超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126檢測在腎癌診斷中的價值

李曉艷,呂亞玲

1.陜西省延安市洛川縣醫院超聲科,陜西延安 727400;2.陜西省西安市第三人民醫院泌尿外科,陜西西安 710000

腎癌屬于泌尿系統惡性腫瘤,早期癥狀隱匿,患者出現典型癥狀時,病情往往已進展,錯失最佳治療時機[1-2]。及早診斷腎癌對制訂治療方案、改善患者生存情況具有重要的臨床價值。超聲造影將造影劑經靜脈團注,從而提高靶區域血流信號,有利于觀察病灶動態增強特征,準確地定性診斷,是臨床診斷腎癌常用的影像學手段[3]。近年來有研究認為,超聲造影在惡性腫瘤早期的診斷效能未能達到預期[4]。微小RNA(miR)能特異性結合mRNA,影響mRNA翻譯過程,發揮生物學作用,與惡性腫瘤發生、發展及患者預后有關[5]?，F階段臨床關于腎癌診斷的研究較多[6-7],但關于超聲造影聯合血清miR對腎癌診斷效能的研究較少?；诖?本研究分析了超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126檢測在腎癌診斷中的效能,以期為腎癌診斷提供新思路,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取陜西省延安市洛川縣醫院(以下簡稱本院)2019年2月至2022年2月86例腎癌患者作為腎癌組。(1)納入標準:①符合《腎癌臨床診斷與治療:從指南到臨床》[8]中的診斷標準,經病理學檢查確診;②首次確診;③近期未接受相關治療;④均接受超聲造影檢查。(2)排除標準:①不符合超聲造影檢查條件;②合并其他類型惡性腫瘤;③存在傳染性疾病、甲狀腺功能異常;④合并感染性疾病、免疫系統疾病或其他慢性疾病;⑤存在肝臟、心臟等重要臟器嚴重損傷;⑥存在精神疾病、凝血及認知功能嚴重損傷;⑦臨床及超聲造影檢查資料不全。另選取同期24例腎錯構瘤患者作為良性組。(1)納入標準:①均接受超聲造影檢查,并經病理學檢查確診;②近期未接受相關治療。(2)排除標準:①不符合超聲造影檢查條件;②合并惡性腫瘤;③存在傳染性疾病、甲狀腺功能異常;④合并感染性疾病、免疫系統疾病或其他慢性疾病;⑤存在肝臟、心臟等重要臟器嚴重損傷;⑥存在精神疾病、凝血及認知功能嚴重損傷;⑦臨床及超聲造影檢查資料不全。腎癌組中男51例,女35例;年齡35～73歲,平均(55.82±8.06)歲;體質量指數18.62～26.84 kg/m2,平均(23.01±1.37)kg/m2。良性組中男15例,女9例;年齡33～70歲,平均(54.63±7.65)歲;體質量指數18.37～26.09 kg/m2,平均(22.75±1.53)kg/m2。兩組一般資料比較,差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。所有研究對象均簽署知情同意書,本研究經過本院醫學倫理委員會審核批準(倫理批號:20180321)。

1.2方法

1.2.1超聲造影檢查 儀器選擇LOGIC E9型超聲診斷儀(美國GE公司),探頭頻率5 MHz,時間分辨率每秒13幀,動態范圍65～70 dB,機械指數為0.1,造影劑為SonoVue。囑患者取仰臥位,保持平穩、緩慢呼吸,減少劇烈呼吸運動對超聲檢查的不良影響。常規超聲,觀察腫塊的大小、邊界、內部回聲、有無彩色血流信號、血管位置等,任何環繞腫塊或腫塊內出現的彩色血流信號均判斷為腫塊血管,選擇病灶最佳切面,使腫塊處于圖像中部,將探頭固定后采用造影模式,1.2 mL造影劑經肘靜脈團注后,注射5 mL 0.9%氯化鈉溶液,觀察超聲造影模式下造影劑連續灌注的過程。采用配套軟件對超聲造影結果進行定量分析,選擇病灶感興趣區(注意避開大血管和壞死區域),通過軟件獲取造影時間-強度曲線,得到峰值強度(PI)、達峰時間(TTP)和增強時間(ET)等超聲造影參數。

1.2.2病理檢測 手術切除腫塊后進行病理學檢查,4%中性甲醛溶液浸泡固定后進行常規脫水,并以石蠟包埋,隨后固定于切面機上進行連續橫斷面切片,每張切片厚5 μm,每張切片上采用2個組織面進行HE染色。切片經二甲苯脫蠟,采用100%、95%、80%乙醇梯度水洗,隨后采用蘇木素染色液浸染10 min,水洗后再采用1%鹽酸乙醇水洗,經飽和碳酸鋰浸泡1～2 min后水洗,伊紅染色3～4 min后以80%、95%、100%乙醇梯度脫水,二甲苯透明2次后中性樹膠封片,光鏡下采集圖像。病理分類參照2004年世界衛生組織(WHO)腎臟腫瘤組織學分類方法。

1.2.3miR-29a、miR-126檢測 所有患者均于入院當日采集空腹靜脈血3 mL,離心處理(轉速3 000 r/min、半徑10 cm、時間10 min)后,取上清液待測。血清總RNA通過RNA抽提試劑盒提取,甲醛變性電泳檢測其完整性,互補DNA經反轉錄試劑盒合成。血清miR-29a、miR-126通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測:反應體系為DNA模板2.0 μL、引物1.0 μL、SYBR Green Ⅰ Master 10.0 μL和RNase-Free H2O 8.5 μL;反應條件為95 ℃ 15 s、94 ℃ 15 s、55 ℃ 30 s、75 ℃ 30 s,共45個循環。miR-29a上游引物序列:5′-GCGGCGGTAGCACCATCTGAAATC-3′,下游引物序列:5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′;miR-126上游引物序列:5′-GTCTCGTQACCGTGAGTAAT-3′,下游引物序列:5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。內參選擇U6,miR-29a、miR-126水平通過2—ΔΔCt計算。

2 結 果

2.1兩組超聲造影參數比較 腎癌組PI高于良性組,TTP、ET均短于良性組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組超聲造影參數比較

2.2兩組血清miR-29a、miR-126比較 腎癌組血清miR-29a相對表達量高于良性組,miR-126相對表達量低于良性組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清miR-29a、miR-126相對表達量比較

2.3超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126對腎癌的診斷價值 ROC曲線分析結果顯示,PI、TTP、ET、血清miR-29a及miR-126聯合檢測診斷腎癌的曲線下面積(AUC)為0.931,大于5項指標單獨檢測的AUC(P<0.05)。見圖1、表3。

圖1 超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126診斷腎癌的ROC曲線

表3 超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126對腎癌的診斷價值

2.4超聲造影參數與血清miR-29a、miR-126的相關性 腎癌患者超聲造影參數PI與血清miR-29a相對表達量呈正相關(r=0.701,P<0.05),與miR-126相對表達量呈負相關(r=—0.735,P<0.05);TTP、ET均與miR-29a相對表達量呈負相關(r=—0.662、—0.635,P<0.05),與miR-126相對表達量呈正相關(r=0.682、0.647,P<0.05)。

3 討 論

腎癌是多見于中老年群體的腎實質惡性腫瘤,在環境污染、飲食結構變化等因素影響下,患病人數不斷增加且年齡趨于年輕化[9]。腎癌患者若救治不及時會對生命安全造成嚴重威脅。因此,探尋安全、有效的方法及早診斷腎癌對控制病情進展、延長生存周期尤為重要。近年來研究發現,影像學聯合血清學檢查能有效提高腎癌診斷效能[10]。

超聲造影可清楚顯示腫瘤內部及附近血液供應情況,反映腫瘤不同區域灌注及消退情況,對微小血管也有良好的顯示效果,能彌補常規超聲的不足。造影劑可以強化血流多普勒信號,避免血管直徑對血流顯示的影響,有利于判斷腫瘤血管狀況,從而提高診斷準確度[11]。臨床研究發現,不同于良性病變,惡性腫瘤患者病灶內血供豐富,TTP、ET等超聲造影參數更低,而PI更高[12]。本研究中腎癌組PI高于良性組,TTP、ET均低于良性組,與上述研究結果相符,表明腎癌患者超聲造影參數存在變化,可為臨床診斷腎癌提供參考。分析原因為PI可以反映血管生成密度,ET可以反映病灶內出現造影劑的時間,TTP可以反映病灶內造影劑達到最大量的時間[4]。腫瘤的形成與血管增生存在密切聯系,相比于良性腫瘤,惡性腫瘤血管增生較快,血管密度相對較高,血管直徑更大,病灶內新生血管形成較多且排列紊亂,故注射造影劑后PI較高。此外,惡性腫瘤發生及發展對血氧供應的需求較高,易引起新生血管形成,導致血流灌注明顯增加,且新生血管扭曲有利于血管袢及血管網形成,使造影劑到達腫瘤時間縮短,病灶局部血管內的微泡流速加快,進一步造成TTP縮短,影像學以造影劑富集、“快進快出”為主要表現。

miR是一類具有組織特異性的非編碼RNA,能影響細胞分化、生長及凋亡等生命活動過程,在腫瘤發生中發揮著重要作用,可作為早期診斷及預后預測的參考指標。近年來研究發現,miR-29a、miR-126均與惡性腫瘤發生、發展有關[13-14]。既往研究顯示,miR-29a在不同腫瘤細胞中存在異常表達,具有抑癌或促癌基因雙重作用[15]。miR-29a在肝癌中呈高表達,過表達miR-29a能促進HepG2細胞遷移,從而加重肝癌患者病情進展[16]。miR-29a在胃癌中呈低表達,能使透明質酸合成酶3表達下調,進而對胃癌細胞轉移發揮抑制作用[17]。國內研究發現,miR-29a在腎癌發病中起著促癌基因作用,過表達miR-29a能促進腎癌細胞增殖及侵襲[18]。miR-126能通過調控靶基因,調控細胞分化及增殖,從而影響腫瘤發生及轉移。有研究結果顯示,miR-126在腫瘤細胞中起著抑癌基因作用,miR-126低表達可縮短惡性腫瘤患者復發的中位時間[19]。miR-126對PI3K、sprouty相關蛋白等血管內皮生長因子通路有抑制作用,能負調控新生血管形成[20]。本研究結果顯示,腎癌組血清miR-29a相對表達量高于良性組,miR-126相對表達量低于良性組,提示miR-29a在腎癌中起著促癌基因作用,而miR-126起著抑癌基因作用,與上述研究結果相符。ROC曲線分析結果顯示,PI、TTP、ET、血清miR-29a及miR-126聯合檢測診斷腎癌的AUC高于5項指標單獨檢測,表明超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126檢測能明顯提高腎癌的診斷效能。分析原因為超聲造影、血清miR-29a及miR-126診斷腎癌的途徑不同,聯合檢測可實現優勢互補,為診斷提供有效信息,提高準確度。

綜上所述,腎癌患者血清miR-29a水平升高、miR-126水平降低,超聲造影聯合血清miR-29a、miR-126對腎癌具有較高的診斷效能,可為腎癌的臨床診療提供參考。