胃腸道間質(zhì)瘤組織病理特征下沉默信息調(diào)節(jié)因子1的表達及其對預后的影響

吳慰霖, 鄭曉梅, 周明先

(1黃山首康醫(yī)院病理科, 安徽 黃山 245000; 2池州市人民醫(yī)院病理科, 安徽 池州 247000)

沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent information regulators-1,SIRT1)隸屬于Sirtuins蛋白家族,具有去乙酰化酶活性,可參與基因調(diào)控、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生過程[1]。SIRT1 在多種腸道疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉歸中扮演著重要角色,如膿毒癥腸損傷、腸缺血再灌注損傷、放射性腸損傷、腸道炎癥性疾病等[2]。研究證實,在腫瘤中SIRT1的表達失調(diào)在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到關鍵作用[3]。SIRT1 通過參與DNA損傷或氧化應激反應,調(diào)節(jié)癌細胞的增殖與凋亡生理過程,氧化應激條件下,SIRT1可以使細胞避免受到氧化應激依賴DNA誘導的病理損傷[4]。已有研究認為,SIRT1在胃癌組織及細胞中均呈現(xiàn)高表達,與胃癌患者年齡、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移等有關,在胃癌中可充當癌基因角色[5]。SIRT1在結直腸癌中陽性表達較高,與腫瘤直徑有關[6]。胃腸道間質(zhì)瘤(Gastrointestinal stromal tumors,GIST)是一種軟組織肉瘤,好發(fā)于全消化道,臨床表現(xiàn)為出血、疼痛或腸梗阻[7]。胃與小腸是好發(fā)最多的部位,也可發(fā)生于胃腸道以外、網(wǎng)膜或腸系膜[8]。經(jīng)過治療后GIST一般預后較好,但有高危因素者仍會復發(fā)[9]。 本研究探討胃腸道間質(zhì)瘤(Gastrointestinal stromal tumors,GIST)病理特征下沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1,SIRT1)的表達及其對預后的影響,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2016年1月-2017年12月黃山首康醫(yī)院就診并治療的GIST患者資料,根據(jù)納入標準與排除標準共篩選52例患者入組。納入標準:在黃山首康醫(yī)院院進行手術治療或術后病理診斷為GIST;術前未接受其他手段治療;臨床資料及病理資料完整;無其他惡性腫瘤、內(nèi)分泌系統(tǒng)等疾病。排除標準:發(fā)生在食管、腹腔等少見部位的間質(zhì)瘤;不能配合研究及隨訪;患有精神及認知障礙性疾病;接受過化療、放療等其他全身性輔助治療。所有患者根據(jù)2008年改良的美國國立衛(wèi)生研究所(National institutes of health,NIH)共識標準[10]對GIST危險程度進行分級。極低危險性:腫瘤大小≤2 cm,核分裂象計數(shù)≤5個/50 HPF;低度危險性:腫瘤大小>2 cm且≤5 cm,核分裂象計數(shù)≤5個/50 HPF;中度危險性:腫瘤大小>5 cm且≤10 cm,核分裂象計數(shù)≤5個/50HPF;高度危險性:腫瘤大小>10 cm,核分裂象計數(shù)≥5個/50HPF。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色 將手術中獲得的腫瘤組織及腫瘤旁組織(距離原發(fā)灶>3 mm)制作成石蠟切片,常規(guī)脫蠟,將切片放在盒中,倒入3%過氧化氫,浸滿切片,保持室溫靜置10 min,以滅活內(nèi)源性酶。倒出過氧化氫,盒中倒入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液,高壓3 min,冷卻20 min,以修復抗原。滴加5%BSA封閉液,室溫下孵育10 min。滴加一抗SIRT1在4℃下過夜孵育,PBS洗滌2 min。滴加山羊抗兔IgG,保持37℃孵育30 min,PBS洗滌2 min。添加辣根過氧化物酶偶聯(lián)的鏈霉卵白素,PBS洗滌5 min。添加DAB染色液,并使用蘇木素進行復染。脫水、透明、封片,在顯微鏡下進行觀察。

1.2.2 免疫組織化學染色結果判定 在腫瘤細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色為SIRT1染色陽性。細胞染色強度計分:無色,計0分;淺黃色,計1分;棕黃色,計2分;棕褐色,計3分。陽性細胞比例計分:無陽性細胞,計0分;陽性細胞<25%,計1分;陽性細胞25%～50%,計2分;陽性細胞50%～75%,計3分;陽性細胞>75%,計4分。染色強度計分與陽性細胞數(shù)比例計分相乘:陰性=0分,弱陽性=1～3分,中陽性=4～8分,強陽性=9～12分[11]。0分被認定為陰性,1分及以上被認定為陽性。

1.2.3 隨訪方式與時間 根據(jù)患者來院復診情況進行隨訪,或電話隨訪詢問患者情況,隨訪5年,至2022年12月結束記錄患者生存狀況與生存時間。

2 結果

2.1 GIST組織中SIRT1的表達免疫組化染色顯示,SIRT1主要在細胞核中表達,癌旁組織中SIRT1蛋白陽性表達率為15.38%(8/52),癌組織中SIRT1蛋白陽性表達率為73.08%(38/52)。卡方檢驗分析顯示癌組織與癌旁組織中SIRT1蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義(χ2=35.08,P<0.001)。癌組織中陰性、弱陽性、中陽性和強陽性的例圖見圖1。

陽性

2.2 GIST患者不同臨床病理特征下SIRT1的表達與SIRT1陰性組腫瘤直徑比較,陽性組更大。SIRT1陽性組中核分裂象<5個/50HPF、Ki-67增殖指數(shù)<5%、極低危險性/低度危險性的患者占比顯著少于陰性組,而≥5個/50HPF、Ki-67增殖指數(shù)≥5%、中度危險性/高度危險性患者占比顯著多于陰性組(P均<0.05)。SIRT1與患者性別、年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、腫瘤部位差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 GIST患者不同臨床病理特征下SIRT1的表達/例(%)

2.3 生存分析5年隨訪結束時,共死亡15例,存活37例。SIRT1陰性表達患者存活14例,死亡1例,SIRT1陰性表達患者存活23例,死亡14例,SIRT1陰性表達患者存活率顯著高于陽性表達患者(93.33% vs 62.12%)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖2。

圖2 SIRT1陰性表達組與陽性表達組患者的生存曲線分析

2.4 GIST患者預后的多因素分析將與SIRT1有關的臨床病理特征(患者腫瘤直徑、核分裂象、Ki-67增殖指數(shù)、危險程度)納入Cox回歸模型中進行多因素分析,模型分析結果顯示SIRT1陽性表達、Ki-67增值指數(shù)≥5%、中/高危險程度是GIST患者預后不良的影響因素(P均<0.05),見表2。

表2 GIST患者預后的影響因素

3 討論

SIRT1屬于與沉默信息調(diào)節(jié)器2同源的親屬家族的沉默信息調(diào)節(jié)器2(SIR2)基因的同源物,在哺乳動物中,已經(jīng)確定了7個sirtuins(SIRT1-7),Sirtuis可以在亞細胞區(qū)間穿梭,其中SIRT1是研究最多的sirtuin[12-13]。本研究顯示SIRT1在GIST組織中的陽性表達率顯著高于腫瘤旁組織,SIRT1陽性組腫瘤直徑顯著大于陰性組,且SIRT1與患者核分裂象、Ki-67增殖指數(shù)、危險程度均有關,說明在GIST中SIRT1可能作為促進因子發(fā)揮作用。SIRT1作為腫瘤抑制因子和腫瘤促進因子的意義尚不明確,該矛盾的形成主要因為細胞類型與SIRT1定位不同。一方面,SIRT1在各種腫瘤中表達水平升高,其控制細胞衰老和衰老的功能與腫瘤的發(fā)展有關,SIRT1可以激活癌基因,創(chuàng)造有利于腫瘤生存和進展的微環(huán)境。另一方面,越來越多的證據(jù)表明SIRT1的突變對腫瘤的發(fā)生具有一定的積極作用,包括基因組穩(wěn)定性、炎癥和腫瘤細胞凋亡[14-15]。SIRT1可能抑制癌癥形成或促進癌癥進展,這取決于細胞環(huán)境[13]。研究證實SIRT1在一些癌細胞中上調(diào),如原發(fā)性結腸癌、前列腺癌、黑色素瘤和非黑色素瘤皮膚癌,肝細胞癌、乳腺癌中則發(fā)現(xiàn)其表達下調(diào)[16]。已有研究證明抑制SIRT1在癌細胞中的表達能降低食管癌細胞侵襲與增殖[17]。

本研究顯示,SIRT1陽性表達患者存活率顯著低于陰性表達患者,提示,SIRT1陽性表達可導致GIST患者預后不良。有研究證實,SIRT1在胃癌組織中的陽性率高于正常胃組織,SIRT1陽性的患者2年生存率較低,其是預后較差的獨立危險因素[18];SIRT1與胃癌患者腫瘤復發(fā)轉移也密切相關[19];SIRT1可能通過沉默抑癌基因促進賁門癌的形成[20]。

綜上所述, GIST患者臨床病理特征影響SIRT1的表達,且SIRT1陽性表達可導致GIST 患者預后不良。但是本研究還存在以下局限性和不足之處:首先,研究樣本數(shù)量較小,需要進一步擴大樣本量;其次,本研究是單中心研究,為了確保研究結果的可靠性,需要多中心進行復制驗證;最后,本研究只側重研究了SIRT1對GIST的影響,未對其他因素如GIST的特征和分子標志物進行研究,還有待進一步深入探究。