Tubastatin A通過降低氧化應激減輕膿毒癥所致心肌損傷的體外研究

尤佳琪，劉暢，崇巍

（中國醫科大學附屬第一醫院急診科，沈陽 110001）

研究［1］顯示，40%～50%膿毒癥患者可發生心肌抑制，其中的7%會發生心力衰竭。目前，對于膿毒癥所致心功能障礙的機制尚未明確，普遍認為心肌抑制與膿毒癥時的炎癥介質、線粒體功能障礙和氧化應激損傷等有關，但確切機制仍不清楚［2］。生理條件下，心臟組織中活性氧 （reactive oxygen species，ROS）生成很少［3］，然而在缺氧、高糖、炎癥等刺激下ROS大量產生［3-6］。膿毒癥時，循環中病原體相關分子模式 （pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）、損傷相關分子模式 （damage-associated molecular patterns，DAMPs） 共同作用于心肌細胞［7］，通過誘導胞內的黃嘌呤氧化酶 （xanthine oxidase，XO）、NADPH氧化酶 （NADPH oxidase，NOX） 活化和線粒體損傷產生ROS［8］。過量的ROS引起心肌細胞氧化應激損傷［9］。Tubstatin A （Tub A） 是組蛋白去乙酰化酶6 （histone deacetylase 6，HDAC6） 選擇性抑制劑［10］，本課題組密歇根大學合作伙伴發現Tub A可以提高致死性膿毒癥大鼠的遠期生存率［11］。有研究［12-16］表明，Tub A可以減少心肌細胞、星形膠質細胞、乳腺上皮細胞等ROS的產生，減輕炎癥反應，從而對細胞發揮保護作用。

本研究應用脂多糖 （lipopolysaccharide，LPS） 刺激巨噬細胞獲得細胞上清液，用其刺激心肌細胞，建立體外膿毒癥心肌損傷模型，并用Tub A進行干預，探討Tub A對膿毒癥心肌細胞氧化應激損傷的作用。

1 材料與方法

1.1 細胞培養及分組

RAW264.7巨噬細胞購自美國ATCC公司，培養條件為完全培養基 （DMEM高糖培養基+10%FBS+1%青鏈霉素），37 ℃，5% CO2以及飽和濕度孵箱。巨噬細胞生長達80%左右接觸率時饑餓培養 （DMEM高糖培養基+0.5%FBS+1%青鏈霉素） 過夜，用1 μg/mL LPS （L8247，美國Sigma公司） 刺激8 h后取上清液獲得心肌細胞培養基 （MCM組）；用無LPS刺激的巨噬細胞8 h后取上清液獲得心肌細胞培養基 （Sham組），兩種上清液4 ℃保存備用。……