不同濃度含硒水溶肥對黑木耳富硒效果的影響

摘" "要" "在拌料中加入不同濃度含硒水溶肥培育黑木耳，利用高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜（HPLC-ICP-MS）聯用技術測定黑木耳中的甲基硒代半胱氨酸SeMeCyS、硒代蛋氨酸SeMet、亞硒酸根SeO32-以及硒酸根SeO42-，在1～100 μg/L范圍內，線性關系良好，均大于0.999 3， 4種硒形態達到完全分離。方法檢出限分別為甲基硒代半胱氨酸4.6 μg/L，硒代蛋氨酸3.5 μg/L，亞硒酸2.6 μg/L，硒酸3.6 μg/L，不同硒含量水溶肥的添加，對木耳中硒的形態轉化具有不同程度影響，采用700倍稀釋液，木耳中SeMeCyS和SeMet含量最高。

關鍵詞" "富硒；黑木耳；形態分析

硒是人體所必需的微量元素，是谷胱甘肽過氧化酶的必要組分，若無硒則此酶沒有活力。硒也是一種特殊的營養元素，有研究表明，缺乏硒會引起克山病和大骨節病，硒還有抗腫瘤、提高免疫機能、抗氧化、延緩衰老等作用。但食用量過高會引起硒中毒，出現惡心、嘔吐，頭發脫落、指甲變形、煩躁、疲乏等癥狀。我國食品營養學會提出了成人補硒標準50～200 μg/d。

黑木耳是一種營養價值非常高的膠質菌類，具有食用和藥用價值。木耳具有很強的富集硒的能力，可以通過菌絲細胞將無機硒轉化并富集于子實體中，而人體所能吸收、利用的硒元素主要是有機硒的形態。本研究通過在木耳培養基拌料中加入不同濃度的水溶肥培育木耳，采用高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜法對所培植木耳中的硒形態進行分析，探討賦肥的濃度對硒不同形態的轉化產生的影響。

1" "材料與方法

1.1" "試驗材料" "黑木耳菌株；培養基原材料（木屑、鋸末、麥麩、豆粕、石灰）；微量元素水溶肥，硒含量gt;6 g/L。

1.2" "試驗設計" "木屑培養基（雜木屑+鋸末85%，麥麩+豆粕14%，石灰1%）拌料按配方稱取，含水量60%，攪拌均勻后裝袋，水溶肥分別稀釋500、600、700、800、1 000倍添加在拌料中。每組制作菌棒200袋，標注序號為1-1、1-2、1-3、1-4、1-5。以基質不添加水溶肥的菌棒200袋作為空白對照。

1.3" "試劑" "亞硒酸根溶液標準物質（GBW10032，以亞硒酸根計SeO32-：68.9 μg/g，擴展不確定度1.4 μg/g）、硒酸根溶液標準物質（GBW10033，以硒酸根SeO42-計：75.1 μg/g，擴展不確定度2.4 μg/g）、硒代蛋氨酸溶液標準物質（GBW10034，以硒代蛋氨酸計C5H11NO2Se：97.9 μg/g，擴展不確定度2.5 μg/g）、甲基硒代半胱氨酸溶液標準物質（GBW10088，以甲基-硒代半胱氨酸計C4H9NO2Se·HCl：96.6 μg/g，擴展不確定度2.6 μg/g），以上試劑均為中國計量科學研究院生產；硒元素標準溶液（1 000 mg/L，國家有色金屬研究院）；蛋白酶XIV[默克化工技術（上海）有限公司]；乙酸銨（上海達瑞精細化學品有限公司）；四丁基氫氧化銨（天津市科密歐化學試劑有限公司）；甲醇（國藥集團化學試劑有限公司）；超純水Milli-Q（電阻率18.0 MΩ·cm）。

1.4" "主要儀器與設備" "ICP-MS電感耦合等離子體質譜儀Agilent7700X（美國安捷倫公司），配有MassHunter色譜-質譜聯用工作站，PRP-X100陰離子色譜柱和預處理柱（瑞士哈美頓公司），DCS-250H多功能數字超聲水浴儀（輔光儀器有限公司），MS105DU電子天平（梅特勒公司），MIlli-Q超純水機（美國默克公司）。

1.5" "試驗方法

1.5.1" "試樣提取" "將試驗用菌棒出耳后，摘下，烘干后粉碎機粉碎，過篩0.4 mm。

稱取試樣1 g于50 mL離心管中，加入10 mL緩沖液，室溫下在超聲水浴超聲30 min。取出加入25 mg蛋白酶，混勻，置于恒溫振蕩器中37 ℃，震蕩酶解20 h，取出，5 000 r/min下離心10 min，吸取2 mL上清液至10 mL容量瓶，加入流動相定容，過0.22 m濾膜，待測。

1.5.2" "儀器條件

1）液相色譜條件。C18色譜柱，4.6×150 mm，5 μm；流動相：15 mmol/L乙酸銨、0.4 mmol/L氫氧化四丁基銨，5%甲醇，pH5.5；流速：1.5 mL/min；洗脫程序：等度洗脫；洗針液：10%甲醇水溶液；進樣量：" 100 μL。

2）電感耦合等離子體質譜條件。等離子氣： 9 L/min；輔助氣：1.1 L/min；載氣：0.7 L/min；采樣深度：5 mm；碰撞氣：He，6 mL/min；霧室溫度：5 ℃。

2" "結果與討論

2.1" "應用液相色譜-電感耦合等離子體質譜法檢測Se形態" "基于液相色譜-電感耦合等離子體質譜聯用對目標木耳中硒形態進行基本形態分離以及檢測，可以將硒形態中SeMeCyS、SeMet、SeO32-以及SeO42-，在12 min中達到很好的分離。色譜圖見圖1。

2.2" "測試方法的線性關系，相關系數及檢出限" "以各個形態硒濃度的峰面積與對應質量濃度（表1）繪制出標準曲線圖譜（圖2），可以看出，在1～100 μg/L范圍內，各種形態硒的線性范圍良好，相關系數≥0.999 3。

按照相同儀器條件，以試劑空白為基準，連續測量11次，求出空白值的標準偏差，DL=3 SD/K（K為校正曲線斜率），計算出硒元素各形態檢出限為：硒代蛋氨酸3.5 μg/L，甲基硒代半胱氨酸4.6 μg/L，亞硒酸2.6 μg/L，硒酸3.6 μg/L。

2.3" "木耳樣品的測定及分析" "從測量結果可以看出（表2），木耳樣品中均含有SeMeCyS，其中1-3號樣品中甲基硒代半胱氨酸形態含量最高，部分樣品中含有SeMet形態，同樣是1-3號硒代蛋氨酸形態含量最高，木耳樣品中SeO32-、SeO42-形態硒含量均低于檢出限。

另外從部分樣品的圖譜（圖3）中發現除目標4種形態硒之外，還有其他的峰存在，可能存在其他形態硒，還要通過進一步試驗證明。

3" "結論

將不同濃度含硒水溶肥添加到木耳拌料中，采用蛋白酶提取法，結合液相色譜-電感耦合等離子體質譜法聯用技術測量目標木耳樣品中的SeMeCyS、SeMet、SeO32-、SeO42-的4種硒形態。分析發現，木耳中硒的形態甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸可以被檢出，通過提高賦肥濃度的配比，對木耳中有機硒的形態轉化有一定的影響。在木耳拌料中添加含硒水溶肥按照1 ： 700比例稀釋，SeMeCyS含量和SeMet形態含量最高。

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【基金項目】：遼寧省自然科學基金項目（2021-MS-074）。

崔暢，尤海丹，遼寧省重要技術創新與研發基地建設工程中心/遼寧省分析科學研究院，郵編110015（沈陽）；閆玉，遼寧省食品檢驗檢測院。

收稿日期：2024-06-13