基于miRNA-mRNA調控網絡探討miR-34a-5p靶向Hh通路對LX2細胞增殖的影響

任真，馬燕花，王莉，王愛娣，趙秀萍

（甘肅中醫藥大學 1. 信息工程學院信息工程教研室； 2. 第一臨床醫學院內科學教研室，蘭州 730000）

肝纖維化是多種病因導致的慢性肝臟疾病，其發生機制相對復雜，核心環節為異常活化的肝星狀細胞 （hepatic stellate cell，HSC）［1］。刺猬 （hedgehog，Hh） 信號通路在調節肝臟的生長和修復中起關鍵作用，研究［2］表明Hh信號通路與HSC活化密切相關，其在肝纖維化中表達普遍上調，是肝纖維化發展的決定因素之一。微RNA （microRNA，miRNA） 通過靶向Hh信號通路參與肝纖維化過程和HSC活化［3］。已有研究［4］證明miR-34a可通過靶向長鏈脂酰CoA合成酶1 （long-chain acyl-CoA synthetase 1，ACSL1） 在HSC表型調控中發揮促肝纖維化功能，參與肝纖維化進程。研究［5］表明在相關酒精誘導的肝纖維化和肝細胞凋亡中miR-34a-5p表達增加。本課題組前期通過生物信息學方法篩選人肝星狀LX2細胞中差異表達miRNA靶向Hh信號通路相關靶基因，構建miRNA-mRNA調控網絡，獲得核心miRNA （miR-34a-5p）。本研究通過細胞實驗過表達miR-34a-5p，探討其對轉化生長因子-β1 （transforming growth factor-β1，TGF-β1） 誘導LX2活化的影響，同時運用Hh信號通路抑制劑環靶明脂進行干預，進一步探討miR-34a-5p的靶向調控作用，為肝纖維化的防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、藥品與試劑

人肝星狀LX2細胞購自中國北納創聯公司。環靶明脂 （4449-51-8） 購自美國MCE公司；凋亡試劑盒FITC-PI （40302ES60） 、Hifair?Ⅱ1st Strand cDNA Synthesis Kit （gDNAdigester plus） （11121ES60） 均購自中國Yeasen公司；引物購自美國ThermoFisher公司；RNAiso plus 購自日本TaKaRa公司；兔來源一抗腦膠質瘤相關癌基因 1 （glioma related oncogene homology 1，Gli1） 、α-平滑肌肌動蛋白 （α-smooth muscle actin，α-SMA） 購自中國華安公司；兔來源一抗腦膠質瘤相關癌基因 2 （glioma related oncogene homology-2，Gli2） 、Ⅰ型膠原 （type Ⅰ collagen，Col-Ⅰ） 以及小鼠來源一抗聲波刺猬 （sonic hedgehog，Shh） 均購自美國Affinity公司；兔來源內參一抗β肌動蛋白 （beta-actin，β-actin） 購自英國Abcam公司；……