復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)變化及其臨床預(yù)測(cè)價(jià)值

陳艷青,王海清,呂霞明,燕紀(jì)林,李玉斌

(張家口市第一醫(yī)院,1.婦產(chǎn)科;2.病理科,河北 張家口 075000)

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指連續(xù)3次及以上自然流產(chǎn),病因較復(fù)雜,患者可表現(xiàn)出陰道出血、腹痛等癥狀,治療相對(duì)棘手[1]。部分患者有明確病因,包括染色體異常、生殖道感染等,但多數(shù)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者發(fā)生流產(chǎn)的病因并不完全清楚[2]。因此,積極探索復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)影響因素具有重要意義,可為干預(yù)方案的選取奠定基礎(chǔ)。妊娠過(guò)程是屬于一種半同種移植過(guò)程,胎盤(pán)形成時(shí),若母體免疫平衡機(jī)制失衡,自身免疫系統(tǒng)攻擊絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞,可嚴(yán)重影響胎盤(pán)的供血和供養(yǎng),增加復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)[3]。2,3-雙加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)與自身免疫性疾病發(fā)生密切相關(guān),CD56、CD163表達(dá)于人體各類(lèi)免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜上,分析子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)情況,對(duì)進(jìn)一步闡明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病機(jī)制至關(guān)重要,但目前其預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的臨床價(jià)值尚未明確。本研究旨在分析復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)情況及其預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年3月至2022年3月張家口市第一醫(yī)院收治的82例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者為研究對(duì)象并設(shè)為研究組;選取95例人工流產(chǎn)終止妊娠的健康孕婦為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[4]中診斷標(biāo)準(zhǔn),有3次及以上的自然流產(chǎn)史者;(2)月經(jīng)周期規(guī)律者;(3)肝腎功能正常者;(4)造血功能及凝血功能正常者;(5)配偶精液正常者;(6)臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)1年內(nèi)放置過(guò)宮內(nèi)節(jié)育器者;(2)合并免疫功能障礙(如艾滋病、自身免疫性疾病)者;(3)子宮發(fā)育畸形者;(4)合并惡性腫瘤者;(5)存在染色體異常者;(6)生殖道感染者等。本研究獲張家口市第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

采用子宮內(nèi)膜刮器收集兩組子宮內(nèi)膜組織,使用聚甲醛室溫固定(濃度4%),固定時(shí)間12 h,隨后以磷酸鹽緩沖鹽水洗滌,48 h內(nèi)完成石蠟包埋并完成樣本切片(4 μm),指標(biāo)檢測(cè)送金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行。免疫組化染色的一抗準(zhǔn)備：IDO抗體(ce11signaling technology,86630,稀釋比1∶300);CD56抗體(gene tech,GT200529,稀釋比1∶400);CD163抗體(novocastra,NCL-L-CD163,稀釋比1∶200)。將切片置于60 ℃恒溫烤箱烤片0.5～1 h,待組織塊與載玻片完全貼合并且緊密粘附后取出。石蠟切片脫蠟操作,浸泡5 min二甲苯脫蠟,共脫蠟2次,隨后利用梯度酒精(100%、95%、80%及70%)浸泡,每次浸泡2 min,共浸泡2次,完成后利用自來(lái)水沖洗l min。局部滴加適量的第一抗體,在濕盒中且室溫條件下進(jìn)行2 h孵育操作,磷酸鹽緩沖鹽水浸泡3 min,總共浸泡4次。隨后進(jìn)行3,3-二氨基聯(lián)苯胺顯色,達(dá)到良好的肉眼觀察效果后,終止顯色。最后利用蘇木素進(jìn)行l(wèi) min快速染色操作,并于鹽酸酒精中分化1 s,于自來(lái)水中進(jìn)行20 min藍(lán)化操作,并利用中性樹(shù)脂封片。隨后選取觀察視野200倍大小(5個(gè)視野)使用病理成像系統(tǒng)完成樣本中IDO、CD56及CD163表達(dá)水平進(jìn)行陽(yáng)性評(píng)級(jí)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 臨床資料 收集兩組臨床資料,包括年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、是否吸煙或被動(dòng)吸煙、是否飲酒、子宮位置(前傾前屈位、水平位、后傾后屈位)、是否合并高血壓、是否作息規(guī)律。

1.3.2 兩組對(duì)象子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)情況 根據(jù)切片中細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例,分為陽(yáng)性(存在局部或彌漫性細(xì)胞染色)及陰性(未發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞染色或僅存在微弱染色),分別計(jì)算IDO陽(yáng)性率、CD56+、CD163+細(xì)胞百分率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)

研究組IDO陰性率、CD56+細(xì)胞百分率均高于對(duì)照組(P<0.05);兩組患者子宮內(nèi)膜CD163+細(xì)胞百分率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)情況

2.2 兩組患者臨床資料比較

研究組吸煙或被動(dòng)吸煙、作息不規(guī)律比例均高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者臨床資料比較

2.3 影響復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的多因素分析

將單因素分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量,復(fù)發(fā)性流產(chǎn)作為因變量,對(duì)其進(jìn)行賦值。見(jiàn)表3。

表3 影響復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的多因素分析

多因素Logistic分析顯示,吸煙或被動(dòng)吸煙、作息不規(guī)律、IDO陰性、CD56+細(xì)胞百分率升高均為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 影響復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的多因素分析

2.4 子宮內(nèi)膜IDO、CD56單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值

將復(fù)發(fā)性流產(chǎn)納入陽(yáng)性,健康人工流產(chǎn)終止妊娠納入陰性,繪制ROC曲線分析IDO、CD56單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的曲線下面積(AUC)為0.810、0.698、0.878,聯(lián)合檢測(cè)最高。見(jiàn)圖1及表5。

表5 子宮內(nèi)膜IDO、CD56單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)容易增加患者身心負(fù)擔(dān)及家庭、社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。胚胎屬于同種異體移植,隨著生殖免疫學(xué)的發(fā)展,人們意識(shí)到母體對(duì)胚胎的免疫耐受是其存在及發(fā)育的必備條件,如母體對(duì)胚胎的免疫耐受降低,胚胎流產(chǎn)概率將大幅增高[5-7]。

本研究發(fā)現(xiàn),多因素Logistic分析顯示,吸煙或被動(dòng)吸煙、作息不規(guī)律為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素。分析其原因?yàn)?香煙是室內(nèi)細(xì)顆粒物最主要的來(lái)源,它能較長(zhǎng)時(shí)間懸浮于空氣中,易附帶尼古丁、氨、一氧化碳、氮氧化物、二噁英、煙塵等有毒、有害物質(zhì),吸煙或被動(dòng)吸煙,對(duì)人體健康影響較大,可增加胎盤(pán)缺血缺氧,誘導(dǎo)流產(chǎn)的發(fā)生[8-9]。因此,臨床上應(yīng)指導(dǎo)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)產(chǎn)婦禁煙,并在生活中遠(yuǎn)離二手煙[10]。不良生活習(xí)慣如作息不規(guī)律,一方面可降低孕婦自身免疫力,使其容易遭受細(xì)菌和病毒的入侵,增加胎兒受到感染、異常免疫損傷的風(fēng)險(xiǎn)[11-12];另一方面可造成血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定,增加胎兒細(xì)胞損傷,使細(xì)胞發(fā)育停止,影響其生長(zhǎng)發(fā)育,從而引發(fā)流產(chǎn)[13]。因此,臨床上應(yīng)指導(dǎo)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦規(guī)律休息,促進(jìn)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育,避免流產(chǎn)。

胚胎作為攜帶父系抗原的同種半異體移植物可能受到母體排斥,母胎界面可以維持母胎免疫耐受,為胚胎發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)支持,母胎界面微環(huán)境遭到破壞時(shí),其免疫應(yīng)答細(xì)胞及細(xì)胞因子異常變化,會(huì)導(dǎo)致免疫耐受的失衡,難以維持胎兒正常的生長(zhǎng)發(fā)育,導(dǎo)致流產(chǎn)[14-15]。IDO可催化色氨酸轉(zhuǎn)化為犬尿氨酸,而色氨酸是機(jī)體免疫力增加的重要氨基酸,可促進(jìn)抗體形成與抗體功能增強(qiáng),IDO在子宮內(nèi)膜陽(yáng)性表達(dá),可促進(jìn)母體免疫耐受,維持胎兒發(fā)育,避免流產(chǎn)[16-17]。CD56表達(dá)于人體各類(lèi)免疫細(xì)胞膜上,主要為自然殺傷細(xì)胞以及小部分活化的T淋巴細(xì)胞,其表達(dá)水平升高提示母胎子宮內(nèi)膜的免疫表達(dá)狀況異常,自然殺傷細(xì)胞增加,可通過(guò)細(xì)胞胞漿顆粒向母體子宮內(nèi)膜上其余細(xì)胞釋放大量穿孔素,產(chǎn)生細(xì)胞毒性,母體對(duì)免疫耐受不足[18]。本研究中,研究組IDO陰性率、CD56+細(xì)胞百分率高于對(duì)照組,多因素Logistic分析顯示,IDO陰性、CD56+細(xì)胞百分率升高為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素,繪制ROC曲線分析IDO、CD56單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的AUC為0.810、0.698、0.878,聯(lián)合檢測(cè)最高,提示IDO、CD56可能參與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生。Cheng等[19]進(jìn)行動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn),IDO基因缺陷可增加復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),IDO在母體胎盤(pán)部位表達(dá)水平高,可維持妊娠母體中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制處于動(dòng)態(tài)平衡,從抑制的角度參與免疫,起到抑制母體T細(xì)胞免疫反應(yīng)的作用,提示IDO低表達(dá)或不表達(dá)為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的重要影響因素。Lapides等[20]研究指出CD56表達(dá)增加,可增加母胎免疫耐受不足風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致妊娠失敗,與本研究結(jié)果相似。

綜上,復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜IDO陽(yáng)性表達(dá)更低,CD56表達(dá)情況更高,但CD163表達(dá)水平變化不明顯,吸煙或被動(dòng)吸煙、作息不規(guī)律、IDO陰性、CD56+細(xì)胞百分率升高為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素,IDO、CD56聯(lián)合檢測(cè)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)預(yù)測(cè)價(jià)值更高。但本研究為樣本量有限的單中心研究,復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者子宮內(nèi)膜IDO、CD56、CD163表達(dá)情況仍有待進(jìn)一步行大樣本量、多中心研究予以驗(yàn)證。