17β-HSDs基因在乳腺癌組織中的表達及與其臨床病理特征的關系

魯碩君 李春青 田國防

乳腺癌屬于常見惡性腫瘤之一,主要好發于女性人群,同時也是引起癌癥死亡關鍵原因[1]。正常情況下,乳腺組織生長可以受到雌二醇激素(E2)異常上升的刺激[2]。相關研究顯示[3],E2水平異常增加有利于乳腺癌癌細胞的生長以及促進乳腺癌進展。17羥脫氫酶(17β-羥化類固醇脫氫酶,17β-HSDs)屬于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸/煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH/NAD+)依賴性還原酶,尤其在雌激素以及雄激素代謝中具有關鍵作用[3]。17β-HSDs家族迄今發現15種亞型,主要分為氧化亞型、還原亞型,其中氧化亞型主要有2型、4型、8型等,還原亞型主要有1型、3型、7型等[4]。還原亞型主要以NADPH為輔助因子,可將效力低的雌激素轉化為E2,而氧化亞型主要以NAD+為輔助因子,作用與之相反。目前有研究表示[5],17β-HSDs基因同工酶表達的平衡對于維持E2水平具有重要的作用,還可參與乳腺癌發生和發展。由此,探討17β-HSDs基因在乳腺癌中的作用至關重要。

1 材料與方法

1.1 組織標本的采集

選取2021年11月至2022年3月在我院治療的82例乳腺癌患者。獲取術中癌組織標本以及距離病灶組織約5 cm以外的癌旁組織標本作為研究對象。納入標準:①納入的研究對象均符合中國抗癌協會制定的2019版《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范》。其中關于乳腺癌的診斷標準[6];手術前均未進行過任何放化療以及免疫治療;均為女性;均進行規范性手術治療并且術后按照2019版《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范》予以標準治療;病例資料完整;均無合并其他原發性疾病。排除標準:合并重要臟器功能異常者;拒絕進行病理檢查的患者;伴有其他惡性腫瘤疾病史者;既往存在精神疾病史者;合并認知功能障礙者。納入的研究對象均同意手術過程中采集癌組織及癌旁組織標本。主要收集的臨床資料信息有性別、年齡、腫瘤分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移數目、病理類型、雌激素受體(ER)表達、人表皮生長因子受體-2(HER2)、孕激素受體(PR)及Ki67表達等。

標本保存:獲取上述癌組織及癌旁組織,4%多聚甲醛溶液固定,24 h后,采用高濃度乙醇溶液脫水處理,再予以二甲苯溶液清洗,石蠟包埋。

1.2 主要儀器與試劑

儀器:高倍鏡(廠家:olympus,型號:IXplore SpinSR)。試劑:4%多聚甲醛(上海鈺博生物科技有限公司);高濃度乙醇、二甲苯、蘇木素(北京譜析科技有限公司);石蠟(天根生化科技(北京)有限公司);PBS溶液(上海中喬新舟生物科技公司);1型和2型17β-HSDs抗體(北京西美杰科技有限公司)。

1.3 免疫組織化學染色法檢測組織內1型和2型17β-HSDs基因表達

獲取上述保存的癌組織及癌旁組織,切片,厚度為5 μm,脫蠟、水化,予以過氧化氫-甲醇溶液,15 min后,予以PBS溶液清洗后,分別予以比例為1∶500的1型和2型17β-HSDs抗體,于4 ℃下過夜,再加入比例為1∶200二抗抗體,室溫環境下孵育,4 h后,采用DAB-過氧化氫溶液浸泡,再予以蘇木精溶液,30 s后用自來水清洗,再加乙醇清洗,甲苯干預,封片。

結果判斷:組織相應部位呈現棕黃色或者棕色的顆粒表示陽性。陽性細胞率<10%記為0分;陽性細胞率10%～25%記為1分;陽性細胞率26%～70%記為2分;陽性細胞率>50%記為3分。≥2分記為陽性。

1.4 觀察指標

觀察1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達,1型與2型17β-HSDs基因相關性,1型和2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征的關系。

1.5 統計學分析

應用SPSS 25.0統計軟件,計數資料采用χ2檢驗,相關性分析采用Spearman等級相關檢驗,P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織及癌旁組織中表達

癌組織中1型和2型17β-HSDs基因陽性表達率(62.20%、65.85%)均高于癌旁組織,差異存在統計學意義(χ2=23.869,14.057,P均=0.000)。見表1。

表1 1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(例,%)

2.2 Spearman相關性分析1型和2型17β-HSDs基因

Spearman相關性結果顯示,1型與2型17β-HSDs基因陽性表達之間呈負相關性(γ=-0.322,P=0.003)。

2.3 1型和2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征的關系

乳腺癌患者不同腫瘤分期、不同腫瘤直徑、不同ER、PR、HER2狀態1型17β-HSDs基因陽性表達率比較,差異存在統計學意義(P<0.05);不同年齡、病理類型、淋巴結轉移數目1型17β-HSDs基因陽性表達率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。

不同腫瘤分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移數目、ER、PR、HER2狀態的2型17β-HSDs基因陽性表達率比較,差異存在統計學意義(P<0.05);不同年齡、病理類型、Ki67的1型和2型17β-HSDs基因陽性表達率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 1型和2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征的關系/例

3 討論

17β-HSDs基因家族與乳腺癌相關的因子主要有1型、2型等[7]。本次研究主要探討1型、2型17β-HSDs基因在乳腺癌中的作用。研究稱[8],1型17β-HSDs基因通過酶轉化E1在原位提供E2中發揮重要作用,進而刺激雌激素依賴性細胞的增殖。1型17β-HSDs基因可存在于多種乳腺癌組織[9]。2型17β-HSDs基因與1型作用相反,可催化E2到E1,且與1型17β-HSDs基因比較,2型17β-HSDs基因轉化為E2的活性更低,主要通過調節E1與E2之間的平衡,從而發揮對乳腺上皮細胞的保護作用[10]。但目前關于2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織內的表達依舊存在質疑。

本次研究結果發現,癌組織1型和2型17β-HSDs基因陽性表達率62.20%、65.85%均高于癌旁組織,提示1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織內表達較高。進一步觀察發現,1型和2型17β-HSDs基因陽性表達率之間呈現負相關性,此項研究結果符合1型和2型17β-HSDs基因在E1及E2相互轉化中的作用。進一步分析1型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征關系,發現ER陽性及Ki67表達率高者1型17β-HSDs基因陽性表達率更高。ER、PR表達可用于預測乳腺癌患者的預后,一般將其作為關鍵診療依據,ER/PR陽性者,可以采用內分泌治療,且患者預后較好[11]。Ki67屬于關鍵細胞增殖標志物,正常情況下,接受新輔助化療的患者,Ki67表達較低[12]。由此,檢測Ki67表達可預測療效。而本研究Ki67表達率高者中1型17β-HSDs基因明顯較表達率低者更高,說明1型17β-HSDs基因可以成為預測乳腺癌患者療效的指標[13]。另外本研究結果還發現,腫瘤分期越高及腫瘤直徑越大的患者1型17β-HSDs基因陽性表達反而較低,說明1型17β-HSDs基因陽性可能主要存在于惡性程度低且腫瘤直徑小的患者。HER2狀態對于指導乳腺癌抗HER2治療具有重要作用[14]。本研究發現HER2表達越高者1型17β-HSDs基因陽性表達也較低,提示1型17β-HSDs基因可以成為乳腺癌患者抗HER2治療后預測預后的指標。

觀察2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征關系,發現不同腫瘤分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移數目、ER、PR、HER2狀態的2型17β-HSDs基因陽性表達率比較,存在統計差異,且腫瘤分期越高、腫瘤直徑越大、淋巴結轉移數目越多者2型17β-HSDs基因陽性表達率越高。進一步說明與浸潤性小葉癌比較,2型17β-HSDs基因更容易表達在浸潤性導管癌患者,同時也提示2型17β-HSDs基因在惡性程度高、腫瘤直徑大且淋巴結轉移數目多的患者中表達更高[15]。同時還發現ER、PR陽性中2型17β-HSDs基因陽性表達率反而較低,提示2型17β-HSDs基因陽性表達的乳腺癌患者,采用內分泌治療,效果可能不太理想。

綜上所述,1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織中均呈現高表達,且與臨床病理參數有關,臨床上通過檢測1型和2型17β-HSDs基因表達,有利于了解乳腺癌疾病發病機制,還可作為預測患者預后依據。本次研究也存在不足,關于乳腺癌病理特征指標與1型和2型17β-HSDs基因陽性表達率的相關性還需要進一步探討,同時17β-HSDs家族中包括多種亞型,是否存在其他亞型也與乳腺癌病理特征有關值得深入研究。