的制備：按處方取除麻黃的各味藥材，按處方制得樣品，再按供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。

2.3.3 專屬性考察

陰性樣品溶液的制備：按處方取除麻黃的各味藥材，按制得樣品，再按供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定結果見圖1。

2.3.4 標準曲線的考察

精密吸取濃度為56.2μg/mL的鹽酸麻黃堿對照品溶液4、6、8、10、12和20μL，注入液相色譜儀，按色譜條件分析，測定各自峰面積，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，求得回歸方程：y=2377351.87x-6460.42，r=0.9999。結果表明鹽酸麻黃堿在0.2246～1.1240μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.5 精密度試驗

取同一批號(第一批)樣品適量，按照供試品溶液制備方法操作制得樣品溶液，連續進樣6次，測定峰面積，測得峰面積值的RSD為1.61%（n=6），符合要求。

2.3.6 重現性試驗

取同一批號(第一批)樣品，研細，取約1g（共6份），精密稱定，按照供試品溶液制備操作，按色譜條件分析，測定每份樣品中鹽酸麻黃堿含量。結果樣品中鹽酸麻黃堿平均含量為2.885mg/g，RSD為2.54%(n=6)，符合要求。

2.3.7 穩定性試驗

取精密度試驗項下的供試品溶液分別于0、2、4、8、10和12h后進樣。測定鹽酸麻黃堿峰面積，測得峰面積值的RSD為1.41%，說明樣品在12小時內穩定性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗

取已知含量樣品，取一定樣品（共6份），精密稱定，分別加入鹽酸麻黃堿對照品溶液，按照供試品溶液制備操作制成樣品溶液，各取10μL，注入高效液相色譜儀，計算回收率，結果平均回收率為98.03%，RSD為1.29%(n=6)，符合要求。結果見表1。

2.3.9 3批樣品含量測定結果

取3個批號的樣品，按照供試品溶液制備操作，按色譜條件測定各自樣品中鹽酸麻黃堿含量。結果分別為2.764mg/g、2.779mg/g、2.603mg/g。

3 討論

(1)處方止嗽定喘丸提高的質量標準相比較原方，對君藥麻黃進行了定量質量控制，能夠控制全方中鹽酸麻黃堿的含量，減少由于不當劑量鹽酸麻黃堿引起的臨床不良反應；并且建立了苦杏仁的TLC定性鑒別和石膏的化學反應鑒別，能夠有效控制全方的質量。

(2)提取方法的優化。本方法簡化了2005版中國藥典中麻黃含量測定采用甲醇超聲、50%甲醇洗脫中性氧化鋁柱的方法，直接采用甲醇超聲方法，結果平均回收率為98.13%；同時本實驗考察了不同溶劑量和不同提取時間對結果的影響，測定各樣品中鹽酸麻黃堿含量。結果顯示，提取溶劑為50mL的0.5%磷酸甲醇溶液，測得樣品含量與25mL 0.5%磷酸甲醇溶液基本相同，故采用25mL的0.5%磷酸甲醇溶液為提取溶劑量。同時分別考察30、45min，各樣品中鹽酸麻黃堿含量。結果顯示提取時間為30min測定結果基本等于45min，故將提取時間定為30min。

(3)高效液相色譜法方法學考察優化。考察Allsphere ODS(4.6mm×250mm，2.5μm)和Agilent HC-C18(4.6mm×250mm，2.5μm)不同色譜柱及不同儀器AgiLent1100和Waters2695含量測定的影響。結果顯示，采用相同儀器、不同色譜柱，與采用相同色譜柱、不同儀器對測定對檢驗結果均無影響。

(4)色譜條件的優化。采用2005版中國藥典麻黃藥材含量測定的流動相［5］，鹽酸麻黃堿的色譜峰不能很好地分離，故將流動相條件更改為乙腈-0.1%磷酸的0.1%三乙胺水溶液（3：97），鹽酸麻黃堿的色譜峰得到了很好的分離和峰形。另外本實驗在調整流動相比例時發現一現象，樣品中鹽酸麻黃堿色譜峰在8min之前出來會是一個完全重疊峰，而且保留時間和光譜圖與鹽酸麻黃堿對照品一致，當調整流動相比例將保留時間推至8min之后，重疊的色譜峰才能完全分離，提示有必要將色譜峰盡量控制在8min以后，以保證色譜峰完全分離。而且純度角度小于純度閾值，表明色譜峰純度好。

參考文獻：

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準#8226;中藥成方制劑(第二十冊)［S］.北京：人民衛生出版社，1991.

［2］ 嚴正華.中藥學［M］.北京：人民衛生出版社，1991.

［3］ 胡珊，何秀國，程義林.呋麻滴鼻液致變態反應1例［J］.醫藥導報，2006，25(12)：1334.

［4］ 屈淑英，袁何.鹽酸麻黃堿致嚴重過敏2例［J］.西北藥學雜志，2006，21（6）：289.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學工業出版社，2000.

(責任編輯：王尚勇)