澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑和配方顆粒降低脂質(zhì)堆積的作用機(jī)制和藥效研究

中圖分類號(hào) R965；R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）10-1202-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.10.09

Comparative study on the mechanism and efficacy of Zexie tang traditional decoction and formula granules in reducing lipid accumulation

GUO Yuanyuan1，MA Lina2，LIN Huqin1，ZHENG Changhui1，LI Jiayi3，LI Zhijun4，CAO Junling1， 4（1. School of Chinese Materia Medica， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China；2. Dept. of Pharmacy，Dongfang Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China；3. Dept. of Pharmacy，Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China；4. Dept. of Pharmacy，Luoyang Hospital，Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Henan Luoyang 471934，China）

ABSTRACT OBJECTIVE To explore the effect and mechanism of Zexie tang（ZXT）on reducing lipid accumulation through network pharmacology，and compare the difference of traditional decoction versus formula granules. METHODS The active components and targets of ZXT were identified using TCMSP and SwissTargetPrediction databases. GeneCards，OMIM，DisGeNET and TTD databases were used to analyze the related targets of non-alcoholic fatty liver disease （NAFLD）；protein-protein interaction network model was constructed by String database；“ZXT-NAFLD target-pathway”network diagram was constructed by using CytoScape software；target enrichment analysis was performed by using Metascape platform. Fat accumulation model of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells was established to observe the effects of traditional decoction and formula granules of ZXT on lipid accumulation of cells. RESULTS Alisol B，alisol C，1-monolinolein and alisol B monoacetate were the key active components of ZXT in the treatment of NAFLD. The core targets included MDM2，MAPK1，PIK3CB，PRKCQ and MAPK14， etc. The core signaling pathways included endocrine resistance，insulin resistance and Th17 cell differentiation. Compared with model group，except for the Zexie formula granules group and Baizhu formula granules group，the absorbance values in all other administration groups were significantly decreased （ Plt;0.01 ）；the absorbance value of Baizhu traditional decoction group wassignificantly higher than that of ZXT traditional decoction group （ Plt;0.01 ）； the absorbance values of Zexie formula granule group and Baizhu formula granule group were significantly higher than that of ZXT formula granule group （ Φ^-（0.01 ）；the absorbance value of Zexie formula granulegroup was significantly higher than that of Zexie traditional decoction group（ ?Plt;0.01 ）；the absorbance value of Baizhu formula granule group was significantly higher than that of Baizhu traditional decoction group（ Plt;0.01 ）. CONCLUSIONS ZXT reduces lipid accumulation of human hepatocellular carcinoma cells through multiple components，multiple target and multiple pathways， and its traditional decoction and formula granules exhibit slightly different lipid-lowering effects.

KEYWORDS Zexie tang； traditional decoction； formula granules； non-alcoholic fatty liver disease； human hepatocellularcarcinoma cells；lipid accumulation

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver di-sease，NAFLD）是指肝臟組織中脂肪過度積累導(dǎo)致的疾病，包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相關(guān)肝硬化，全球患病率高達(dá) 30% ，兒童患病率達(dá) 16%^[1-3] 。目前，全世界尚無獲批針對(duì)NAFLD 的特定藥物[4]，西醫(yī)主要選用減肥藥、降血糖藥、降血脂藥、降血壓藥等進(jìn)行對(duì)癥治療，但需聯(lián)合用藥或長(zhǎng)期用藥，導(dǎo)致藥物不良反應(yīng)發(fā)生率升高、患者耐藥性增加、臨床療效降低[5―6]。

NAFLD 被中醫(yī)歸于“肝癖”范疇，治法常以祛濕化濁、清熱利濕為主[7]。澤瀉湯出自《金匱要略》，由澤瀉、白術(shù)2味藥組方而成[8]。方中澤瀉利水滲濕、瀉熱、化濁降脂為君藥，白術(shù)健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎為臣藥，兩藥配伍降濁升清，主治“心下有支飲，其人苦冒眩”[9]。澤瀉湯臨床主要用于治療NAFLD、梅尼埃病、高血壓、高脂血、中耳炎等[10―11]。現(xiàn)代研究表明，澤瀉湯通過降低秀麗隱桿線蟲的葡萄糖依賴性脂質(zhì)蓄積和氧化應(yīng)激水平，改善NAFLD大鼠的肝細(xì)胞脂滴積聚，提示其具有改善脂質(zhì)代謝紊亂的藥理活性[12―13]。本研究擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步探討澤瀉湯治療NAFLD的潛在作用機(jī)制，并通過建立體外脂質(zhì)堆積模型[14―19]，確證并比較澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑、配方顆粒降低脂質(zhì)堆積的藥效差異，以期為澤瀉湯的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

1.1.1 澤瀉湯活性成分及靶點(diǎn)篩選

利 用 TCMSP 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：//tcmspw. com/tcmsp.php）[20]檢索澤瀉湯中澤瀉、白術(shù)2 味中藥的化學(xué)成分。根據(jù)口服生物利用度 ?30% 、類藥性 ?0.18 初步篩選活性成分，并獲得其作用的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)。根據(jù)SwissTar‐getPrediction 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http：//www. swisstargetprediction.ch/）補(bǔ)充未檢索到的活性化合物的已知靶點(diǎn)。篩選結(jié)束后，借助 UniProt 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org）將化合物作用的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)進(jìn)行規(guī)范，校正為標(biāo)準(zhǔn)基因名稱，得到澤瀉湯活性成分靶點(diǎn)。

1.1.2 NAFLD相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“non-alcoholic fatty liver disease”為 關(guān) 鍵 詞 ，在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org）、OMIM數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http：//www. omim. org）、DisGeNET 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：//www. disgenet. org/）、TTD 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：//db.idrblab. net/ttd/）[21―24] 中 查 找 NAFLD 的 對(duì) 應(yīng) 靶 點(diǎn) ，在DrugBank 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.drugbank.ca）中查找治療NAFLD 的臨床一線西藥作用靶點(diǎn)作為補(bǔ)充[25]。匯總疾病數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn)，去除重復(fù)值，得到NAFLD相關(guān)靶點(diǎn)。

1.1.3 “澤瀉湯-NAFLD 靶點(diǎn)”蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過微生信在線軟件作圖平臺(tái)（http：//www.bioin‐formatics.com.cn/）對(duì)澤瀉湯活性成分靶點(diǎn)與NAFLD 相關(guān)靶點(diǎn)取交集，并繪制韋恩圖。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org），物種設(shè)置為“homo sapiens”，最小互相作用閾值設(shè)置為“highest confidence”（ gt;0.9 ），其余為默認(rèn)設(shè)置，構(gòu)建“澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)”蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)模型[26]。根據(jù)連接度（degree） ?2 、節(jié)點(diǎn)介度（betweennesscentrality， BC）?0.000 37 、節(jié)點(diǎn)緊密度（closeness centra-lity， CC）?0.29 、節(jié)點(diǎn)連通度（neighborhood connectivity，NC）?6 判斷核心靶點(diǎn)。

1.1.4 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

運(yùn)用 CytoScape 3.7.2 軟件構(gòu)建“澤瀉湯-NAFLD 靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，根據(jù)degree ?2 、 BC?0.000 37、CC≥0.29，NC?6 判斷發(fā)揮藥效的主要活性成分。

1.1.5 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)”富集分析

將澤瀉湯治療NAFLD 的靶點(diǎn)上傳至Metascape 平臺(tái)（http：//metascape. org/gp/index. html）進(jìn) 行 基 因 本 體（gene ontology，GO）功能和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，設(shè)置 Plt;0.01 來預(yù)測(cè)澤瀉湯治療NAFLD的主要生物學(xué)過程與代謝通路[27―28]。GO功能富集分析包括分子功能、生物過程、細(xì)胞組成3 個(gè)部分，KEGG 通路富集分析研究靶點(diǎn)涉及的治療NAFLD 的信號(hào)通路，對(duì)獲取的條目進(jìn)行聚類，采用相似度度量，相似度 gt;0.3 的子樹被認(rèn)為是聚類，通過微生信在線軟件作圖平臺(tái)繪制氣泡圖。

1.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.2.1 主要藥物

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉 Alisma plantago-aquaticaLinn. 的干燥塊莖，白術(shù)為菊科植物白術(shù) Atractylodesmacrocephala Koidz. 的干燥根莖，均購(gòu)自北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院洛陽(yáng)醫(yī)院藥房，經(jīng)該院劉安龍主任藥師鑒定符合2020年版《中國(guó)藥典》（一部）澤瀉、白術(shù)項(xiàng)下的規(guī)定。澤瀉配方顆粒、白術(shù)配方顆粒分別購(gòu)自A、B、C、D、E 5個(gè)生產(chǎn)廠家，為便于課題研究，根據(jù)原料不同設(shè)立澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑、澤瀉湯配方顆粒兩類，樣品編號(hào)、藥材批號(hào)見表1。

表1 澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑、配方顆粒樣品信息

ZXT：澤瀉湯；ZX：澤瀉；BZ：白術(shù)。

1.2.2 主要試劑

胎牛血清（批號(hào) 16000-044）購(gòu)自美國(guó) Invitrogen 公司；DMEM 培養(yǎng)基、 0.25% 胰酶、青霉素-鏈霉素（批號(hào)分別為CM10017、CC012、CC004）均購(gòu)自中科邁晨（北京）科技有限公司；CellTiter-Glo?發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒（批號(hào)G7572）購(gòu)自美國(guó)Promega 公司；油紅O 染色試劑盒 緩沖液（批號(hào)分別為G1262、P1020-500ml）均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；實(shí)驗(yàn)用高脂細(xì)胞添加劑（批號(hào)KC005）購(gòu)自西安鯤創(chuàng)科技發(fā)展有限公司；異丙醇（批號(hào)20180610）購(gòu)自北京化工廠。

1.2.3 主要儀器

HERAcell VIOS 160i 型 CO₂ 恒溫培養(yǎng)箱、15042 型96 孔白色不透明孔板均購(gòu)自美國(guó) Thermo Fisher Scien‐tific 公司；DM IL LED 型倒置顯微鏡購(gòu)自德國(guó) Leica 公司；VLBLATGD2型酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BioTek公司；3-18K型高速低溫離心機(jī)購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；BBS-V1800 型細(xì)胞用超凈工作臺(tái)購(gòu)自山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司；ME204E/02 型萬分之一分析天平、XS205DU 型十萬分之一分析天平均購(gòu)自梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；QB-9002型微孔板快速振蕩器購(gòu)自海門市其林貝爾儀器制造有限公司；REF3516型6孔培養(yǎng)板、CLS3922型96 孔培養(yǎng)板均購(gòu)自美國(guó)Corning 公司；移液槍（ 100～ 1000μL ）購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司。

1.2.4 細(xì)胞株

人肝癌細(xì)胞HepG2 購(gòu)自天津創(chuàng)科生物科技有限公司，用含 10% 胎牛血清、 100U/mL 青霉素-鏈霉素的DMEM 高糖培養(yǎng)基，在 、 5%CO₂ 無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)[29]。

1.2.5 分組與樣品制備

本實(shí)驗(yàn)分為澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑組、澤瀉傳統(tǒng)湯劑組、 白術(shù)傳統(tǒng)湯劑組、澤瀉湯配方顆粒組、澤瀉配方顆粒組、 白術(shù)配方顆粒組。澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑：按照澤瀉-白術(shù)5∶2 的質(zhì)量比，取 96.6g 飲片，加 1500mL 純水浸泡 30min ， 武火煮沸后文火煎煮 40min ，紗布濾過；二煎加 1000mL 純水，武火煮沸后文火煎煮 30min ，紗布濾過；合并濾 液，濃縮至 250mL ，冷凍干燥，備用。澤瀉傳統(tǒng)湯劑、白 術(shù)傳統(tǒng)湯劑：煎煮方法同澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑。澤瀉湯配方 顆粒：按照澤瀉配方顆粒、白術(shù)配方顆粒當(dāng)量換算后，精 密稱取相應(yīng)量配方顆粒，加培養(yǎng)基溶解， 0.22μm 微孔濾 膜過濾除菌，備用。澤瀉配方顆粒、白術(shù)配方顆粒：分別 按照單味藥當(dāng)量換算后，精密稱取相應(yīng)量配方顆粒，加 培養(yǎng)基溶解， 0.22μm 微孔濾膜過濾除菌，備用。

1.2.6 最佳藥物濃度的確定

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 HepG2 細(xì)胞經(jīng) 0.25% 胰酶消化，按1×10⁵ 個(gè) /mL 細(xì)胞密度接種于96 孔培養(yǎng)板。在 37^°C 、5%CO₂ 無菌培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)后，棄上清，分別加入不同批次、不同濃度[0（空白對(duì)照）、 0.04，0.08，0.10，0.20， 、0.40、0.80、1.00、2.00、4.00mg/mL] 含藥DMEM 培養(yǎng)基。培養(yǎng) 24h 后，吸去細(xì)胞上清（ 40μL/ /孔），加三磷酸腺苷試劑（ 60μL/ 孔），振搖 1min 后，放置于培養(yǎng)箱中孵育10min 。吸取細(xì)胞上清至96孔培養(yǎng)板中，采用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度值，計(jì)算細(xì)胞相對(duì)活力。細(xì)胞相對(duì)活力 （%）= （給藥孔吸光度值－空白對(duì)照孔吸光度值）/（對(duì)照孔吸光度值－空白對(duì)照孔吸光度值） ×100% 。選取細(xì)胞相對(duì)活力與空白對(duì)照（ 0mg/mL ）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的最低濃度作為最佳濃度。

1.2.7 油酸誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積模型的建立及藥物干預(yù)

分別使用不同濃度[0（空白對(duì)照）、75、150、300、600、1200μmol/L] 油酸鈉處理細(xì)胞，培養(yǎng) 24h 后，根據(jù)“1.2.6”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度值并計(jì)算細(xì)胞相對(duì)活力。選取無細(xì)胞毒性的油酸鈉濃度（ 300μmol/L ）處理細(xì)胞，培養(yǎng) 24h 進(jìn)行造模。將HepG2 細(xì)胞以 4×10⁵ 個(gè) /mL 細(xì)胞密度接種于6 孔培養(yǎng)板，按照上述內(nèi)容進(jìn)行造模、給藥，在 37°C，5%CO₂ 無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h ；棄上清，用1×PBS 洗2 次，加油紅O 固定液固定 20min ；棄去固定液，用蒸餾水洗2 次，加入 60% 異丙醇浸洗 20s ；棄去60% 異丙醇，加入過濾后的油紅O 染色液浸染 10min ；棄去染色液， 60% 異丙醇漂洗 20s ，蒸餾水洗5 次；加入Mayer蘇木素染色液，復(fù)染核 1min ；棄去染液，蒸餾水洗5 次；加入油紅O 緩沖液孵育 1min ，棄去。加蒸餾水覆蓋細(xì)胞，顯微鏡下觀察脂滴形成情況，用以判斷造模是否成功[14―19]。

1.2.8 細(xì)胞脂質(zhì)堆積檢測(cè)

分別將細(xì)胞設(shè)為空白對(duì)照組、模型組、澤瀉湯配方顆粒組、澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑組、澤瀉配方顆粒組、澤瀉傳統(tǒng)湯劑組、白術(shù)配方顆粒組、白術(shù)傳統(tǒng)湯劑組。空白對(duì)照組細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液中正常培養(yǎng)，模型組進(jìn)行 24h 油酸鈉干預(yù)，各給藥組分別進(jìn)行 24h 油酸鈉與各批次藥物干預(yù)。酶標(biāo)儀測(cè)各組細(xì)胞 485nm 波長(zhǎng)處的吸光度值，以反映給予藥物后是否有藥效。共選取5批次藥材進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 GraphPad Prism 10.1.2 軟件繪圖，采用 SPSS27.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料滿足正態(tài)分布以 表示，多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05 。

2 結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果

2.1.1 澤瀉湯活性成分及靶點(diǎn)的獲取

初步檢索獲得澤瀉活性成分46 種、白術(shù)活性成分55 種。根據(jù)口服生物利用度 ?30% 、類藥性 ?0.18 篩選獲得澤瀉10 種、白術(shù)7 種主要活性成分，獲得澤瀉活性成分作用靶點(diǎn)940 個(gè)、白術(shù)活性成分作用靶點(diǎn)332 個(gè)。合并后刪除重復(fù)值，最終得到澤瀉湯活性成分作用靶點(diǎn)388個(gè)。

2.1.2 NAFLD相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

檢索GeneCards、OMIM、TTD、DisGeNET 數(shù)據(jù)庫(kù)分別獲得2 672、509、8、15 個(gè)靶點(diǎn)，匯總并刪除重復(fù)值，最終得到NAFLD相關(guān)靶點(diǎn)3 162個(gè)。

2.1.3 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)”PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將篩選的澤瀉湯活性成分作用靶點(diǎn)與NAFLD相關(guān)靶點(diǎn)取交集，并繪制韋恩圖，得到138個(gè)共同靶點(diǎn)。將靶點(diǎn)提交至String數(shù)據(jù)庫(kù)，得到“澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)”PPI網(wǎng)絡(luò)圖。根據(jù) degree?2，BC?0.00037，CC?0.29，NC? 6進(jìn)一步篩選核心靶點(diǎn)，最終得到澤瀉湯調(diào)節(jié)NAFLD的核心靶點(diǎn)共27個(gè)，見圖1。

2.1.4 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

運(yùn)用 CytoScape 3.7.2 構(gòu)建“澤瀉湯-NAFLD 靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖（圖2），包括46個(gè)節(jié)點(diǎn)、173條邊，其中核心靶點(diǎn)27 個(gè)、活性成分節(jié)點(diǎn)12 個(gè)（澤瀉9 個(gè)、白術(shù)3 個(gè)）。澤瀉醇B（alisol B）為澤瀉湯治療NAFLD的主要活性成分（degree =13 ， BC=0.05 ， CC=0.50 ， NC=8.93 ），其次為澤瀉醇 C（alisol C）、一亞油酸甘油酯（1-monolinolein）、澤瀉醇 B 單乙酸酯（alisol B monoacetate）；MDM2 為澤瀉 湯 治 療 NAFLD 的 最 主 要 靶 點(diǎn)（degree =14 ， BC= 0.15， CC=0.56 ， NC=9.71 ），其次為 MAPK1、PIK3CB、PRKCQ、MAPK14。

2.1.5 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)”富集分析

通過Metascape平臺(tái)對(duì)27個(gè)候選靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能和KEGG 通路富集分析。GO 功能富集分析結(jié)果顯示，共有317個(gè)GO術(shù)語顯示富集，其中分子功能75個(gè)、生物過程655個(gè)、細(xì)胞組成33個(gè)。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，有146條信號(hào)通路，主要涉及內(nèi)分泌抵抗、胰島素抵抗、輔助性 T 細(xì)胞 17（T helper cell 17，Th17）細(xì)胞分化等。對(duì)獲取的條目進(jìn)行聚類并繪制氣泡圖，見圖3。

2.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

2.2.1 不同給藥濃度對(duì)HepG2細(xì)胞相對(duì)活力的影響

最佳藥物濃度篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著給藥濃度的升高，不同組別細(xì)胞相對(duì)活力均降低，尤其從 0.2mg/mL 開始，與空白對(duì)照組比較，各給藥組的細(xì)胞相對(duì)活力降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ ?Plt;0.05） ）。這表明各給藥組濃度 ?0.2mg/mL 時(shí)，對(duì)細(xì)胞沒有毒性，因此，以濃度0.2mg/mL 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見圖4。

2.2.2 油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂質(zhì)堆積模型的建立

細(xì)胞活力測(cè)定結(jié)果顯示，與空白對(duì)照比較，油酸鈉在 600μmol/L 以下時(shí)無細(xì)胞毒性（ ?Pgt;0.05） ），見圖5。油紅O 染色顯示，給予油酸鈉 300μmol/L ，細(xì)胞吸光度值顯著高于空白對(duì)照 0.188±0.001 vs. 0.111±0.001，Plt; 0.05）。顯微鏡下觀察結(jié)果（圖6）顯示，空白對(duì)照組HepG2細(xì)胞邊緣無明顯脂質(zhì)著色，油酸鈉組細(xì)胞著色明顯，可見脂滴環(huán)繞細(xì)胞核周圍，表明脂質(zhì)堆積模型誘導(dǎo)成功。

圖1 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)”PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖2 “澤瀉湯-NAFLD靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

注：六邊形節(jié)點(diǎn)代表不同藥物活性成分，菱形為靶點(diǎn)，綠色箭頭為通路；節(jié)點(diǎn)面積越大、顏色越深代表該節(jié)點(diǎn)度數(shù)越高、越重要。

2.2.3 傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒對(duì)油酸鈉處理的HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積的影響

與模型組比，除澤瀉配方顆粒組、白術(shù)配方顆粒組外，各給藥組吸光度值均顯著降低（ （Plt;0.01 ）。澤瀉湯配方顆粒組吸光度值高于澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Pgt;0.05） ）；澤瀉傳統(tǒng)湯劑組吸光度值高于澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Pgt;0.05） ）；澤瀉配方顆粒組、白術(shù)配方顆粒組吸光度值均顯著高于澤瀉湯配方顆粒組（ Plt;0.01. ）；白術(shù)傳統(tǒng)湯劑組吸光度值顯著高于澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑組（ （Plt;0.01） ）；澤瀉配方顆粒組吸光度值顯著高于澤瀉傳統(tǒng)湯劑組（ （Plt;0.01） ）；白術(shù)配方顆粒組吸光度值顯著高于白術(shù)傳統(tǒng)湯劑組（ Plt; 0.01）。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 降脂活性作用機(jī)制及整體藥效分析

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究顯示，澤瀉湯治療NAFLD 的關(guān)鍵活性成分包括 alisol B、alisol C、1-monolinolein、alisol Bmonoacetate 等 ，核 心 靶 點(diǎn) 包 括 MDM2、MAPK1、PIK3CB、PRKCQ、MAPK14 等，核心信號(hào)通路包括內(nèi)分泌抵抗、胰島素抵抗、Th17 細(xì)胞分化等。HepG2 細(xì)胞目前主要用于脂質(zhì)代謝研究，油酸可誘導(dǎo)其脂質(zhì)堆積，為NAFLD 細(xì)胞模型研究中常用的模型之一[30―31]。本研究給予油酸鈉 300μmol/L 干預(yù)HepG2細(xì)胞，可觀察到細(xì)胞核周圍脂滴形態(tài)學(xué)變化，且吸光度值顯著高于空白對(duì)照（ ?lt;0.05 ），表示造模成功。此外，給予澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑、配方顆粒，均可降低油酸誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞的脂質(zhì)堆積，顯示出降脂效果。

3.2 傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒藥效對(duì)比

澤瀉湯、澤瀉、白術(shù)傳統(tǒng)湯劑與澤瀉湯、澤瀉、白術(shù) 配方顆粒均可抑制HepG2細(xì)胞脂質(zhì)堆積，其中澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑抑制效果優(yōu)于澤瀉湯配方顆粒，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ （Pgt;0.05） ）；澤瀉傳統(tǒng)湯劑抑制效果顯著優(yōu)于澤瀉配方顆粒（ ?lt;0.01 ）；白術(shù)傳統(tǒng)湯劑抑制效果顯著優(yōu)于白術(shù)配方顆粒 ?Plt;0.01 ）。

圖4 不同給藥濃度對(duì)HepG2 細(xì)胞相對(duì)活力的影響

a：與空白對(duì)照組比較， Plt;0.05 ；b：與空白對(duì)照組比較， Pgt;0.05

圖5 不同濃度油酸鈉對(duì)HepG2 細(xì)胞相對(duì)活力的影響

圖6 HepG2細(xì)胞油紅O染色顯微圖（標(biāo)盡： 500μm ）

表2 各組不同批次藥材HepG2 細(xì)胞吸光度值及平均值比較

a：與模型組比較， Plt;0.01 ；b：與澤瀉湯配方顆粒組比較， Plt;0.01 ；c：與澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑組比較， Plt;0.01 ；d：與澤瀉傳統(tǒng)湯劑組比較， Plt; 0.01；e：與白術(shù)傳統(tǒng)湯劑組比較， Plt;0.01 ；f：平均值以x ±s 表示。

分析原因，配方顆粒是由單味中藥飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒而成[32]，存在量值傳遞過程[33]，有效成分轉(zhuǎn)移率未必達(dá)到傳統(tǒng)湯劑的狀態(tài)；此外，配方顆粒存在吸濕結(jié)塊[34]、顆粒均勻度低、細(xì)粉超標(biāo)等[35]制劑學(xué)缺陷，藥材的利用率受限，使得配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑存在差異。這提示中藥配方顆粒還需優(yōu)化輔料用量、制劑工藝，提高生物利用度，保證臨床療效。

3.3 復(fù)方與單味藥藥效對(duì)比

澤瀉湯傳統(tǒng)湯劑抑制HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積作用顯著優(yōu)于白術(shù)傳統(tǒng)湯劑（ $＼scriptstyle ＼overleftarrow { P } lt; 0 . 0 1 ＼$ ）；澤瀉湯配方顆粒抑制作用顯著優(yōu)于澤瀉配方顆粒和白術(shù)配方顆粒（ Plt; 0.01）。這表明澤瀉與白術(shù)配伍使用藥效更佳，與alisolB、alisol C、1-monolinolein 等多成分共同發(fā)揮降脂作用的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果相合。筆者推測(cè)澤瀉湯中澤瀉利水滲濕，主“攻”，而白術(shù)益氣健脾，主“補(bǔ)”[36]，因此，白術(shù)與澤瀉合用，既助澤瀉利水除飲、降低細(xì)胞脂肪累積，又補(bǔ)脾制水、增加細(xì)胞活力。

3.4 不同批次藥材藥效對(duì)比

研究結(jié)果顯示，不同批次澤瀉、白術(shù)飲片的細(xì)胞毒性、降脂活性存在差異，推測(cè)可能與飲片質(zhì)量、有效成分含量存在差異有關(guān)；不同廠家配方顆粒的細(xì)胞毒性、降脂活性也存在差異，推測(cè)可能與原料藥來源、生產(chǎn)加工工藝存在差異有關(guān)。這提示需進(jìn)一步加強(qiáng)中藥飲片、配方顆粒的質(zhì)量控制[37]，以保障藥材質(zhì)量的穩(wěn)定和均一。

綜上所述，澤瀉湯通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路降低HepG2細(xì)胞脂質(zhì)堆積，其傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒降脂效果略有差異。本研究結(jié)果為闡釋澤瀉湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和配方顆粒的質(zhì)量控制提供了依據(jù)，同時(shí)為探究其治療NAFLD作用機(jī)制提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] HAN S K，BAIK S K，KIM M Y. Non-alcoholic fatty liverdisease：definition and subtypes[J]. Clin Mol Hepatol，2023，29（Suppl.）：S5-S16.

[ 2 ] 范建高，徐小元，南月敏，等. 代謝相關(guān)（非酒精性）脂肪性肝病防治指南：2024 年版[J]. 實(shí)用肝臟病雜志，2024，27（4）：494-510.

[ 3 ] 丁劍波，李麗，李秀惠. 青少年學(xué)生血尿酸水平與非酒精性脂肪性肝病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系[J]. 肝臟，2025，30（1）：87-90.

[ 4 ] 尚敏，陳平，金志健，等. 非酒精性脂肪性肝炎防治新思路[J]. 肝臟，2024，29（10）：1289-1291.

[ 5 ] 李輝，安盟盟，張會(huì)，等. 司美格魯肽聯(lián)合非諾貝特治療2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病療效及安全性觀察[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志，2025，54（3）：378-383.

[ 6 ] HUANG T D，BEHARY J，ZEKRY A. Non-alcoholicfatty liver disease：a review of epidemiology，risk factors，diagnosis and management[J]. Intern Med J，2020，50（9）：1038-1047.

[ 7 ] 趙文霞，許二平，王憲波，等. 非酒精性脂肪性肝炎中醫(yī)診療指南[J]. 臨床肝膽病雜志，2023，39（5）：1041-1048.

[ 8 ] 張仲景.金匱要略[M].何任，何若蘋，整理.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：46.

[ 9 ] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].2020年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：239-240.

[10] WU J S，ZHANG F Q，RUAN H N，et al. Integrating net‐work pharmacology and RT-qPCR analysis to investigatethe mechanisms underlying Zexie decoction-mediatedtreatment of non-alcoholic fatty liver disease[J]. FrontPharmacol，2021，12：722016.

[11] 王雙雙，姜恒麗，劉燁，等. 經(jīng)典名方澤瀉湯的處方考證及歷史沿革分析[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2023，51（9）：91-96.

[12] SHI H，ZHENG Y T，ZHAO J M，et al. Zexie decoctionreduce glucose-dependent lipid accumulation and oxida‐tive stress in Caenorhabditis elegans[J]. Phytomedicine，2023，120：155036.

[13] ZHANG F Q，WU J S，RUAN H N，et al. Zexie decoctionalleviates non-alcoholic fatty liver disease in rats：thestudy of genes，lipids，and gut microbiotas[J]. BiochemBiophys Res Commun，2022，632：129-138.

[14] 李波，張朗赫，許夢(mèng)然，等. 朝鮮淫羊藿酸性多糖的理化特性及對(duì)HepG2細(xì)胞脂質(zhì)堆積的改善作用[J]. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2022，24（10）：3820-3827.

[15] 張貴明，倪向敏，崔涵強(qiáng)，等. 雌馬酚干預(yù)改善油酸鈉誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞脂肪變性[J]. 陸軍軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2023，45（3）：202-208.

[16] 李冠文，王輝敏，楊金梅，等. 馬齒莧多不飽和脂肪酸成分分析及對(duì)HepG2細(xì)胞脂質(zhì)堆積的影響[J]. 食品工業(yè)科技，2022，43（15）：352-358.

[17] 甘露珍，姜瓊，饒志威，等. 澤漆醇提取物抗氧化活性及對(duì)油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂質(zhì)堆積的影響[J]. 食品工業(yè)科技，2024，45（6）：330-336.

[18] 林欣欣，張鴻燕，吳偉銘，等. 澤瀉醇B 對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響實(shí)驗(yàn)研究[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2023，19（9）：35-39.

[19] 羅燕，和興萍，李雪，等. 幾種細(xì)胞脂肪變性模型的建立與比較分析[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2017，35（8）：2074-2077.

[20] RU J L，LI P，WANG J N，et al. TCMSP：a database ofsystems pharmacology for drug discovery from herbalmedicines[J]. J Cheminform，2014，6：13.

[21] PI?ERO J，RAMíREZ-ANGUITA J M，SAüCH-PITARCHJ，et al. The DisGeNET knowledge platform for diseasegenomics：2019 update[J]. Nucleic Acids Res，2020，48（D1）：D845-D855.

[22] PI?ERO J，BRAVO à，QUERALT-ROSINACH N，et al.DisGeNET：a comprehensive platform integrating infor‐mation on human disease-associated genes and variants

[23] PI?ERO J，QUERALT-ROSINACH N，BRAVO à，et al.DisGeNET：a discovery platform for the dynamical explo‐ration of human diseases and their genes[J]. Database（Ox‐ford），2015，2015：bav028.

[24] WANG Y X，ZHANG S，LI F C，et al. Therapeutic targetdatabase 2020：enriched resource for facilitating researchand early development of targeted therapeutics[J]. NucleicAcids Res，2020，48（D1）：D1031-D1041.

[25] WISHART D S，F(xiàn)EUNANG Y D，GUO A C，et al. Drug‐Bank 5.0：a major update to the DrugBank database for2018[J]. Nucleic Acids Res，2018，46（D1）：D1074-D1082.

[26] SZKLARCZYK D，GABLE A L，LYON D，et al.STRING v11：protein-protein association networks withincreased coverage，supporting functional discovery ingenome-wide experimental datasets[J]. Nucleic AcidsRes，2019，47（D1）：D607-D613.

[27] TRIPATHI S，POHL M O，ZHOU Y Y，et al. Meta- and or‐thogonal integration of influenza“OMICs”data defines arole for UBR4 in virus budding[J]. Cell Host Microbe，2015，18（6）：723-735.

[28] ZHOU Y Y，ZHOU B，PACHE L，et al. Metascape pro‐vides a biologist-oriented resource for the analysis ofsystems-level datasets[J]. Nat Commun，2019，10（1）：1523.

[29] 阿曼古麗·艾則孜，馬紅梅，蘭衛(wèi). 洋甘菊總黃酮對(duì)HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)沉積的改善作用研究[J]. 中國(guó)藥房，2022，33（11）：1306-1312.

[30] 董麗紅，張瑞芬，黃菲，等. 油酸誘導(dǎo)單純性肝脂肪變性細(xì)胞模型的建立及應(yīng)用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2017，33（11）：1622-1626.

[31] 盧曉臣，韓紅梅. 非酒精性脂肪性肝病體外模型的研究進(jìn)展[J]. 臨床肝膽病雜志，2022，38（1）：201-205.

[32] 鮑洋，田琳潔，張定堃，等. 中藥配方顆粒低制成比問題分析及解決思路研究[J]. 中藥材，2025，48（1）：253-260.

[33] 陳盛君，李松，過科家，等. 中藥配方顆粒國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)特點(diǎn)探討[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2025，31（10）：256-264.

[34] 鐘雨虹，惠玉玉，田文麗，等. 經(jīng)典名方中藥復(fù)方顆粒劑制備技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2024，43（8）：745-751.

[35] 王龍，高鑫，閆信豪，等. 中藥配方顆粒研發(fā)生產(chǎn)中若干關(guān)鍵問題研究進(jìn)展[J]. 中南藥學(xué)，2022，20（9）：2008-2014.

[36] 孫定人，張石革. 中成藥內(nèi)科疾病用藥：補(bǔ)益劑[J]. 中國(guó)藥房，2001，12（10）：58-61.

[37] 譚清立，李佳怡，林岱衡. 我國(guó)中藥配方顆粒的政策工具分析及優(yōu)化研究[J]. 中國(guó)藥房，2023，34（22）：2689-2694.