戊丙酸類藥物氣相色譜-質譜檢驗方法分析

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所（463000）薛毅博 李啟彬 葉英劍 劉園園

近年來，通過對戊丙酸類藥物研究的逐步深入，創造出了諸多檢驗的方法，最普遍的就是熒光光度法、化學顯色法、紅外吸收法和氣相色譜等[1]。通過將戊丙酸類藥物和酸性物質結合發生化學反應，能夠很快速的形成出新藥物，即丙戊酸，所以對檢材中的戊丙酸進行專業檢測在操作上相對方便，易操作，因為戊丙酸類藥物沒有氮元素的存在，且本質上屬于一種鎮靜止痛藥物，其電負性很低，如果使用色譜-氮磷檢測器和氣相色譜-電子捕獲檢測器進行檢測，由于這兩種檢測方法自身具有的局限性，導致檢測準確率容易出現較大誤差，就容易出現誤檢和漏檢的情況產生[2]。如果使用氣相色譜-質譜聯用儀進行檢測，其就能一定程度彌補其他檢測方法的局限性，通過產生更高的靈敏度，降低檢測限，就可以很大程度提高檢測的準確率，降低漏檢和誤檢的概率，這種方法在對諸多不同生物檢材的戊丙酸檢測中都能起到顯著作用。此檢測方法因為構成的不同，其分離效率更高，質譜靈敏度也要略勝一籌。將其用于戊丙酸類藥物中毒事件的檢測過程中，能夠起到更加有效的作用[3]。

1 儀器和試劑

1.1 試劑和使用物質 對照品：戊丙酸、標準用品由專業機構提供。試劑：乙醇、三氯甲烷、無水硫酸鈉、硝酸。

1.2 儀器和設備 安捷倫7890A-5975C氣相色譜質譜聯用儀（GC/MS）、ThermoTDZ5高速離心機、振蕩器。

2 操作步驟及實驗過程

2.1 配置溶液 配置出濃度為0.2mg/mL的戊丙酸標準溶液乙醇工作液，進行冷凍儲存，其有效期大概為180d；配置3ug/ml的戊丙酸標準乙醇溶液來進行對比質量控制，常溫保存，有限期限為120d；配置5ug/ml、15ug/ml、30ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的戊丙酸乙醇標準溶液，當作標準曲線工作液。

2.2 檢材處理 對每種檢查材料進行取用，都為3克，將其分別注入2mol/L的硝酸溶液中，將其酸堿性進行微調，搖晃3min及以上，然后注入三氯甲烷10ml，使用超聲波進行萃取15min，搖晃15min，再加入干性硫酸鈉5mg，在20000r/min的高速離心機中進行離心15min，反復提取數次。

3 檢驗和結果

3.1 檢驗 分別以0.2mg/ml的戊丙酸標準的檢材進行液體取用，空白添加提取液以及空白液供氣質聯用儀進行檢驗，每次進樣2ul，分別進行3次。

3.2 結果

3.2.1 線性關系表現 通過對戊丙酸儲備液的準確進行配制，其濃度為5ug/ml、15ug/ml、30ug/ml、50ug/ml、100ug/ml，分別對其進行評測。將峰面積（y）當作縱坐標，以濃度（x，ug/ml）作為橫坐標進行線性回顧方程設定，回歸方程為：y=3.633x-3.153；r2=0.89821，通過對結果進行分析討論可以發現，戊丙酸在濃度5～600ug/ml的范圍內峰面積和濃度呈線性關系，檢測出的濃度最低值為5ug/ml。

3.2.2 進行回收的概率和精密度實驗 取用空白人血共3ml，將其和一定劑量的戊丙酸進行融合，制備成的戊丙酸濃度為400ug/ml和600ug/ml的成品，再使用相同步驟和方法進行供氣質聯檢驗方法進行處理和檢驗，通過對兩種不同濃度進行分析，戊丙酸的回收概率達到了76.3%和78.4%。

3.2.3 結果 通過對檢材進行準確的檢查并提取出一定量的液體進行檢驗，發現檢材提取出的液體都檢查出了和0.2mg/ml戊丙酸提取液體保存時間達到一致的色譜峰，其中檢材提取液保存的時間為3.5～5.4min，戊丙酸標準液體保存的時間為3.2～6.5min，而且質譜特征離子碎片和相對豐度都比與戊丙酸標準液一致，空白對照樣品沒有干擾，陽性結果準確性高。

4 討論及應用案例

4.1 關于色譜柱的選取 戊丙酸的結構較為特殊，其中含有一定量的-COOH這一類極性較大的物質，選取弱極性柱或者中性柱進行物質分離帶來的檢測準確率和效果也略勝一籌。此次研究對DP-1MS、HP-5MS、HP-INNOWAX（ms）和XO-17MS四種差異比較明顯的色譜柱進行了檢驗，通過對其結果的觀察分析可以發現，HP-5MS和HP-INNOWAX（ms）兩種柱子峰形要更好，沒有拖尾狀況的產生，而且進行分離也更加方便快捷，效果更好。

4.2 如何選擇去乳化劑 在對需要用于檢驗的生物檢材的處理過程中，進行液體提取的話，其容易出現一定程度的乳化現場，尤其是進行血液提取的時候，乳化現象更是明顯，所以要想進一步提高回收率，就要先做好消除乳化現象這一步驟。此次研究在對檢材消除乳化的過程中，選取了無水硫酸鈉作為主要去乳劑進行干預，得到的效果較好，不僅能夠顯著達到消除乳化的效果，還不會造成過度污染。

4.3 具體案例 2018年6月，XX省XX縣公安局接到群眾報案稱，某女子在買菜回家的路上突發身體不適，在撥打120急救電話后，送醫搶救無效后死亡。經過專業法醫進行解剖查驗發現，這名女子死亡的原因是呼吸系統突發狀況，出現呼吸衰竭癥狀，可以排除機械性窒息和疾病導致窒息死亡。通過對常規農藥進行檢測和化驗，均呈陰性，在對常見鎮靜止痛劑進行查驗中，發現其中存在戊丙酸成分。經過核實，這名女子沒有癲癇病病史，相關調查人員就死者關系人進行了調查，最終發現其中一個與其有感情糾紛且有癲癇疾病病史的嫌疑人，經查，嫌疑人為該女子的情夫，其出現感情糾紛后，為了教訓死者，在死者的食物中添加了大量戊丙酸鈉，最終導致其死亡。