一種小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法

肖勛立，黃聰聰，武利雪，胡慧怡，何學(xué)珍，胡立業(yè)，喻理德*

(1.井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院 藥劑科，江西 吉安 343000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江西 南昌 330004)

肝臟作為人體重要的臟器，在整個(gè)物質(zhì)代謝過程中具有廣泛而多樣的功能，具有重要的研究價(jià)值。[1]肝臟的在體研究成本高，且容易受體內(nèi)復(fù)雜的環(huán)境影響，而原代肝細(xì)胞的體外模型既能較好的保留肝臟的特異性功能，還可有效地降低研究成本，具有良好的重復(fù)性。[2]目前小鼠原代肝細(xì)胞的分離方法有多種，其中最經(jīng)典常用的方法為Seglen 1976年建立的肝臟原位兩步灌流法。[3-4]但兩步原位灌流法使用、發(fā)展至今，依然存在多方面不足導(dǎo)致原代肝細(xì)胞分離重復(fù)性不高，細(xì)胞獲得率較低，如小鼠血管較細(xì)針管容易扎破，導(dǎo)致灌流失??；灌流速度的把握不當(dāng)容易造成肝細(xì)胞的損傷；灌流過程中的操作不當(dāng)容易引起細(xì)胞污染等，這些因素使得小鼠原代肝細(xì)胞無法高效、穩(wěn)定的獲得。[5-7]除了小鼠原代肝細(xì)胞的分離問題，更困難的是其體外培養(yǎng)，原代肝細(xì)胞分離在體外培養(yǎng)過程中會快速地喪失其正常表型和特異性功能，并且會自發(fā)地加速凋亡，發(fā)生去分化現(xiàn)象。[8-10]因此，建立一種高效、穩(wěn)定的小鼠原代肝細(xì)胞分離和培養(yǎng)方法具有重要的科研和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 材料實(shí)驗(yàn)動物

6-8周齡的雄性C57BL/6小鼠，體重約25 g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，普通飼料飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前24 h內(nèi)禁食。實(shí)驗(yàn)主要試劑和儀器：胎牛血清(Gibico)，DMEM(Gibico)，膠……